草鱼载脂蛋白A-I-1基因3＇非编码区SNPs筛选及其与生长性状的关联分析

采用PCR产物直接测序法和PCR-RFLP法对草鱼EST文库中载脂蛋白A-I-1基因(Apoprotein A-I-1,apoA-I-1)3'非编码区进行SNPs筛选,在珠江水系草鱼Ctenopharyngodon idella养殖群体144个样本中发现2个SNPs位点。C792T位点的CC型占46.53%,CT型占50.69%,TT型占2.78%;G851A位点的GG型占77.08%,GA型占20.83%,AA型占2.08%。采用一般线性模型对2个SNPs位点与草鱼4个生长性状———体质量、体长、体高和头长进行关联分析,结果表明:C792T位点TT型个体的体质量、体长、体高和头长均值高于CT型和CC型个体的生长性状指标值,但未达到显著水平(P>0.05);G851A位点GG型个体的体质量、体长、体高和头长均值高于GA型和AA型个体的生长性状指标值,且GG型个体的体长和头长均值与GA型和AA型个体均存在显著差异(P<0.05)。将2个SNPs位点不同基因型组合成6种双倍型,关联分析结果表明,双倍型D3(TTC792T-GGG851A)个体的体质量均值最高,D6型(CCC792T-AAG851A)个体的体质量均值最低,且二者在体长、体高、头长均值间存在显著差异(P<0.05)。推测C792T位点TT型为有利基因型;G851A位点GG型为有利基因型,AA型为不利基因型。本研究结果为草鱼分子辅助育种提供了候选标记,为加快草鱼育种进程奠定了基础。

血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性与PAI-1活性的相关性

【目的】研究血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(ID)多态性与血浆PAI-1活性的关系。【方法】用PCR方法扩增93例心肌梗死患者及87例健康体检者ACE基因特异性片段,同时应用发色底物法测定PAI-1活性。【结果】①心肌梗死组ACEDD基因型频率32.3%和D等位基因频率54.3%,高于对照组12.6%和37.4%,P均<0.01;ACE基因型分布与年龄、性别、体重指数、血压、胆固醇、甘油三脂、血糖等无关。②心肌梗死组血浆PAI-1活性(0.85±0.19)AU/mL,高于对照组(0.66±0.20)AU/mL,P<0.01。③心肌梗死组DD基因型血浆PAI-1活性高于ID基因型及Ⅱ基因型P均<0.01;ID型血浆PAI-1活性亦高于Ⅱ型P<0.05。对照组DD基因型血浆PAI-1活性高于Ⅱ基因型P<0.05;而DD型血浆PAI-1活性虽高于ID型,ID型亦高于Ⅱ型,但差异无统计学意义。【结论】①ACEDD基因型可能是心肌梗死发生的独立危险因素性;②PAI-1水平可能受ACE基因ID多态性的影响,ACE基因型可能通过影响纤溶平衡而引起心肌梗死。

^(131)I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠体内的生物分布研究及辐射剂量评估

目的探讨131I-BDI-1在荷人膀胱癌裸鼠模型中的体内生物分布和对肿瘤的靶向定位性能以及其生物安全性,并由此估算131I-BDI-1在人体内主要脏器的内照射吸收剂量和人体有效剂量。方法通过氯胺-T法用131I溶液直接标记抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1,制备131I-BDI-1,荷人膀胱癌EJ细胞裸鼠尾静脉注射222kBq131I-BDI-1后,于不同时刻处死动物,取感兴趣器官和组织,称重并测量放射性计数,计算131I-BDI-1在荷瘤裸鼠中的标准摄取值和靶/非靶组织比值。利用标准的MIRD数据表计算人体的%ID/g,通过MIRDOSE3.1软件估算131I-BDI-1对人体各个器官的辐射吸收剂量及有效剂量。结果生物分布数据示131I-BDI-1血液清除缓慢,肿瘤部位放射性明显持续滞留,除血液外,具有较高的靶/非靶组织比值。131I-BDI-1人体内照射的有效剂量为1.46×10-2mGy/MBq。结论131I-BDI-1对肿瘤有良好的靶向性,有望成为一种新型的针对人膀胱癌肿瘤的诊治药物,其辐射吸收剂量较低,作为肿瘤治疗药物是安全的。

