52株脊髓灰质炎I型病毒的鉴别分析

脊髓灰质炎(简称脊灰)是由脊灰病毒引起的以肢体麻痹为主要临床特征的急性肠道传染病。实践证明,脊灰疫苗可有效地预防脊灰的发病,从而使该病成为继消灭天花之后有可能被消灭的第二种传染病。然而,随着脊灰发病的控制,与服用青灰减毒活疫苗(OPV)有关的麻痹型脊灰病例(VAPP)将变得愈加突出。

应用RT-PCR方法检测鸭病毒性肝炎新型和I型病毒

鸭病毒性肝炎病毒是危害养鸭业的重要病毒性传染病,主要感染低日龄雏鸭,临床上分离到的病原主要为鸭病毒性肝炎I型病毒和鸭病毒性肝炎新型病毒,为了加快本病的检测速度,尽快确诊病原,根据GeneBank上两种毒株的基因组序列,选择两种毒株的差异基因序列分别设计了一对特异性的检测引物,将两对引物放在一个PCR反应体系中,两种毒株分别进行特异性扩增,根据扩增片段的大小进行鉴别,建立了可以同时检测鸭病毒性肝炎病毒I型和新型毒株的复合RT-PCR方法,该检测方法快速,特异性强,灵敏性高,可以用于鸭病毒性肝炎病毒的分型鉴别检测。

单纯疱疹病毒Ⅰ型与阿尔茨海默病相关性及中药抗单纯疱疹病毒Ⅰ型感染研究进展

目的对单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus typeⅠ,HSV-1)与阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)的病理关系、可能机制及中药抗HSV-1感染研究进行综述。方法检索CNKI和PubMed数据库,收集1990年1月1日至2022年5月30日中医、西医关于HSV-1与阿尔茨海默病关系研究及中药防治HSV-1研究的报道。结果HSV-1反复感染可诱导β淀粉样蛋白(βamyloid,Aβ)累积和微管相关蛋白磷酸化(Tau protein phosphorylation,p-Tau)表达增加;ApoE4基因有利于HSV-1进入大脑增加HSV-1诱发AD的风险,Aβ可能是一种诱捕HSV-1的抗菌肽;研究发现多种中药单体或复方具有较好的抗HSV-1作用。结论HSV-1感染可能是阿尔茨海默病发生发展的因素之一,其机制可能与Aβ诱捕HSV-1病毒有关,ApoE4基因增加了HSV-1诱发AD的风险,目前中药抗HSV-1感染研究已取得了一定进展,为从中药筛选抗HSV-1新药提供了有力支撑。

猫疱疹病毒I型核酸快速检测方法的建立及初步应用

文章根据猫疱疹病毒I型(FHV-1)基因组中序列保守稳定的TK基因设计特异性引物和探针,建立了灵敏度高、特异性好、高效的FHV-1核酸快速恒温扩增检测法。结果显示,该方法特异性强,能准确检测FHV-1核酸,与猫杯状病毒、猫细小病毒及猫传染性腹膜炎(猫冠状病毒)病毒核酸无交叉反应;灵敏度高,最低可检测10 copies/反应;检测时间短,30 min即可完成反应;重复性好,各重复间cv%小于5%。用该方法对20份临床鼻拭子进行检测,与荧光定量PCR法相比,总符合率为100%。文章建立的eRDA快速检测法操作简便,尤其适合宠物医院的现场快速检测。

ACV对Ⅰ型病毒感染豚鼠皮肤阳性细胞计数的分析

为了进一步了解和研究 型人类单纯疱疹病毒引起的疱疹性皮肤病变的动态病理过程 ,将 HSV-1HS-1株感染的月豕鼠皮肤动物模型分为 HSV-1感染组 (抹 PBS)和 HSV-1治疗组 (抹 ACV) ,采用组织学方法 ,观察了病变发生过程中的皮肤组织学改变。结果显示 ,感染组月豕鼠皮肤发生形态学改变 ,上皮细胞水肿 ,胞核和胞浆内形成空泡 ;治疗组月豕鼠皮肤经用阿昔洛韦 (acyclovir,ACV)后 ,月豕鼠皮肤形态结构恢复正常 。

