多黏菌素B对内毒素诱导大鼠肺泡巨噬细胞I-κB激酶mRNA表达的影响

目的 :观察多黏菌素 B(PMB)对内毒素 (L PS)刺激大鼠的肺泡巨噬细胞 (PAM)中 IκB激酶(IKKβ)、抑制蛋白 (IκBα)和核因子 κB(NFκB)的影响 ,探讨 PMB可能的抗炎机制。方法 :分离、培养大鼠PAM,分为正常对照组、L PS刺激组、PMB+L PS干预组。在 L PS刺激后 0 .5 h采用原位杂交 (ISN)技术、酶联免疫吸附试验 (EL ISA )法及凝胶电泳迁移率改变分析法 (EMSA ) ,分别检测各组 PAM中 IKKβ m RNA、IκBα水平、NFκB活性变化。结果 :与正常对照组比较 ,L PS刺激组 PAM中 IKKβ m RNA的表达 (0 .14 7±0 .0 15 )、NFκB的活性 (0 .82 8± 0 .0 19)均明显升高 (P均 <0 .0 1) ,IκBα水平 (0 .2 2 8± 0 .0 2 1)显著降低 (P<0 .0 1) ;PMB干预后能明显下调 L PS刺激组 IKKβ m RNA表达 (0 .112± 0 .0 2 2 )和 NFκB的活性 (0 .35 8±0 .0 11) ,上调 IκBα水平 (0 .4 77± 0 .0 16 ) ,P均 <0 .0 1。结论 :L PS能激活 PAM中 IKKβ m RNA表达 ,介导IκBα降解和 NFκB活化 ;PMB通过干预 IKKβ/IκBα/NFκB传导通路发挥抗炎作用。

共生菌对小鼠肺脏组织核转录因子κB与抑制性κB激酶α/β及磷脂酰肌醇3-激酶表达的调控作用

目的研究共生菌对小鼠肺脏组织中核转录因子κB(NF-κB)、抑制性κB激酶α/β(IKK-α/β)及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)等信号通路分子表达的调控作用。方法用Western blot方法检测共生菌缺失小鼠(Abx鼠)及正常小鼠(WT鼠)肺脏组织中NF-κB、IKK-α/β及PI3K等的表达量及其磷酸化水平,并进行分析比较。结果小鼠缺失共生菌后,其肺脏组织中NF-κB表达上调(Abx比WT,1.609±0.084比1.000±0.000;t=7.287,P<0.01),NF-κB磷酸化水平上调(Abx比WT,2.039±0.133比1.000±0.000;t=7.812,P<0.01),IKK-α表达无明显变化(Abx比WT,1.206±0.095比1.000±0.000;t=2.170,P=0.055),IKK-β表达上调(Abx比WT,3.389±0.184比1.000±0.000;t=13.012,P<0.01),IKK-α/β磷酸化水平上调(Abx比WT,1.433±0.053比1.000±0.000;t=8.203,P<0.01),PI3K表达上调(Abx比WT,1.414±0.024比1.000±0.000;t=17.206,P<0.01),PI3K磷酸化水平上调(Abx比WT,3.171±0.237比1.000±0.000;t=9.160,P<0.01)。结论共生菌对小鼠肺脏组织中NF-κB、IKK-α/β及PI3K等的表达量及其磷酸化水平均有重要的调控作用。

内毒素诱导肺泡巨噬细胞NF-κB信号通路的变化

目的 观察内毒素(LPS)体外刺激诱发肺泡巨噬细胞(PAM)中NF κB信号通路的变化 ,探讨急性肺损伤 (ALI)的分子病理机制。方法 用原位杂交、EMSA及ELISA方法 ,检测LPS刺激后 0、1/ 4、1/ 2、1、2、4h各时相点PAM中Iκ B激酶 (IKK β)mRNA表达、NF κB核移位以及IκB α降解和TNF α分泌的变化。结果 IKK βmRNA表达在LPS刺激后 1/ 4h开始升高 ,1/ 2h达高峰 ,1h后逐渐下降 ;IκB α水平恰好与IKK βmRNA对应点变化幅度相反 ;NF κB的活性于 1/ 4h开始升高 ,1h达峰值 ,2h后逐渐下降 ;TNF α的含量 1/ 2h开始升高 ,1h达峰值 ,2～ 4h逐渐恢复至刺激前水平。结论 IKK β激活 /IκB α降解 /NF κB活化 /TNF