分子标记辅助筛选携带Xa23、Stvb-i、Pi-1抗病基因的水稻种质资源

利用分子标记辅助选择技术对62份水稻种质资源进行筛选携带Xa23、Stvb-i、Pi-1抗病基因种质资源。结果表明:经PCR检测,从中选择出含两种抗病基因的材料有10个,占16.1%,其中Xa23和Pi-1呈阳性的材料有4个,Xa23和Stvb-i呈阳性的材料有1个,Pi-1和Stvb-i呈阳性的材料有5个;含有一种抗病基因材料40个,占64.5%,其中Xa23呈阳性的材料有3个,占4.8%;Pi-1呈阳性的材料有17个,占27.4%;Stvb-i呈阳性的材料有20个,占32.3%;本试验为实现分子标记辅助选择水稻抗病育种打下了坚实的基础。

实时荧光定量RT-PCR检测白血病细胞中BMI-1 mRNA的表达及其意义

目的:建立SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR方法检测白血病细胞中BMI-1 mRNA的表达并探讨其临床意义。方法:在TRIzol提取总RNA后,将mRNA逆转录成cDNA,再用SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法检测BMI-1 mRNA在白血病细胞系(K562、HL-60、Daudi、Jurkat、Molt-4、U937和THP-1)、56例AML初治患者的骨髓ACDA抗凝标本和30例健康体检者的外周血EDTA抗凝标本以及6例细胞形态学正常的骨髓ACDA抗凝标本中的表达,扩增产物的特异性通过熔解曲线和凝胶电泳双重确认,以ABL为内参照,采用2-△△ct法计算其相对表达量。结果:①BMI-1 mRNA在白血病细胞系(K562、HL-60、Daudi、Jurkat、Molt-4、U937和THP-1)均存在表达,其中U937表达最高,而HL-60表达最低。②与对照组相比,BMI-1 mRNA在白血病细胞中的表达显著升高(P<0.01)。结论:①SYBR GreenⅠ实时RT-PCR是一种快速有效、灵敏度高、特异性好的定量检测BMI-1 mRNA的方法。②BMI-1参与白血病的发生,可能是一种新的肿瘤分子标记物。

四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株SHI-1凋亡及其分子机制研究

本研究探讨四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)诱导白血病细胞株SHI-1凋亡作用的机制。以不同浓度的ZGDHu-1在体外培养SHI-1细胞,用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Ho-echst33258荧光染色等分析细胞凋亡。用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位(ΔΨm),用流式细胞术检测ZGDHu-1诱导SHI-1细胞凋亡过程中bcl-2、bax、p53、Fas蛋白和线粒体膜蛋白的表达变化。用RT-PCR观察经ZGDHu-1作用后SHI-1细胞bcl-2、bax、p53基因表达改变;同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT-mRNA表达的变化。结果表明:ZGDHu-1能诱导SHI-1细胞凋亡,呈作用时间和剂量的量效关系,出现典型的细胞形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加;Annexin-V/PI和Hoechst33258荧光染色后细胞发生凋亡的特征性改变。SHI-1细胞经不同浓度的ZGDHu-1体外培养后,bcl-2基因和蛋白有所下调,但主要是bax基因和蛋白上调,导致bax/bcl-2比值明显增高,p53基因和蛋白与Fas蛋白表达也上调,均呈剂量依赖性。随ZGDHu-1作用浓度的增加,ΔΨm下降,而线粒体膜蛋白表达显著升高,端粒酶hTERT-mRNA的表达显著下调。结论:ZGDHu-1通过上调p53基因、bax基因和bax/bcl-2比值,使线粒体跨膜电位显著下降的线粒体通路是ZGDHu-1诱导细胞凋亡的途径之一,Fas也参与其中,端粒酶有可能是其抗肿瘤的作用靶点。

SYBR Green I实时荧光定量PCR检测BMI-1 mRNA方法的建立

目的 建立SYBR Green I实时荧光PCR定量检测人类BMI-1 mRNA的方法。方法 以含有目的基因BMI-1 cDNA的质粒pEGFP-BMI-1为阳性模板,进行纯化和定量及系列稀释,应用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测BMI-1,建立标准曲线,熔解曲线分析产物的特异性。结果 该法检测的线性范围为6.4×10^1～6.4×10^7拷贝,相关系数r为-1.00,6.4×10^3拷贝/反应的标本批内变异系数（CV）和日间CV分别为1.6%和2.8%。熔解曲线分析显示单一的峰,Tm为（80.40±0.18）℃。结论 SYBR Green I实时荧光PCR定量检测BMI-1 mRNA是快速有效、灵敏度高、特异性好的方法,可为BMI-1的进一步研究奠定基础。

