应用原子力显微镜对不同种属Ⅰ型胶原纤维微观结构的研究

目的 :利用原子力显微镜 (AFM)对猪和牛的Ⅰ型胶原蛋白在溶液中的聚集行为进行微观结构的形态学研究。方法 :将Ⅰ型胶原蛋白溶液 ,滴至新鲜剥离的云母片上 ,空气中干燥后 ,用原子力显微镜观察。结果 :发现来自猪和牛的I型胶原蛋白在浓度为 3 2 μg ml时以单体形式和聚集体形式混合存在 ,在浓度为 4mg ml时两种I型胶原蛋白自发装配成胶原纤维 ,形成多孔网状结构 ,孔隙大小为 :牛 ,10 0～ 15 0nm ;猪 ,170～ 2 0 0nm。孔隙率 :牛 ,5 75个 μm2 ;猪 ,193个 μm2 。平均粗糙度为 :牛 ,3 1nm ;猪 ,8 7nm。均方根粗糙度为 :牛 ,4 0nm ;猪 ,11 4nm。平均高度 :牛 ,5 0 9nm ;猪 ,5 2 3nm。Rp v :牛 ,72 1nm ;猪 ,10 2 7nm。结论 :利用原子力显微镜能够准确直观地观察到Ⅰ型胶原蛋白形成的胶原纤维的种属差异性 。

结缔组织生长因子在晶状体上皮细胞转分化和细胞外基质合成中的作用

目的探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在人晶状体上皮细胞(human lens epithelium cells,HLECs)转分化和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成中的作用。方法采用不同质量浓度CTGF(0、5、15、30、60μg/L)对体外培养的人晶状体上皮细胞诱导24h,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在细胞中的表达,Real-time PCR和Western blot方法检测α-SMA、Ⅰ型胶原纤维(COL-I)和纤维连接蛋白(Fn)的表达。结果正常人晶状体上皮细胞为多角形贴壁细胞,不同浓度CTGF诱导24h后,晶状体上皮细胞由单层多角形变为长梭形,细胞间隙变大,呈纤维细胞样改变。CTGF可诱导α-SMA在HLECs胞质表达。CTGF能促进HLECsα-SMA、Fn、COL-I蛋白和mRNA的表达,且这种作用随CTGF浓度的增加而增强(P<0.05)。结论 CTGF能促进人晶状体上皮细胞转分化及CEM的合成。

猪小肠黏膜下层生物网片植入大鼠腹壁后力学性能和胶原含量的观察

目的比较可降解的猪小肠黏膜下层脱细胞基质(SIS)生物网片和不可吸收的人工合成聚丙烯网片植入大鼠腹壁后的局部力学性能和I型胶原纤维的含量变化。方法将60只成年SD大鼠随机分为3组(每组20只),在大鼠腹壁形成2 cm×2 cm人工缺损,将聚丙烯合成网片(A组)、SIS生物网片(B组)植入大鼠腹壁后,与无网片植入组(C组)对比。术后3、9、15、21月,检测、比较植入部位组织最大抗张力和植入周围腹直肌纤维肌肉收缩能力,同时应用免疫组化检测植入部位胶原纤维的含量。结果术后大鼠死亡减损例数:A组4例,B组3例,C组3例,共10例,3组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组出现腹壁膨出1例,B组6例,C组无膨出,各组之间累计膨出比较,差异有统计学意义(P<0.05),B组和A、C组两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05),A组和C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。随着术后时间的延长,A、C组缺陷修补局部张力最强,明显优于B组(P<0.05),B组早期张力尚可,随着SIS的降解下降,而后随着胶原纤维的增生逐渐增加,张力逐渐增强。各组植入周围腹直肌纤维肌肉收缩能力,均有增强,但组间并无差异。A、C组植入局部胶原纤维增生明显,多于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。各组无明显网片裸露、侵蚀。结论应用SIS网片进行SD大鼠腹壁缺损修补局部张力差于聚丙烯网片组,SIS网片应用于人类盆底器官脱垂的修补需要更多研究证据支持。

麝香保心丸对大鼠放射性肺损伤的防治作用

目的:探讨中药麝香保心丸对大鼠放射性肺损伤(RILI)的防治作用。方法:将100只清洁级SD大鼠完全随机分为3组:对照组、单纯照射组、治疗组(照射+麝香保心丸)。应用SD大鼠建立放射性肺损伤模型,治疗组自照射前3天至照射后15天给予麝香保心丸灌胃,于照射后第3天、7天、15天、30天、60天分别处死每组大鼠6只,取心脏血,ELSA法检测血浆内皮素(endothelin-1,ET-1)含量变化,取肺组织通过HE染色观察炎性渗出,免疫组化检测Ⅰ型胶原纤维生成情况。结果:照射后各组大鼠肺组织炎性渗出、纤维化逐渐加重,单纯照射组最严重。照射后第3天、7天、15天Ⅰ型胶原纤维表达量各组间无明显差异(P>0.05),30天时明显增加,60天时稍减少,治疗组较单纯照射组表达减弱(P<0.05)。血浆ET-1含量自照射后3天逐渐增加,至30天时达高峰,60天时稍下降,治疗组比单纯照射组含量明显减少(P<0.01)。结论:麝香保心丸可以减轻RILI大鼠肺组织炎性渗出、抑制胶原纤维合成,对RILI有一定的防治作用。