硬尖神香草提取物对哮喘幼鼠气道重塑的作用机制

目的探讨硬尖神香草提取物通过转化生长因子-β_(1)(transforming growth factor-β_(1),TGF-β_(1))/母亲信号蛋白同源物(Mothers against decapentaplegic homologs,Smads)通路调控上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)对哮喘幼鼠气道重塑的作用。方法将幼鼠随机分为模型组、硬尖神香草(提取物)低剂量组(25 mg·kg^(-1))和硬尖神香草高剂量组(50 mg·kg^(-1))及阳性药物组(二羟丙茶碱,20 mg·kg^(-1)),各20只,另设对照组。比较支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)各类炎症细胞数及细胞因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,HE染色观察肺组织病变,比较肺组织气道壁、平滑肌厚度,对比E钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、TGF-β_(1)、母亲信号蛋白同源物2(Mothers against decapentaplegic homolog 2,Smad2)以及母亲信号蛋白同源物3(Smad3)mRNA与蛋白的表达水平。结果与对照组比较,模型组嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)、中性粒细胞(neutrophil,NEU)、淋巴细胞(lymphocyte,LYM)细胞数、支气管气道壁、平滑肌厚度、IL-4、TNF-α、MMP-9水平以及α-SMA、TGF-β_(1) mRNA与α-SMA、TGF-β_(1)、p-Smad2和p-Smad3蛋白水平均升高,E-cadherin mRNA与蛋白水平降低(P<0.05);与模型组比较,硬尖神香草低剂量组和高剂量组、阳性药物组的EOS、NEU、LYM细胞数、支气管气道壁、平滑肌厚度、IL-4、TNF-α、MMP-9以及E-cadherin mRNA和蛋白水平均升高,α-SMA、TGF-β_(1) mRNA、α-SMA、TGF-β_(1)、p-Smad2与p-Smad3蛋白水平均降低(P<0.05);且各指标水平变化规律是阳性药物组最明显,硬尖神香草高剂量组次之,硬尖神香草低剂量组最弱(P<0.05);HE结果显示,硬尖神香草低剂量和高剂量组、阳性药物组肺组织支气管气道损伤较模型组出现不同程度改善,硬尖神香草高剂量组和阳性药物组改善明显。结论硬尖神香草提取物能有效抑制哮喘幼鼠气道重塑,可能通过调控TGF-β_(1)/Smads通路调控相关mRNA和蛋白的表达,抑制EMT发挥作用。

维药神香草提取物对Ⅰ型糖尿病小鼠血糖及糖耐量的影响

目的观察维药神香草提取物对糖尿病小鼠血糖及糖耐量的影响。方法腹腔注射四氧嘧啶法建立小鼠Ⅰ型糖尿病模型,模型成功的小鼠随机分为模型组、SXC大剂量组(200mg/kg)、SXC中剂量组(100mg/kg)、SXC小剂量组(50mg/kg)和阿卡波糖(113mg/kg)组,每组10只。另选10只未注射STZ的正常ICR小鼠为正常对照组,各组小鼠给予不同的药物或蒸馏水处理,共计7d,血糖试纸法测定血糖,观察神香草提取物对糖尿病小鼠血糖的影响,同时进行葡萄糖耐量试验(OGTT),观察香草提取物对糖尿病小鼠糖耐量的改善作用。结果神香草提取物可明显增加糖尿病小鼠的体质量(P<0.05或P<0.01),降低Ⅰ型糖尿病小鼠的血糖,并明显改善其糖耐量,三者均显示出一定的量-效关系。结论神香草提取物具有较好的降血糖和改善异常糖耐量的作用,可用于临床治疗糖尿病。

