斜带石斑鱼IFN-γ基因的克隆与表达分析

IFN-γ在天然免疫和适应性免疫应答中均发挥着重要的作用。由于低等脊椎动物IFN-γ与哺乳动物IFN-γ相似性非常低,硬骨鱼类的IFN-γ近年来才得到鉴定。本研究报道了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的IFN-γ基因,并对其表达进行了分析。斜带石斑鱼IFN-γcDNA全长为867 bp,编码200个氨基酸。其基因组全长为5 104 bp,由4个外显子、3个内含子组成。氨基酸序列比对显示斜带石斑鱼IFN-γ与高等脊椎动物IFN-γ的序列相似性较低,仅为32.5%～39%,与其他硬骨鱼类的IFN-γ相似性为38.0%～68.5%。序列分析结果显示,斜带石斑鱼IFN-γ分子C末端中存在IFN-γ的特征序列以及核定位基序。二级结构分析结果显示斜带石斑鱼IFN-γ序列中包含6个α螺旋结构,其排列与高等脊椎动物的IFN-γ类似。应用荧光定量PCR检测了IFN-γ基因在Poly I:C诱导后的表达变化。发现在肾、脾、鳃、头肾、皮肤和胸腺组织中,Poly I:C能显著诱导IFN-γ的表达,在胸腺中上调倍数最高,其次为头肾、脾、肾、皮肤和鳃,而在脑和心脏组织中没有显著变化。据此推测,IFN-γ在斜带石斑鱼抵抗病毒感染的过程中起有十分重要的作用。

苦参碱、γ干扰素对大鼠肺纤维化干预作用

目的:探讨苦参碱、γ干扰素(IFN-γ)对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的干预作用及其可能的机制。方法:SD雄性大鼠60只,分为健康对照组、肺纤维化模型组、苦参碱干预组、IFN-γ干预组,各组分别于7d、14d、28d处死5只,行HE染色及Masson染色半定量判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度。免疫组化测肺组织TGF-β1、CTGF、I型胶原及Ⅲ型胶原的蛋白水平表达。结果:苦参碱干预组、IFN-γ干预组大鼠肺泡炎、肺纤维化程度均较模型组好转。与模型组相比,苦参碱、IFN-γ都能够抑制肺组织中的TGF-β1、CTGF、I型胶原及Ⅲ型胶原的表达(P<0.05)。结论:苦参碱及IFN-γ对大鼠肺纤维化模型均有一定的疗效,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1和CTGF的表达来减少Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原的生成。

IFN-λ在免疫调节和肿瘤治疗领域的研究进展

IFN-λ(Ⅲ型IFN)是最新发现的IFN家族新成员,在生物学活性上与Ⅰ型干扰素有很多相似之处,如抗病毒和抗增殖活性。此外,IFN-λ还具有独特的免疫调节活性。本综述总结了目前关于IFN-λ免疫调节活性的信息以及它在肿瘤治疗中的意义。IFN-λ独特的免疫调节活性在临床应用中具有潜在的价值,或许能成为肿瘤治疗领域新的选择。

猪繁殖与呼吸综合征病毒对Ⅰ型干扰素及信号分子mRNA转录的抑制效应

为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)体外感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后对Ⅰ型干扰素(IFN)及其信号分子mR NA转录的抑制效应,本研究选用PRRSV血清抗体和抗原均为阴性的4周龄健康仔猪3头,无菌分离PAMs,分为对照组和PRRSV感染组(PRRSV组),分别在培养6 h、12 h、24 h、36 h、48 h和60 h收集PAMs。并采用MTS检测各组细胞活力和荧光定量PCR检测IFN-α/β及其信号分子mR NA转录水平的动态变化。结果显示,与对照组相比PRRSV感染组细胞活力明显下降(p<0.01);IFN-αmR NA转录水平在6 h^36 h逐渐降低,36 h时与对照组相比差异极显著(p<0.01),48 h后转录水平有所上调,但仍显著低于对照组(p<0.01或p<0.05);IFN-βmR NA转录量在24 h、36 h、48 h和60 h显著低于对照组(p<0.01或p<0.05);MDA5、RIG-I、MAVS和IRF3 mR NA转录量在12 h显著下调(p<0.01)。这些结果表明,PRRSV能够导致PAMs活力降低,并通过抑制MDA5、RIG-I、MAVS和IRF3基因的转录水平从而抑制Ⅰ型IFN的产生。

IFN-α在SLE发生发展中的作用

目的I型干扰素在机体抗病毒或细菌感染过程中发挥十分关键的作用。近年来的研究表明,I型干扰素,尤其是干扰素-α(IFN-α),在调控机体天然及后天免疫反应的活化方面起到重要作用。系统性红斑狼疮(SLE)作为一种特别难治、病情危及多个脏器的炎症性自身免疫病,患者体内免疫系统功能严重失调,但是迄今仍不完全清楚其发病机制。值得注意的是,大量研究表明SLE患者血清中含有大量的IFN-α,并且其体内多种免疫细胞中,包括B淋巴细胞、T淋巴细胞以及粒细胞等,I型干扰素诱导基因的表达水平均显著升高。IFN-α能够引起JAK-STAT1通路活化,导致机体免疫系统异常活化,进而影响SLE的发生发展。