鸽基因Ⅶ型新城疫病毒的分离鉴定

从外表健康的法国进口鸽中分离到一株鸽Ⅰ型副粘病毒(FP株),电镜观察病毒形态不规则,以圆形为主,平均直径100mm～120mm,表面有许多突起。其鸡胚平均死亡时间(MDT)为59 2h,鸡脑内接种指数(ICPI)为1 88。接种1月龄鸽能使其发病,出现明显症状和病变并有80%试验鸽死亡,接种2月龄SPF鸡全部死亡。经多重RT-PCR鉴定,属速发型新城疫病毒。应用RT-PCR技术对F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定、分析表明,F蛋白裂解位点处的序列(112R-R-Q-K-R-117F)与新城疫强毒在这一区域的序列相符。与国内强毒F48E9株、疫苗毒Lasota株的核苷酸同源性分别为84 1%、82%,氨基酸同源性为84 5%、80 6%。与多株已报道的NDV参考株相应片段进行序列比较,经遗传基因进化树分析,鉴定为基因Ⅶ型,由此首次报道了鸽源基因Ⅶ型NDV株的存在。

鸭Ⅰ型肝炎病毒一步法RT-LAMP可视化快速检测方法的建立

本研究根据GenBank中登录的鸭I型肝炎病毒（ DHV I） VP1基因的高度保守序列,设计了特异性的引物,建立了一种灵敏、特异、高效的可视化体外环介导等温扩增方法（ RT-LAMP）。结果表明,该方法的灵敏性可达到10 fg,是常规一步法RT-PCR方法的100倍以上。全部反应可以在1.0～1.5 h内完成,并可以直接通过肉眼观察颜色进行结果判定,该方法对其他鸭常见的病原体检测结果全部为阴性,该方法的建立为下一步研制鸭I型肝炎病毒的RT-LAMP快速检测试剂盒打下基础。

检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析法的建立及应用

目的:建立一种快速、简便的检测AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的胶体金免疫层析法(GICA)。方法:采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,用其标记纯化的AsiaⅠ型口蹄疫抗体后包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的AsiaI型口蹄疫抗体和纯化的羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜按顺序组装成胶体金快速诊断试纸条,通过系列实验验证其灵敏度、特异性、重复性及稳定性。结果:研制的AsiaⅠ型口蹄疫快速检测试纸条对AsiaⅠ型口蹄疫病毒的检测灵敏度为0.116mg/L,对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。交叉反应证实该方法与其他血清型口蹄疫抗原和猪水疱病抗原(SVD)无交叉反应。检测田间样品,GICA与反向间接血凝的定型的符合率为96.87%。稳定性实验证实试纸条可保存12个月。结论:建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。

I型登革病毒感染后不同病程病毒核酸及其IgM抗体的变化规律

目的探讨I型登革病毒感染后病毒核酸及其IgM抗体在患者体内的变化规律,为指导临床快速、准确地诊断登革热提供理论支持。方法回顾性分析2014年7-11月收集的I型登革病毒感染者临床资料和血清标本,应用实时荧光定量RT-PCR和ELISA法分别检测病毒核酸和IgM抗体,分析不同病程两者的变化规律。结果共检出222例阳性患者,其中病毒核酸阳性137例,IgM抗体阳性146例,两者同时阳性61例。病程急性期(发病1~5 d)病毒核酸阳性率为75%~100%,IgM抗体阳性率在发病第1~2天较低,但第3~5天快速升高至50%~70%;进入恢复期(发病6~10 d)病毒核酸阳性率即快速降低,8 d后仅20%左右,但IgM抗体阳性率显著升高达95%~100%。急性期和恢复期病毒核酸与IgM抗体检测结果构成比差异有统计学意义(χ~2=63.41,P<0.05)。结论 I型登革病毒感染者急性期病毒核酸阳性率在75%以上。恢复期IgM抗体阳性率在95%以上。根据病程合理选择检测方法,可提高登革热的诊断效率。