硬尖神香草化学成分研究

目的:研究硬尖神香草的化学成分。方法:采用大孔树脂、硅胶、ODS RP-18和Sephadex LH-20柱对硬尖神香草进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果:从硬尖神香草中分离得到6个化合物,分别鉴定为:咖啡酸甲酯(1)、木犀草素7-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、木犀草素7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(3)、香叶木苷(4)、金合欢素7-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→6)-β-D-葡萄糖苷(5)、迷迭香酸(6)。结论:其中,化合物1、4和6为首次从该植物中分离得到,化合物2、3和5为首次从该属植物中分离得到。

硬尖神香草挥发油化学成分研究

硬尖神香草(Hyssopus Cuspidatus Boriss.)属唇形科植物,分布在新疆北部广大地区,是新疆维吾尔族医用药“祖发”来源之一。有关硬尖神香草挥发油的化学成分,文献记载主要含l-蒎茨酮(l-Pinocamphone),全草挥发油经分离纯品,波谱鉴定确证主要成分为d-松香芹酮(d-Pinocarvone),与文献记载不一致。同时分离得l-蒎莰酮、β-蒎烯和1。

超声辅助水蒸气蒸馏提取硬尖神香草精油的工艺优化

以精油得率为指标,采用单因素实验和正交实验对超声辅助水蒸气蒸馏提取硬尖神香草精油的工艺条件进行了优化,确定最优工艺条件为:超声频率60 kHz、超声时间30 min、料液比1∶6(g∶mL)、提取时间3 h,在此条件下,精油得率为1.37%。与常规水蒸气蒸馏法(1.12%)相比,超声辅助水蒸气蒸馏提取硬尖神香草精油的得率提高了22.32%,且时间短,操作简单,适合规模化生产。

神香草不同洗脱物对豚鼠离体气管平滑肌收缩的影响

目的:考察维药神香草不同洗脱物对豚鼠离体支气管平滑肌收缩的影响。方法:制备豚鼠离体气管环后浸泡于克-亨液中,以乙酰胆碱(ACh,1×10^(-7)g/mL)或组胺(His,1×10^(-6)g/mL)致气管环收缩,然后分别考察质量浓度为0.08、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56 mg/mL的神香草水洗脱物和30%、50%、60%、70%、95%的乙醇洗脱物对气管环收缩的影响,记录收缩曲线并计算解痉率;试验均以生理盐水为空白对照,以氨茶碱(0.08 mg/mL)为阳性对照。结果:与空白对照比较,0.16~2.56 mg/mL的30%、50%乙醇洗脱物,0.32~2.56 mg/mL的60%乙醇洗脱物以及0.64~2.56 mg/mL的70%、95%乙醇洗脱物均可明显抑制ACh致气管环收缩,解痉率均明显升高(P<0.05或P<0.01);0.32~2.56 mg/mL的水洗脱物和30%、50%乙醇洗脱物,0.16~2.56 mg/mL的60%、70%乙醇洗脱物以及1.28~2.56 mg/mL的95%乙醇洗脱物可明显抑制His致气管环收缩,解痉率均明显升高(P<0.05或P<0.01);其中2.56 mg/mL的60%乙醇洗脱物作用效果与氨茶碱接近。结论:神香草不同洗脱物对ACh或His致豚鼠离体支气管平滑肌收缩均有一定的抑制作用;其中以60%乙醇洗脱物作用最强,其在高质量浓度下作用与氨茶碱相当。

HPLC法测定维药硬尖神香草中芦丁含量

采用高效液相色谱(HPLC)法测定硬尖神香草中芦丁含量。色谱条件为:Hypersil ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),柱温30℃,流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸(B),梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长354 nm,进样量10μL。结果表明,芦丁浓度在0.004 12~0.020 60 mg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系;硬尖神香草中芦丁含量为0.146 mg·g^(-1)。采用HPLC法测定硬尖神香草中芦丁含量准确可靠,为制定硬尖神香草质量控制标准提供了依据。