实时荧光定量RT-PCR检测急性白血病中Bmi-1基因mRNA的表达及意义

[目的]建立荧光实时定量RT—PCR（FQRT—PCR）检测Bmi—1基因mRNA的方法并研究该基因在急性白血病细胞中表达的意义。[方法]根据Genbank提供的序列，设计目的基因Bmi-1及内参基因GAPDH的扩增引物，将Bmi-1及GAPDHRT—PCR扩增片段克隆入载体pMDl8-Tsimple，经测序鉴定正确后，进行纯化、定量及系列稀释，应用SYBRGreenI荧光染料，建立检测Bmi-1mRNA的FQRT—PCR方法，并对其线性及特异性进行评价。应用此方法检测21例急性白血病及10例健康人外周抗凝血中Bmi-1mRNA的表达水平。【结果]该方法的线性范围为1．0×10^3-1．0×10^8eopies／txL，相关系数为-1．00，熔解曲线分析扩增产物显示单-的峰，熔解温度（Tm）为80．4℃。急性白血病患者的相对表达量为0．56±0．12，健康对照组中Bmi-1mRNA的相对表达量为0．19±0．08，两者的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。[结论]实时荧光定量RT—PCR方法检测Bmi-1基因表达，具有高敏感性和高特异性等优点，可作为进-步研究Bmi-1基因的方法。Bmi-1基因参与急性白血病的发生，可能是一种新的肿瘤标志物。

原癌基因Bmi-1 B细胞抗原表位及HLAⅠ类限制性CTL表位的生物信息学分析

目的:预测原癌基因Bmi-1(B-cell-specific Moloney murine leukemia virus insertion site 1)的B细胞抗原表位及HLAⅠ类限制性细胞毒性T细胞(cytotoxic T cell)表位。方法:采用Ellipro(http://tools.immuneepitope.org/ellipro/)预测Bmi-1蛋白中可能存在的线性B细胞表位和构象B细胞表位;采用Prot Param、Net CTL等软件和方法预测Bmi-1中可能存在的HLAⅠ类限制性CTL表位。结果:Bmi-1蛋白中含有6个线性B细胞表位和8个构象B细胞表位;结合HLA结合力、蛋白酶体切割效率和TAP转运效率,经过Net CTL程序预测表明:针对不同的HLAⅠ类分子,原癌基因Bmi-1中都存在多个HLAⅠ类分子的限制性CTL表位。结论:综合运用多个程序预测了原癌基因Bmi-1中的B细胞抗原表位及HLAⅠ类分子的限制性CTL表位,为下一步开展针对Bmi-1的免疫靶向治疗等研究打下了基础。

sum from i=1 to n([a+(i-1)d]~m)与求和矩阵

构造一个多项式递归序列 ,得到∑ni=1〔a +(i- 1)d〕m 的一种求法 ,使求和矩阵∑ni-1im

泛读“i-1假想”在大学英语教学中的应用

根据Richard Day提出的大学英语泛读课教学"i-1假想",结合我国传统教育思想,从运用机制方面阐述这一假想的理论和实际意义。这一泛读假想的应用将有利于在现代化教学手段中转换教师角色,提高学生的实践量和参与程度,通过在自然学习过程中把语言知识转化为交际能力,培养学生的自主学习能力。

I-1-P反义ODN-壳聚糖纳米粒子的制备及对结核杆菌生长的抑制作用

目的探讨应用纳米技术抑制分枝结核杆菌生长的可行性。方法用复凝聚法制备I-1-P反义ODN-壳聚糖纳米粒子。在分枝结核杆菌菌株中分别加入不同量的自由ODN和壳聚糖-ODN纳米粒子,共同培养6周后观测细菌的生长情况。结果制得的纳米粒子由(35.6±0.9)%的ODN和(64.4±0.9)%的壳聚糖组成。壳聚糖-ODN纳米粒子浓度为4μmol/L时,其对分枝结核杆菌的抑制作用为(2.8±0.1)CFU/ml。而自由ODN在浓度低于10μmol/L时,不能有效抑制分枝结核杆菌的生长。结论壳聚糖-ODN纳米粒子比自由ODN对分枝结核杆菌的生长具有更强的抑制作用。

川芎嗪对3T3-L1增殖分化及分泌Leptin、PAI-1的影响

目的:研究川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)对小鼠前脂肪细胞3T3-L1增殖分化和分泌瘦素(Leptin)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的影响。方法:培养3T3-L1细胞,并分别用川芎嗪5μg/m L、50μg/m L、100μg/m L 3个浓度进行干预,四甲基偶氮唑盐(MTT)测定3T3-L1的增殖;油红O进行染色以及染色比色法测定细胞分化程度;酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养上清中Leptin、PAI-1含量。结果:川芎嗪100μg/m L浓度组能明显抑制3T3-L1细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.01);3个浓度组对细胞分化均无明显影响;TMP 3个浓度组对Leptin的分泌和50μg/m L、100μg/m L浓度组对PAI-1的分泌均有明显抑制作用,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:川芎嗪对脂肪细胞的调节作用以影响其分泌功能为主。