赤眼鳟Mx1基因的cDNA克隆及表达特性

为探究赤眼鳟(Squaliobarbus curriculus)是否存在Mx1(Myxovirus resistance)基因及参与抗病毒免疫反应,研究利用RACE技术获得了赤眼鳟Mx1基因(ScMx1)的cDNA全长序列,并对其进行了生物信息学分析;采用荧光定量PCR技术,检测了ScMx1在赤眼鳟健康组织中的表达情况以及感染GCRV后ScMx1和ScIFN-Ⅰ的表达特征。结果表明,Sc Mx1的c DNA全长为3000 bp,包含5′非编码区124 bp,开放阅读框1893 bp,3′非编码区983 bp,共编码630个氨基酸。预测的ScMx1蛋白包含GTP酶结合区域、中央核心结构域和GTP酶效应结构域。ScMx1与青鱼Mx1的相似性最高(97%),与ScMx的相似性仅为50%。ScMx1在所检测的10种组织中均有表达,其中在脾脏中表达量最高。经GCRV感染开始至168h,ScMx1和ScIFN-Ⅰ在肝脏和体肾中的表达量持续上调;在脾脏和头肾中于感染后72h达到峰值。相关性分析显示脾脏中ScMx1和ScIFN-Ⅰ的表达水平呈显著相关(r=0.94,P=0.018)。研究发现赤眼鳟存在Mx1基因,且可能参与了抗GCRV免疫应答反应。

HSP70抑制剂PFTμ对干扰素γ诱导的iNOS表达的研究

目的观察热休克蛋白70抑制剂PFTμ对干扰素γ(IFN-γ)诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮(NO)的生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用。方法采用IFN-γ诱导的RAW 264.7细胞株建立细胞炎症反应模型,采用Griess试剂法测定细胞NO释放量;采用Western blot法测定相应目的蛋白的表达;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达的变化。建立小鼠心脏缺血/再灌注(I/R)模型,分为对照组和给药组,测定小鼠心肌梗死面积的变化。结果 PFTμ可抑制IFN-γ诱导的RAW264.7细胞NO的生成、i NOS蛋白及mRNA表达。其作用机制可能是通过部分抑制RAW264.7细胞核内的IRF-1蛋白表达。PFTμ可减少缺血/再灌注小鼠心脏梗死面积(P<0.05)。结论PFTμ可通过部分抑制细胞核内IRF-1蛋白表达而发挥抗炎症反应的作用。

二甲双胍治疗系统性红斑狼疮的临床疗效及其对Ⅰ型干扰素诱导基因表达的影响

目的探究二甲双胍治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的临床疗效及其对Ⅰ型干扰素(IFN)诱导基因表达的影响。方法研究对象选取我院2020年1月至2021年2月期间收治入院的SLE患者96例,采用随机数字法将其分为对照组和观察组,每组48例。对照组患者给予激素、免疫抑制剂等常规治疗,在此基础上,观察组患者联合二甲双胍治疗12周。比较两组患者的治疗总有效率、同时比较两组患者治疗前后的SLE疾病活动指数(SLEDAI)、24 h尿蛋白定量(UAE)、血肌酐(Scr)、免疫学相关指标水平、Ⅰ型IFN诱导基因表达水平及不良反应发生率。结果观察组的治疗总有效率(95.83%)明显高于对照组(79.17%)(χ^(2)=4.67,P=0.03)。治疗后,观察组患者的SLEDAI评分、血清Scr、UAE、IgA、IgG和IgM水平均明显低于对照组(P<0.05);观察组患者的血清C3、C4水平均明显高于对照组(P<0.05)。同时,治疗后,观察组患者Ⅰ型IFN诱导基因MX1、OAS1、ISG15、LY6E的mRNA表达水平均明显低于对照组(P<0.05)。观察组与对照组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论二甲双胍治疗SLE的临床疗效显著,能有效控制疾病的活动度,同时能降低Ⅰ型IFN诱导基因的表达水平,值得在临床推广。

疏风饮抗I型超敏反应实验研究

目的研究疏风饮抗I型超敏反应的作用机制。方法应用卵白蛋白造成I型超敏反应动物模型,采用ELISA法测定疏风饮对大鼠血清中白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)及免疫球蛋白E(IgE)含量的影响。结果疏风饮可增加模型大鼠血清IFN-γ含量(P<0.05),降低模型大鼠血清IL-4、IgE含量(P<0.01)。疏风饮组和扑尔敏组比较无显著差异(P>0.05);疏风饮组IFN-γ/IL-4高于模型组,有显著差异(P<0.05),而和扑尔敏组比较无显著差异(P>0.05)。结论疏风饮防治皮肤I型超敏反应性疾病(急性荨麻疹)的作用机制可能与其通过对某些细胞因子的调节,对机体内Th1/Th2平衡产生影响有关。