基于ITS2序列的维吾尔药材神香草鉴定研究

目的:采用DNA条形码技术建立维吾尔药材神香草鉴别的方法。方法:使用DNA条形码ITS2序列,建立了维吾尔药材神香草基原植物DNA条形码ITS2序列标准数据库,对市售11份"神香草"药材进行鉴定。结果:市售神香草药材仅有2份为维吾尔药材标准中收录的硬尖神香草,1份为神香草属植物,1份为鼠尾草属植物,其余7份来源于荆芥属植物。结论:DNA条形码ITS2序列可作为鉴定维吾尔药材神香草及其伪品药材的有效工具。

硬尖神香草与宽唇神香草挥发油的GC-MS分析

目的研究硬尖神香草与宽唇神香草挥发油化学成分及相对含量。方法采用水蒸气蒸馏法提取神香草挥发油成分,采用气相色谱-质谱联用技术,结合质谱图库检索对分离的化合物进行结构分析。结果硬尖神香草挥发油中检测到化学成分48个,松香芹酮为主要化学成分(26.73%),宽唇神香草挥发油中检测到化学成分45个,D-柠檬烯为主要化学成分(29.14%)。结论硬尖神香草与宽唇神香草挥发油的化学成分差异较大,其药用价值需进一步深入研究。

HPLC法测定维药神香草及混淆品大苞荆芥中齐墩果酸与熊果酸

目的建立维药神香草及习用品大苞荆芥中主要活性成分齐墩果酸和熊果酸定量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱为YMC-ODS-A C18（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为甲醇-0.05 mol/L乙酸铵（85∶15）,体积流量1.0 m L/min;检测波长210 nm;柱温45℃。结果神香草中熊果酸与齐墩果酸在80-480μg（r=0.999 7）、3.5-51.8μg（r=0.999 5）范围内,大苞荆芥中在5-100μg（r=0.999 7）、2-64μg（r=0.999 8）范围内两者均有良好的线性关系,平均回收率与RSD均符合要求。结论该方法简单、快捷、准确可靠,可为神香草及混淆品药材的质量控制提供依据。

HPLC法测定维药硬尖神香草中齐墩果酸的含量

目的建立HPLC测定新疆维药硬尖神香草中齐墩果酸含量的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为CoLumn:XB C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05 moL/L乙酸铵(83∶17),流速1.0mL/min,检测波长210nm,进样体积10μL,柱温45℃。结果在此液相条件下齐墩果酸与其他成分分离良好,齐墩果酸浓度在0.038~0.19μg/μL范围内线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率为101.2%,RSD为2.18%,硬尖神香草中齐墩果酸含量为2.61mg/g。结论本方法简便、快捷、准确,适用于硬尖神香草中齐墩果酸的含量测定。

维药神香草挥发油化学成分的研究

目的分析神香草药材中挥发油的化学组分。方法用气相色谱-质谱联用技术系统分析神香草中挥发油的成分,每一组分根据峰面积归一法计算其含量。结果共鉴定出36种成分,占总油量的96%,其中D-大叶香根烯的含量最高,达18.67%。结论D-大叶香根烯可作为同属植物鉴别的依据。

神香草挥发油对急性炎症的作用

目的探讨神香草挥发油(HEO)对急性炎症的抑制作用及其作用机制。方法昆明种小鼠40只,建立急性炎症疾病动物模型,随机分成模型对照组(0.9%氯化钠溶液)、阿司匹林组(200mg·kg^-1)和HEO大剂量组(0.4mL·kg^-1)、小剂量组(0.2mL·kg^-1),每组10只。采用二甲苯致炎法观察小鼠耳肿胀度和肿胀抑制率,Griess法检测小鼠血清一氧化氮(NO)含量、硫代巴比妥酸(TBA)法检测小鼠血清丙二醛(MDA)含量,紫外分光光度法检测前列腺素E2(PGE2)含量。结果在耳肿胀炎症模型中,致炎后各组小鼠右耳立刻出现明显红肿现象,阿司匹林组、HEO大剂量组与小剂量组都有很明显的抗炎作用,HEO大剂量组平均肿胀抑制率为57.96%;HEO在实验浓度范围内可明显降低二甲苯致小鼠的耳廓肿胀度(P<0.01);与模型对照组比较,阿司匹林组、HEO组的MDA含量明显降低(P<0.01),PGE2含量明显降低(P<0.05);HEO大剂量组NO含量明显降低(P<0.0.5)。结论HEO对二甲苯所致急性炎症具有一定的抑制作用,其作用机制可能与降低MDA、PGE2和NO含量有关。