失血性休克缺血-再灌注损伤家兔肺泡巨噬细胞中IκK-β/NF-κB改变的实验研究

目的观察失血性休克缺血-再灌注(I/R)损伤时兔肺泡巨噬细胞(AM)中I-κB激酶-β/核因子-κB(IκK-β/NF-κB)信号通路的改变,探讨肺部炎症损伤的细胞分子基础。方法建立失血性休克I/R家兔模型,分离、培养AM,用原位杂交方法检测AM中IκK-β的mRNA表达,用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测AM中NF-κB的活性和AM培养上清液中TNF-α、IL-6的含量。病理学光镜观察肺组织的炎症损害。结果模型组IκK-β、NF-κB、TNF-α、IL-6指标较对照组显著升高(P<0.01);I/R损伤动物肺组织呈现明显炎症病理改变。结论AM是I/R损伤炎症信号通路的重要细胞基础;细胞内IκK-β激活/NF-κB核移位/细胞因子产生是I/R肺组织炎症病理损伤的重要分子机制。

失血合并内毒素诱发多器官功能障碍综合征的分子病理机制研究

目的 :探讨失血性休克合并内毒素血症致多器官功能障碍综合征 ( MODS)家兔可能的分子病理机制。方法 :采用失血合并内毒素损伤诱发 MODS家兔模型 ,用原位杂交 ( ISH)和凝胶电泳迁移率改变分析法( EMSA)分别检测肺泡巨噬细胞 ( PAM)以及肝枯否氏细胞 ( KC)中 IκΒ激酶 β( IKKβ) m RNA表达和核因子κB( NFкB)的活性 ;用酶联免疫吸附法 ( EL ISA)检测两种细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α( TNFα)含量 ;同时进行动脉血气、血生化及肺、肝、小肠病理组织学检查。结果 :诱发 MODS家兔 PAM和 KC中 IKKβm RNA表达 ( 0 .15± 0 .0 3,0 .17± 0 .0 4)、NFκB活性 ( 1.49± 0 .30 ,1.72± 0 .36 )和上清液 TNFα的含量〔( 2 79.74± 2 5 .91) ng/ L 和 ( 30 0 .0 5± 30 .86 ) ng/ L〕均较正常动物〔IKKβ m RNA表达 0 .0 3± 0 .0 1和 0 .0 2±0 .0 1,NFκB活性 0 .2 5± 0 .0 6和 0 .31± 0 .10 ,TNFα含量 ( 137.33± 6 .0 9) ng/ L 和 ( 134.85± 12 .0 9) ng/ L〕明显增高 ( P均 <0 .0 1) ;血尿素氮 ( BU N)和丙氨酸转氨酶 ( AL T)均明显升高 ,氧分压下降 ,内脏组织出现明显炎症病理改变。结论 :IKKβ、NFκB、TNFα在休克合并内毒素诱发 MODS的炎症病理改变中有重要作用。