血清anti-β2GPI、FSTL1、PD-1对系统性红斑狼疮免疫功能、疾病活动度的影响

目的探究血清抗β2糖蛋白I抗体(anti-β2GPI)、卵泡抑素样蛋白(FSTL1)、程序性死亡受体1(PD-1)对系统性红斑狼疮(SLE)患者免疫功能、疾病活动度的影响。方法选取我院2019年1月~2022年6月SLE患者113例作为观察组,另选取同期健康体检者105例作为对照组。比较两组、不同疾病活动度患者血清anti-β2GPI、FSTL1、PD-1水平,评价各血清指标与疾病活动度的关系,并根据观察组血清表达水平分为高表达者、低表达者,对比两者免疫功能(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+),分析各血清指标与免疫功能相关性。结果观察组血清anti-β2GPI、FSTL1、PD-1高于对照组(P<0.05);血清anti-β2GPI、FSTL1、PD-1高表达患者CD4+、CD4+/CD8+低于低表达患者,CD8+高于低表达患者(P<0.05);血清anti-β2GPI、FSTL1、PD-1与CD4+、CD4+/CD8+呈负相关,与CD8+呈正相关(P<0.05);血清anti-β2GPI、FSTL1、PD-1水平随疾病活动度增加呈升高趋势,且重度活动患者>中度活动患者>轻度活动患者>病情稳定患者(P<0.05);血清anti-β2GPI、FSTL1、PD-1与疾病活动度显著相关(P<0.05)。结论血清anti-β2GPI、FSTL1、PD-1高表达可能参与SLE患者细胞免疫功能紊乱、疾病活动度加重的发生过程。

碧根果致敏原Car i 1的分离纯化及表征鉴定

目的分离纯化碧根果致敏原Car i 1,并对其结构进行表征鉴定。方法以新鲜碧根果果仁为原料,通过粉碎、脱脂、浸提、粗分级、凝胶过滤层析,对碧根果致敏原蛋白Car i 1进行分离纯化。结合十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、液相色谱-串联质谱法和免疫印迹法3种方法对Cari1进行鉴定,并通过圆二色谱仪与紫外分光光度计表征其二、三级结构。结果本方法纯化获得碧根果致敏原Cari1,单轮制备量可达5 mg以上,且纯度大于95%,蛋白质高级结构未被破坏,能够被全部3名碧根果过敏患者的血清准确识别。结论该纯化方法技术路线简单、设备要求低且单次制备量高,总得率可达65%,操作便捷,为碧根果致敏原Car i 1的相关研究奠定了物质基础。

^(131)I治疗对分化型甲状腺癌患者术后血清iPTH、IGF-1水平的影响

目的探讨^(131)I治疗对分化型甲状腺癌患者术后血清全段甲状旁腺激素(iPTH)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平的影响。方法回顾性分析河南科技大学第一附属医院2020年1月至2022年9月收治的73例分化型甲状腺癌患者,均接受甲状腺全切除并于术后2个月采用^(131)I治疗,随访1个月根据治疗情况将患者分为有效组(51例)和无效组(22例)。比较两组患者治疗前及治疗7 d iPTH和IGF-1水平,以及有效组治疗后各时间点血清iPTH、IGF-1水平。结果两组患者治疗后7 d血清iPTH、IGF-1水平均低于治疗前,且有效组低于无效组(P<0.05);有效组治疗后不同时间点血清iPTH、IGF-1水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论分化型甲状腺癌患者^(131)I治疗后血清iPTH、IGF-1水平变化可用于判断甲状旁腺功能恢复情况,血清iPTH还可预示术后低钙血症的发生。