维药神香草提取物体外抗炎作用的谱效关系研究

目的:为阐明维药神香草抗炎作用的药效物质基础提供参考。方法:采用高效液相色谱法建立神香草8个不同极性提取物的指纹图谱;以巨噬细胞RAW264.7为研究对象,考察神香草不同极性提取物对细胞培养上清液中炎症因子一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的抑制作用,比较其体外抗炎活性的差异性;采用灰色关联分析法分析指纹图谱共有峰的峰面积与抗炎活性的谱-效关系。结果:神香草8个不同极性提取物的指纹图谱具有明显的差异。体外抗炎结果提示,神香草30%乙醇提取物对体外炎症因子的抑制作用最强。对其建立的HPLC指纹图谱有共有峰14个,与体外炎症因子的抑制作用关系密切的5个共有峰分别为8、6、5、10、13号,其中8号峰为迷迭香酸。结论:所建立的指纹图谱及其与体外抗炎活性的谱效关系可为该药材的药效物质基础研究提供一定参考。

维药罗欧咳祖帕抗哮喘活性评价和作用机制研究

目的:通过药效学评价、网络药理学和分子对接等研究方法探讨维药罗欧咳祖帕(LKZP)治疗哮喘的潜在功效成分和作用机制。方法:采用卵蛋白(OVA)诱导的哮喘模型小鼠研究LKZP抗哮喘的活性;整理出文献中LKZP的化学成分,预测其符合Lipinski规则化合物的作用靶点,并与哮喘疾病靶点进行交集分析,从而确定LKZP抗哮喘的治疗靶点。采用String数据库构建治疗靶点的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,确定该网络中的核心靶点,并利用DAVID平台对核心靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,采用Cytoscape软件构建成分-靶点-信号通路的网络,采用分子对接的方法计算关键活性成分与靶点之间的结合能。结果:LKZP中共有潜在的活性化合物136个和841个作用靶点,而其核心靶点共66个。网络拓扑结构分析表明,LOKZP的核心治疗靶点为MAPK1、EGFR、MAPK3、PIK3CA、AKT1、PIK3CB、PIK3CD、PIK3R1和PRKCA等,而其作用的信号通路主要包含与调节气道炎症相关的PI3K-AKT信号通路、ErbB信号通路和雌激素信号通路,以及与调节气道重塑相关的HIF-1信号通路、VEGF信号通路和钙信号通路。分子对接的结果表明关键活性成分与靶点之间能较强结合。结论:LKZP中的关键活性成分倍半萜类、黄酮类和苯丙素类成分通过多靶点和多通路的方式调节气道炎症和气道重塑,从而发挥治疗哮喘的作用。

硬尖神香草的化学成分研究

目的:研究硬尖神香草的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、薄层色谱、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶色谱及制备高效液相色谱等方法对硬尖神香草抗哮喘活性部位进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定化合物结构。结果:从硬尖神香草提取物中分离得到16个化合物,分别鉴定为:3′-methoxy-vittarilide-B(1)、蓟黄素(2)、8-羟基蓟黄素(3)、三裂鼠尾草素(4)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(5)、蒙花苷(6)、咖啡酸(7)、阿魏酸(8)、反式4-羟基-3-甲氧基肉桂酸羧甲酯(9)、丁香酚苷(10)、4-羟基苯乙醇(11)、肉桂酸甲酯(12)、反式阿魏酸甲氧基羰基甲酯(13)、迷迭香酸(14)、迷迭香酸甲酯(15)、皮树脂醇(16)。结论:其中,化合物1为首次从天然界发现的新化合物,化合物2、3、5、6、9~13、16为首次从该植物中分离得到。