核因子相关因子-2在慢性阻塞性肺疾病大鼠模型中的作用及其与I—κB激酶的关系

【摘要】目的探讨核因子相关因子-2（Nrf2）在COPD发病中的作用及与核因子-κB和I—κB激酶（IKKs）之间的关系。方法将大鼠按照完全随机方法分为对照组、模型组和干预组，每组12只，检测大鼠的肺功能和抗氧化能力。免疫组织化学SABC法和逆转录PCR法检测Nrf2、核因子-κB p65和IKKoL／[3的蛋白水平及mRNA表达。统计学方法采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果模型组大鼠FEV0.3／FVC为（58．8±2．6）％，动态肺顺应性为（0．14±0．02）ml／cm H2O（1cm H2O=0．098kPa），总抗氧化能力为（0．20±0．03）U／ml，SOD抗氧化能力为（19．6±2．4）U／ml，均明显低于对照组[（86．3±2．5）％、（0．38±0．02）ml／cm H2O、（3．16±0．31）U／ml及（56．1±2．2）U／ml]；模型组大鼠的气道阻力为（0．69±0．17）cm H2O·ml^-1·s^-1，明显高于对照组的（0．34±0．06）cm H2O·ml^-1·s^-1；干预组介于两组之间。模型组大鼠Nrf2、IKKα／β和核因子-κB p65的阳性系数依次为3．23±0．31、3．80±0．16和3．85±0．18，明显高于对照组的0．91±0．45、1．17±0．42和1．30±0．34，干预组IKKα／β和核因子-κB p65的阳性系数（2．10±0．46和2．53±0．36）介于两者之间，而Nrf2的阳性系数（3．78±0．22）明显高于模型组。模型组大鼠Nrf2、IKKβ和核因子-κB p65的mRNA表达分别为0．61±0．08、0．89±0．05和0．91±0．02，明显高于对照组的0．29±0．07、0．30±0．07和0．30±0．07，干预组IKKβ和核因子-κB p65的mRNA表达（0．67±0．04和0．69±0．04）介于两者之间，而Nrf2的mRNA表达（0．90±0．05）明显高于模型组。结论15d—PGJ2在COPD模型中有抗氧化应激和抗炎症作用，这可能与Nrf2增加有关。Nrf2可能通过抑制IKKβ表达从而抑制核因子-κB p65的表达水平。

FOXO蛋白相关信号通路在卵巢癌发生发展中的作用研究进展

FOXO属于叉头框转录蛋白O亚家族,被认为是抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的肿瘤抑制因子。FOXO蛋白活性的变化可以影响卵巢癌的发生发展。调控FOXO的主要上游信号途径有磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B、丝裂原活化蛋白激酶、丝氨酸/苏氨酸激酶、I-κB激酶、c-Jun激活域结合蛋白1、硫氧化还原蛋白1等。上述信号通路通过调控FOXO蛋白活性在卵巢癌的发生发展过程中发挥了不同的作用。

基因调控在脓毒症患者中的应用

目前，脓毒症发病率高，临床上缺乏快速有效地救治手段，已经成为我国重症监护病房（ICU）的主要死亡原因之一。而近年来，对于基因调控研究范围也在逐渐扩大，随着对于脓毒症发病机制的进一步认识，人们开始从分子水平上探索治疗脓毒症的新方法。核转录因子-κB（NF-κB）是重要的转录调控因子，被激活后可以调节炎性介质的表达，并且与脓毒症肺损伤关系密切。微小RNA分子（miRNA）主要在转录后水平发挥作用，miRNA很早以前就被发现，并在近十年的研究中取得丰硕的成果，尤其是在机体免疫调节及脓毒症等感染相关性疾病等研究方面。另外，加工修饰后的蛋白质也可以调节脓毒症的炎症反应。但由于蛋白质加工修饰的方式及位点不同，因此，对于炎症反应发挥的调控作用也不尽相同。本文对于脓毒症基因调控的研究热点及其作用机制做一综述，为研究脓毒症治疗提供新的方向。

