目的：观察气血并治方有效组分对缺氧/复氧（H/R）损伤心肌细胞一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）相关糖脂代谢通路的作用机制。方法：分离、提取、培养出生1~2 d SD乳鼠原代心肌细胞,于常规倒置相差显微镜下观察原代心肌细胞形态及生...目的：观察气血并治方有效组分对缺氧/复氧（H/R）损伤心肌细胞一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）相关糖脂代谢通路的作用机制。方法：分离、提取、培养出生1~2 d SD乳鼠原代心肌细胞,于常规倒置相差显微镜下观察原代心肌细胞形态及生长状态,经α-横纹肌辅肌动蛋白（α-actinin）免疫荧光染色鉴定为心肌细胞后,进行缺氧3 h复氧2 h处理制作H/R损伤模型,随机分为正常组（正常氧）,模型组（缺氧/复氧）,曲美他嗪组（缺氧/复氧＋100μmol·L-1盐酸曲美他嗪,TMZ）,气血并治方有效组分组（缺氧/复氧＋1 mmol·L-1气血并治方有效组分,CWQB）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）测定AMPK代表性亚基心肌一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶α（AMPKα）,及其糖代谢通路中葡萄糖转运体4（GLUT4）,磷酸果糖激酶2（PFK2）,脂肪酸代谢通路中乙酰辅酶A羧化酶（ACC2）,脂肪酸移位酶（FAT/CD36）的基因及蛋白表达情况。结果：与正常组比较,模型组,TMZ组,CWQB组的AMPKα,GLUT4,PFK2基因和蛋白表达上调,ACC2,FAT/CD36基因和蛋白表达下调（P〈0.05）;与模型组比较,TMZ组,CWQB组AMPKα,GLUT4,PFK2,ACC2,FAT/CD36基因和蛋白表达均上调（P〈0.05）,其中TMZ组上调AMPKα,FAT/CD36基因和蛋白,上调GLUT4,PFK2基因表达的效果更为显著（P〈0.05）。结论：气血并治方有效组分可以激活H/R损伤心肌细胞的AMPK信号通路,增强GLUT4介导的葡萄糖转送,PFK2参与的糖酵解,同时促进FAT/CD36调控的脂肪酸转运,上调ACC2抑制脂肪酸氧化过程,进而提高缺氧/复氧条件下心肌细胞对葡萄糖、脂肪酸等产能底物的利用能力,改善H/R损伤心肌细胞的能量代谢。展开更多