硬尖神香草三萜类化学成分研究

目的:对硬尖神香草三萜类化学成分进行研究。方法:采用硅胶、ODS-A和Sephadex LH-20凝胶柱进行分离纯化,通过波谱数据与文献对照鉴定化合物结构。结果:从硬尖神香草中分离得到8个化合物,分别鉴定为:熊果酸(1)、20β-羟基熊果酸(2)、3β,23-二羟基-乌索12-烯-28-酸(3)、2α,3α-二羟基-乌索12-烯-28-酸(4)、2α,3β,19α-三羟基-乌索12-烯-28-酸(5)、山楂酸(6)、齐墩果酸(7)、β-谷甾醇(8)。结论:其中,化合物2~6为首次从该植物中分离得到。

神香草提取物抗炎作用机制研究

目的:研究神香草40%乙醇洗脱物对LPS诱导下小鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)的抗炎作用机制。方法:通过脂多糖(LPS)刺激RAW264.7建立炎症模型,检测神香草40%乙醇洗脱物对RAW264.7细胞一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、乳酸脱氢酶(LDH)释放量及核因-κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、NO/诱导型一氧化氮合酶(iNOS)信号通路及花生四烯酸(AA)信号转导途径的影响;并考察加入相关抑制剂干预后神香草40%乙醇洗脱物对LPS诱导下RAW264.7细胞NO、TNF-α、IL-6生成的影响。结果:神香草40%乙醇洗脱物能显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞引起的TNF-α、IL-6、NO、LDH、前列腺素E(PGE)的释放及NF-κB、MAPK、NO/iNOS、花生四烯酸信号通路的核转位或荧光强度。加入相应抑制剂后,MyD88/NF-κB及NO/iNOS信号通路中神香草40%乙醇洗脱物药效减弱或消失。结论:神香草40%乙醇洗脱物能抑制LPS刺激下RAW264.7细胞相关炎性因子的产生,抑制NF-κB、MAPK、NO/iNOS信号通路和花生四烯酸信号通路;初步确证神香草40%乙醇洗脱物通过调节MyD88/NF-κB及NO/iNOS信号通路发挥抗炎作用。

聚酰胺树脂分离纯化神香草提取液工艺研究

目的考察聚酰胺树脂分离纯化神香草提取液的最佳工艺条件。方法以总黄酮和迷迭香酸为检测指标,采用单因素考察法筛选树脂纯化工艺中的最大上样量、水洗脱体积、洗脱剂用量、上样液浓度、树脂吸附时间、上样液pH值和洗脱速率等参数。结果最佳纯化工艺参数为:神香草提取液浓度为10 mg/mL,最大上样量为12 mL,水洗脱2 BV去除杂质,40%乙醇洗脱9 BV,上样液迷迭香酸浓度86.3μg/mL、总黄酮浓度117.8μg/mL左右,树脂吸附时间为14 h,上样液pH值调至6.5,洗脱速度3.0 BV/h。结论该方法简便易行,分离效果良好,适用于神香草提取液的分离纯化。

维药神香草活性部位提取工艺的研究

目的筛选维药神香草活性部位的最佳提取工艺。方法以出膏率、总多酚,总黄酮和迷迭香酸的含量为指标,通过L9(34)正交试验表考察提取时间、提取次数和溶剂倍量3个因素,并进行验证试验。结果神香草活性部位最佳提取工艺为50%的乙醇溶液16倍量,提取3次,每次1h。验证试验出膏率为21.22%,总多酚含量为25.18 mg/mL,总黄酮含量为71.13 mg/mL,迷迭香酸含量为0.22 mg/mL,综合评分平均值为96.27分。结论该提取工艺方法简便、合理、稳定,适合于神香草活性部位的提取。