脊髓IKK2/NF-κB信号通路在大鼠骨癌痛维持中的作用

目的 评价脊髓IκB激酶2（IKK2）/NF-κB信号通路在大鼠骨癌痛维持中的作用.方法 清洁级成年雌性未交配SD大鼠28只,体重160 ～ 200 g,采用随机数字表法分为4组（n=7）：假手术组（S组）、骨癌痛组（BP组）、骨癌痛＋生理盐水组（BN组）和骨癌痛＋BMS345541组（BB组）.BP组、BN组和BB组右侧胫骨骨髓腔注射Walker 256乳腺癌细胞5 μl（4× 105个/ml）,S组注射5μl生理盐水;于术后第10、11和12天,BB组鞘内注射IKK2选择性抑制剂BMS345541 （50 μg/10μl,1次/d）,BN组注射生理盐水（10 μl,1次/d）;于乳腺癌细胞注射前（T0）、注射后7d、第10天注药前1h及注药后1、2、4、12、24h及第12天注药后4 h（T1-8）时测定机械痛阈.于T8时机械痛阈测定后取L4-6脊髓节段,采用Western blot法检测磷酸化NF-κB（p-NF-κB）表达.结果 与S组比较,BP组、BN组和BB组T1-8时MWT降低,脊髓p-NF-κB表达上调（P＜0.05）;与BP组比较,BB组T4-6时MWT升高,脊髓p-NF-κB表达下调（P＜0.01）.结论 脊髓IKK2/NF-κB信号通路参与了大鼠骨癌痛的维持.

IKKε蛋白在卵巢上皮性癌组织和细胞中的表达以及抑制其表达后对癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨卵巢上皮性癌（卵巢癌）组织和细胞中IKKε蛋白的表达，以及抑制其表达后对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。 方法（1）选取2006年1月至2013年4月大连医科大学附属第一医院经手术治疗且经病理检查证实为卵巢癌的石蜡组织标本118份，患者中位年龄为59岁；另取同期因子宫肌瘤行子宫及卵巢切除术且术后经病理检查证实为正常卵巢组织标本20份作为对照，患者中位年龄为55岁。免疫组化SP法检测卵巢癌和正常卵巢组织中IKKε蛋白的表达，并分析IKKε蛋白表达与卵巢癌患者临床病理特征之间的关系。（2）选择卵巢癌细胞系SKOV3、OV2008、C13、A2780S、A2780CP、OV4、OV5、OV8和CAOV3细胞，蛋白印迹法检测卵巢癌细胞中IKKε蛋白的表达，以及IKKε抑制剂对卵巢癌细胞IKKε蛋白表达的影响；四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞仪分别检测IKKε抑制剂对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。结果（1）免疫组化SP法检测显示，卵巢癌、正常卵巢组织中IKKε蛋白阳性表达率分别为66.1%（78/118）、35.0%（7/20），两者比较，差异有统计学意义（χ2=6.993，P=0.008）。卵巢癌组织中IKKε蛋白的表达与手术病理分期、病理分化程度、术前血清CA125水平和肿瘤分布（包括单侧卵巢、双侧卵巢）均明显相关（P〈0.05），而与年龄、病理类型、发病模式分型[包括Ⅰ型（即低级别卵巢癌）、Ⅱ型（即高级别卵巢癌）]和肿瘤直径均无明显相关性（P〉0.05）。（2）蛋白印迹法检测显示，9种卵巢癌细胞即SKOV3、OV2008、C13、A2780S、A2780CP、OV4、OV5、OV8和CAOV3细胞中均表达IKKε蛋白，其表达强度略有差异；IKKε抑制剂（分别为0.1、0.5 μmol/L）作用后，OV2008、C13、A2780S和A2780CP细胞中IKKε蛋白的表达强度分别与IKKε抑制剂作用前比较均明显减弱。MTT比色法检测显示，不同浓度（分别为0.05、0.1、0.5、1、5、10、25 μmol/L）IKKε抑制剂作用后，OV2008、C13、A2780S、A2780CP和SKOV3细胞增殖的抑制率随着IKKε抑制剂浓度的增加均逐渐增高，呈明显浓度依赖性（P〈0.05）；其50%抑制浓度（IC50）分别为0.43、0.86、0.10、0.19、0.24 μmol/L。流式细胞仪检测显示，不同浓度（分别为0.1、0.5 μmol/L）IKKε抑制剂作用后，OV2008、C13、A2780S、A2780CP和SKOV3细胞凋亡率分别与IKKε抑制剂作用前比较均明显增高（P〈0.05）。结论IKKε蛋白在卵巢癌组织和细胞中均呈高表达；IKKε抑制剂下调IKKε蛋白表达后可抑制卵巢癌细胞增殖并诱导卵巢癌细胞发生凋亡，提示IKKε有望成为卵巢癌分子治疗的新靶点。