白术内酯I调节HIF-1α/VEGF信号通路对急性心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨白术内酯I(Atr-I)调节缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌损伤的影响。方法:大鼠分为对照组、AMI组、Atr-I组、阿司匹林组、BAY87-2243组、Atr-I+BAY87-2243组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均采用结扎冠脉左前降支根部的方式构建AMI模型,建模1h后,开始处理,给药1次/d,持续7d。超声心动图监测左室短轴缩短率(FS)、左室射血分数(LVEF)的变化;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠心肌梗死面积百分数;HE染色检测左心室心肌组织病理学变化;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;ELISA检测大鼠左心室心肌组织中肌红蛋白(Mb)、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β含量;Western blot检测大鼠心肌组织匀浆中HIF-1α、VEGF蛋白表达。结果:与对照组相比,AMI组大鼠心肌损伤明显,FS、LVEF及HIF-1α、VEGF蛋白表达降低,心肌梗死面积百分数、Mb、LDH、TNF-α、IL-1β含量升高(P<0.05);与AMI组相比,Atr-I组、阿司匹林组大鼠心肌损伤有所改善,FS、LVEF及HIF-1α、VEGF蛋白表达升高,心肌梗死面积百分数、Mb、LDH、TNF-α、IL-1β含量降低,BAY87-2243组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与Atr-I组相比,Atr-I+BAY87-2243组大鼠心肌损伤加剧,FS、LVEF及HIF-1α、VEGF蛋白表达降低,心肌梗死面积百分数、Mb、LDH、TNF-α、IL-1β含量升高(P<0.05)。结论:Atr-I减轻AMI大鼠心肌损伤可能与激活HIF-1α/VEGF信号通路有关。

“i+1”理论指导下大学英语阅读翻转课堂教学研究——以某高校西藏生为例

西藏生是一个特殊的受教育群体,因独特的教育背景、文化背景和生活环境等导致其具有很强的同质性和民族性。因此,他们在英语阅读方面面临更多问题,如文化背景知识缺乏、自主学习能力较低、阅读能力与阅读动力不足、词汇量和阅读量较小等,这也为大学英语教学带来不少困难与挑战。文章基于Krashen“i+1”理论和ARCS动机模型,将翻转课堂运用于西藏生大学英语阅读教学中,以期在提高西藏生自主学习能力和思辨能力的同时,增强其爱国情怀和时代责任感,同时为其他少数民族英语教学提供借鉴。

基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白1改善马兜铃酸I诱导小鼠肝损伤的机制

目的基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白1(YAP1)改善马兜铃酸I(Aristolochic acid I,AAI)诱导小鼠肝损伤的机制。方法随机选取8只3周龄雄性肝细胞特异性Yap1基因敲除(基因型为Yap1^(Flox/Flox),Albumin-Cre,简称Yap1^(LKO))小鼠作为Yap1^(LKO)+AAI组,8只Yap1Flox对照小鼠作为Yap1^(Flox)+AAI组。2组小鼠均按照2.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量腹腔注射AAI,连续14 d。采用鼠尾PCR法鉴定基因型;微板法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;HE染色法观察肝脏组织病理变化;免疫组织化学法测定肝组织中YAP1蛋白表达情况。采用非靶向代谢组学方法分析肝脏组织差异代谢物,利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术分析样品,通过主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)筛选差异代谢物,利用HMDB数据库、METLIN数据库对代谢物进行鉴定,通过KEGG数据库对差异代谢物进行通路富集分析。结果(1)AAI诱导14 d,Yap1^(LKO)小鼠的体质量增长低于Yap1^(Flox)小鼠,但差异无统计学意义(P>0.05)。在第14天,与Yap1^(Flox)+AAI组比较,Yap1^(LKO)+AAI组小鼠血清中的ALT、AST酶活性明显升高(P<0.05),肝脏组织病理损伤明显加重。Yap1^(Flox)小鼠肝脏有YAP1蛋白阳性表达,而Yap1^(LKO)小鼠无YAP1蛋白阳性表达。(2)通过代谢组学分析共筛选出139种显著变化(VIP>1且P<0.05)的差异代谢物,与Yap1^(LKO)+AAI组小鼠相比,Yap1Flox+AAI组小鼠的62种肝脏代谢物上调,包括胆碱、牛磺酸、亚牛磺酸、α-亚麻酸、桐油酸、鹅去氧胆酸等;77种代谢物下调,包括甘油磷酸胆碱、L-磷脂酰胆碱、L-谷氨酰胺、L-丝氨酸、L-谷胱甘肽、5-甲硫腺、苯丙氨酸、6-磷酸葡萄糖、乳酸、尿酸苷等。KEGG富集通路主要有胆碱代谢、甘油磷脂代谢、胰岛素抵抗、谷胱甘肽代谢等。结论肝细胞特异性Yap1基因敲除加重了AAI诱导的小鼠肝脏损伤,YAP1通过上调胆碱、牛磺酸等不饱和脂肪酸,参与调控胆碱代谢、甘油磷脂代谢等,从而改善AAI诱导的小鼠肝损伤。