鹅源Ⅰ型禽副粘病毒JG97株F基因的分子特性分析

根据GenBank中鸡新城疫病毒(NDV)基因序列合成了1对引物,通过RT-PCR扩增出了鹅源Ⅰ型禽副粘病毒(AMPV-1)或NDV JG97株的F基因。将扩增片段克隆到pGEM-T载体中,并进行了序列测定。该片段含1个完整的、长1662bp的F基因开放阅读框(ORF),编码的F蛋白长553个氨基酸,其中含有12个半胱氨酸残基和6个潜在的糖基化位点,其裂解位点的氨基酸顺序为112R-R-Q-K-R-F117,与NDV强毒株特征相符。同源性分析表明,JG97株与LZ-NDV、NA-1、SF02、Taiwan95和YG97株的核苷酸和蛋白氨基酸的同源性分别为94.6%～99.6%和96.6%～99.5%,与LaSota株的核苷酸和氨基酸的同源性仅为84.6%和88.8%。结果表明JG97株与LZ-NDV、NA-1、SF02、Taiwan95和YG97等5个毒株的遗传关系较近,而与La Sota株差异较大。

鸽Ⅰ型副粘病毒的分离和鉴定

用分离的对鸽有致病性的 4株禽副粘病毒通过电镜观察、病毒中和试验和动物回归试验结果显示 ,病毒粒子呈球形 ,直径 10 0 45 0nm ,表面有纤突 ;能凝集鸡红细胞 ,血凝反应能被新城疫病毒 (NDV)和鸽I型副粘病毒 (PPMV 1)阳性血清所抑制 ;接种 1月龄乳鸽能使其发病 ,出现明显症状和病变并有死亡 ,接种 1月龄SPF鸡不发病 ;能在鸡胚成纤维细胞(CEFs)上生长 ,并能产生细胞病变 (CPE) ;对高温敏感 ,在 5 5℃放置 60min基本上无感染力 ;对乙醚、胰酶和酸 (pH 4.0 )等敏感 ,二价镁离子对其有保护作用 ;各毒株均能产生蚀斑 ,蚀斑为浅灰色 ,形态较规则 ,清晰透明 ,直径 2 .0 4.5mm。根据以上特性鉴定为PPMV 1,其中ZQ98 1及SZ98 1为中强毒力毒株 ,ZJ98 1及DG98 1为较弱毒力毒株。采用反转录 聚合酶链式反应 (RT PCR) ,扩增出ZQ98 1株F基因全长cDNA ,经全自动测序 ,获得了ZQ98 1株F基因全序列 ,进一步从分子水平证明 4株分离毒株为PPMV

鹅Ⅰ型禽副粘病毒GPMV/QY97-1株HN基因的克隆和序列分析

在华南地区进行鹅病病因的调查过程中,从患病鹅群中分离到一株对鹅和鸡都有致病力的病毒,初步判定该病毒属于Ⅰ型禽副粘病毒,命名为GPMV/QY97-1株。以GPMV/QY97-1毒株的基因组RNA为模板,通过RT-PCR方法,扩增出血凝素-神经氨酸酶(HN)基因3′端和5′端的cDNA片段,分别将其克隆至pGEM-TEasy载体中,对其进行序列测定。序列分析表明,HN基因的cDNA全长为2024nt,编码571个氨基酸。序列中含有13个半胱氨酸残基和6个潜在的糖基化位点,其HN基因及编码蛋白结构与新城疫病毒株相符。将GPMV/QY97-1株HN基因序列和推导的氨基酸序列与新城疫病毒株的HN基因相应序列做比较后发现,它们的核苷酸序列同源性分别在89 6%～83 6%,氨基酸序列同源性在93 3%～87 9%。在同源性比较的基础上,进一步绘制了Ⅰ型禽副粘病毒株HN基因的系统发育树。这对于Ⅰ型禽副粘病毒毒力基因的功能分析和该病的分子流行病学调查有着重要意义。

