BALB/c小鼠I-A^dαβ链编码基因真核双顺反子载体的构建及表达

目的:为了获取BALB/c小鼠I-Adα、β链编码基因,构建真核双顺反子表达载体并在NIH3T3细胞中表达,建立BALB/c小鼠MHC-Ⅱ抗原递呈细胞研究模型。方法:采用Trizol提取BALB/c小鼠脾细胞总RNA,RT-PCR获取I-Adαβ链 cDNA,连接pGEMT载体测序,正确后亚克隆至pIRES真核双顺反子表达载体;用Lipofectamine2000转染NIH3T3细胞,G418 筛选转染克隆株。RT-PCR鉴定外源基因在mRNA水平的表达;流式细胞术(FCM)鉴定外源基因在蛋白质水平的表达以及在细胞表面展示的水平。结果:建立了BALB/c小鼠I-Adαβ链编码基因真核双顺反子表达载体pIRES-I-Adαβ;pIRES-I-Adαβ转染NIH3T3细胞。在G418筛选下可获得高达72％的转染细胞;转染细胞总RNA RT-PCR显示外源基因在mRNA水平得到表达;FCM显示外源基因编码的蛋白高水平表达并定位于细胞表面。结论:为进一步研究BALB/c小鼠MHC-Ⅱ抗原递呈的分子机制奠定了基础。