鸽Ⅰ型副粘病毒的分离与鉴定

从病死鸽脾脏分离到 1毒株 ,经电镜观察和HI试验、抗体检测 ,确定为鸽的Ⅰ型副粘病毒 ,生物学试验表明 ,该病毒属于强毒株 ,其致病指数分别为 :MDT =90h,ICPI=1 2 7,IVPI=1 30。将分离株经滴鼻接种于 1 5日龄非免疫肉乳鸽和 4周龄非免疫雏鸡 ,肉乳鸽发病后出现与自然发病鸽相同的症状和病变 。

弓形虫SAG1和GRA4基因的原核表达及其重组猫疱疹病毒Ⅰ型转移载体的构建

为构建表达弓形虫抗原的重组猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)转移载体,本研究以pBluesciptⅡ-SK(-)为骨架载体,分别插入FHV-1 TK基因的5'(2 000 bp)和3'(1 700 bp)同源臂、pCAGGs载体中含有启动子和终止信号的表达盒以及弓形虫RH株SAG1或GRA4基因,构建重组FHV-1的转移载体pBS-TK-SAG1和pBS-TK-GRA4。将其分别转染于293T细胞,通过原核细胞表达的截短SAG1和GRA4重组蛋白制备的鼠多克隆抗体进行western blot鉴定。结果显示,制备的弓形虫SAG1和GRA4多克隆抗体能够特异性识别重组表达和虫体表达的天然的SAG1和GRA4两种弓形虫蛋白,分子量一致,分别为35 ku和45 ku。本研究为表达弓形虫RH株SAG1和GRA4基因的猫重组疱疹病毒Ⅰ型载体疫苗的研制奠定了基础。

白鹭源禽Ⅰ型副粘病毒L基因的克隆与序列分析

根据GenBank中已发表的鹅副粘病毒GPV-SF02株全基因组序列设计5对引物,采用RT-PCR扩增出白鹭源禽I型副粘病毒(W13株)L基因的LA(1121 bp)、LB(1481 bp)、LC(1439 bp)、LD(1476 bp)、LE(1608 bp)5个片段,用DNA Star软件比较分析后进行拼接,获得长约6760 bp包含有L基因全长的核苷酸序列,而W13株L基因的mRNA全长为6704 bp、开放阅读框(ORF)为6615个碱基、编码2204个氨基酸。氨基酸同源性分析表明:W13株L基因与鹅源SF02、ZJl、NA-1株及鸡源Guangxi7株的同源性均超过97.0%;而核苷酸同源性分析表明:W13株L基因与鹅源SF02、ZJl、NA-1株及鸡源Guangxi7株的同源性均超过93.0%。可见,W13株与鹅源SF02、ZJl、NA-1株及鸡源Guangxi7株的亲缘关系较近。

蛋清溶菌酶对人单纯疱疹病毒Ⅰ型抑制作用的实验研究

目的:观察蛋清溶菌酶(HEWL)对人单纯疱疹病毒I型(hHSV-1)的抑制作用。方法:以HSV-1的敏感细胞BHK-21为实验细胞模型,以更昔洛韦为阳性对照药,以0.5%12-烷基磺酸钠(SDS)为阻断剂,采用细胞病变法(CPE)判定溶菌酶对hHSV-1的抑制效果。结果:HEWL对细胞的最大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50)均>1 000μg.mL-1,HEWL对hHSV-1抑制作用的最小有效浓度(MIC)为104.17μg.mL-1,半数有效浓度(IC50)为46.88μg.mL-1,治疗指数(TI)为10.67。在平行对照试验中,更昔洛韦对BHK-21细胞的TC0和TC50均>500μg.mL-1。更昔洛韦对hHSV-1抑制作用的MIC为7.81μg.mL-1,IC50为3.91μg.mL-1,TI为64。0.5%SDS完全阻断了HEWL的抗病毒能力。结论:蛋清溶菌酶对HSV-1有较明显的抑制作用,作用强度与溶菌酶的浓度相关。

牛疱疹病毒Ⅰ型二重LUX荧光PCR鉴别检测方法的建立

采用LUX新型荧光PCR技术原理，建立了快速检测牛疱疹病毒I型（BHV-1）以及鉴别野毒感染和基因缺失疫苗免疫动物的二重实时荧光PCR方法。结果显示，该方法对多株BHV-1病毒均呈典型gE、gC双基因阳性反应，对其他常见动物疱疹病毒以及健康牛基因组DNA等均呈阴性反应；对细胞增殖病毒液的gE、gC双基因鉴别的检测敏感性可达0．4～O．04TCID50比常规PCR方法高100倍以上；对带毒牛血清、抗凝全血、牛新鲜精液和冷冻精液基因鉴别的检测敏感性分别达0．04TCID50、0．4TCID50、0．4TCID50和4TCID50。采用该方法从临床牛血样、鼻拭子样品中检出IBRV阳性样品，检测全程仅需约2h。对单基因克隆质粒的检测进一步证实该方法能特异地鉴定gE、gC基因，检测灵敏度分别达90、30拷贝。结果表明，该方法可应用于临床快速诊断BHV-1病毒感染，鉴别BHV-1病毒感染与对应的基因缺失疫苗免疫动物。

鹦鹉源Ⅰ型禽副粘病毒F和HN基因序列测定与分析

Virion RNA was abstracted from purified type I Avian paramyxovirus strain YN-PA01(isolated from parrot)and used as a template. The fragment containing the fusion gene(F) and hemagglutinin-neuraminidase gene(HN) of the isolate was amplified by RT-PCR and cloned to the pMD18-T Vector. Using primer walking method the complete sequence of F-HN genes was obtained finally.And the respective amino acid sequence was deduced. Through relative software the phylogenetic trees on F gene and HN gene were constructed between strain YN-PA01 and reference strains. The results showed that strain YN-PA01 comparing with reference strains displays 98.7%-83.2% nucleotide homology and 98.1%-86.2% amino acid homology on F gene; 97.4%-79.1% nucleotide homology and 97.2%-83.2% amino acid homology on HN gene. Additional 6 amino acids are encoded by the HN gene ORF of strain YN-PA01 comparing with national reference strains.The studied strain YN-PA01 exhibits highest identities with strain JS/5[O1/Go either analyzed on F gene or HN gene.

人乳头瘤病毒、疱疹病毒I型及人巨细胞病毒与口腔鳞癌关系的研究

目的 :研究口腔鳞癌与人乳头瘤病毒 (HPV)、疱疹病毒I型 (HSV -I)和人巨细胞病毒 (HCMV)的关系。方法 :采用斑点杂交和PCR技术检测 32例口腔鳞癌、14例口腔白斑和 10例正常口腔粘膜中HPV1 6 、HSV -I及HCMVDNA。结果 :在正常口腔粘膜、白斑及口腔鳞癌中HPV1 6 、HSV -I及HCMVDNA感染率分别为 0 %、35 7%、5 0 0 % ,40 0 %、5 0 0 %、43 3%和 0 %、14 3%、2 8 1% ,口腔鳞癌及白斑组织中HPV1 6 -DNA的检出率均高于正常口腔 ,且差别具有显著性 (p <0 0 5 ) ;但HSV -I和HCMVDNA在口腔疾患中的检出率与正常比较无显著差别 (p >0 0 5 )。结论 :HPV1 6 感染与口腔鳞癌的发生相关 ;HSV -I和HCMV可能参予口腔鳞癌的发生及发展 ,并且与HPV1 6

犬Ⅰ型腺病毒DNA的酶切分析及分子克隆

犬Ⅰ型腺病毒(CAV-1)弱毒用限制性内切酶EcoR Ⅰ,BamH Ⅰ,Pst Ⅰ,Sph Ⅰ和Hind Ⅲ消化分析后其图谱与强毒株相比没有差异。将弱毒DNA用Pst Ⅰ完全消化后以鸟枪法克隆到载体质粒pBluescrip'SK中,经用光生物素标记的CAV-1 DNA杂交筛选以及Pst Ⅰ分析重组质粒证明已将分子量为5.5,3.5,2.85,1.2,0.32和0.28Kb的CAV-1DNA片段克隆到质粒中。克隆到的这些片段将可考虑进一步研究作为探针检测犬及狐狸等野生动物的腺病毒感染。