IFN-γ在大鼠胸段脊髓内的分布

为进一步探讨免疫 -神经 -内分泌三大系统之间的关系 ,用免疫组织化学 SP法 ,对大鼠胸段脊髓内 IFN-γ样免疫反应产物的分布进行了研究。结果表明 ,IFN-γ样免疫反应产物广泛分布于胸段脊髓各板层。其中背角 、 、 层 ,胸髓中间带外侧核 ,腹角 层内可见到较高密度的阳性胞体和树突。中间带和腹角内的阳性胞体的树突还伸向外侧索和腹索 。

CVB对OL细胞和OL/BDV细胞I型IFN信号转导途径的影响

探讨柯萨奇病毒(coxsackievirus, CVB)对人类少突胶质细胞(oligodendrocyte, OL)和博尔纳病病毒(Borna disease virus, BDV)持续感染的OL细胞(OL/BDV)中I型干扰素(interferon, IFN)、microRNA-155(miR-155)表达以及干扰素调节因子(interferon regulatory factor, IRF)7细胞定位的影响。CVB感染OL细胞和OL/BDV细胞0、2、4、6、12和24 h,qPCR检测I型IFN mRNA和miR-155表达水平。OL细胞和OL/BDV细胞分别转染IRF7-EGFP质粒,CVB感染4 h,观察IRF7细胞定位情况。CVB感染OL细胞2、4、12和24 h,IFN-αmRNA和miR-155表达水平显著增加,IFN-βmRNA表达水平在4、12和24 h显著增加;CVB感染OL/BDV细胞IFN-α和IFN-βmRNA表达水平除0 h均显著增加,但miR-155表达仅在12和24 h显著增加。CVB感染OL细胞和OL/BDV细胞4 h,IRF7绿色荧光蛋白由细胞浆转移至细胞核内。综上所述,CVB可诱导OL细胞和OL/BDV细胞I型IFN、miR-155的表达,促进IRF7入核,从而激活I型IFN信号转导途径。

RIG-I激活抑制肠道病毒71型的复制

目的探讨细胞内病毒识别受体RIG-I激活后对EV71复制的影响。方法分别用Poly(I:C)和表达RIG-I N端的质粒转染RD细胞,24 h后感染EV71,感染24 h后收获细胞和上清。提取细胞RNA并反转录为cDNA,Real-time PCR测定细胞中RIG-I与IFN-β的mRNA的表达水平和EV71的RNA水平。用免疫印迹的方法检测RIG-I和EV71的蛋白表达水平。将感染病毒的细胞上清进行病毒滴度的测定。结果 RIG-I被激活之后RIG-I与IFN-β的mRNA的表达水平上升,并且RIG-I的蛋白表达可以被检测到。感染细胞中的EV71的RNA水平和病毒蛋白表达水平下降,并且病毒滴度显著降低。结论 RIG-I的激活以及其诱导的IFN-β对EV71的复制有抑制效应。

聚肌胞微囊对NDV感染鸡α-干扰素及免疫活性的诱导效应

通过给NDV感染肉鸡口服聚肌胞(Poly I∶C)微囊,检测其体内α-干扰素(IFN-α)、特异性和非特异性免疫功能指标。结果表明:口服型Poly I∶C微囊所呈现的治疗效果与其注射型相同,说明Poly I∶C微囊在内服吸收过程中,受消化道中核苷酸酶降解的程度并不显著;一定剂量范围内,Poly I∶C诱导产生IFN-α的能力与剂量成正比,但超过一定剂量范围(0.2 mg.kg-1)则可能产生抑制;Poly I∶C具有增强机体细胞免疫功能的能力,对体液免疫功能没有明显的调节作用。Poly I∶C微囊抗病毒作用和免疫调节作用可能是一方面通过诱导机体产生IFN-α而降低病毒对机体免疫系统的损害,另一方面则参与调节机体的细胞免疫。

加味五痹汤(肺痹)干预流感病毒感染诱导RIG-I/IFN-I信号通路作用机制研究

目的:观察加味五痹汤(肺痹)对流感病毒(IV)感染的BALB/c小鼠肺组织病理炎症及诱导RIG-I/IFN-I信号通路的作用机制。方法:SPF级BALB/c小鼠24只,随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、加味五痹汤(肺痹)组(C组)、奥司他韦组(D组),除A组外,其余3组以IV FM1-6-E2滴鼻造模。于造模后第7天进行取材,镜下观察小鼠肺组织病理切片,采用qPCR法检测RIG-ImRNA的表达、ELISA法测定血清中IFN-α/β含量、Western-blot法检测NF-κB蛋白的表达。结果:IV感染后B组小鼠肺组织出现水肿、肺泡隔增厚与炎性细胞浸润,各治疗组肺部炎症有不同程度减轻。IV感染组小鼠肺组织内RIG-I的mRNA水平显著升高,与B组相比,C组RIG-I的mRNA表达量升高(P<0.05);感染组NF-κB蛋白表达增高,各治疗组可下调其表达;感染组血清中的IFN-α/β含量增高(P<0.05),治疗组能明显升高IFN-α/β含量(P<0.05),且C组与D组比较有差异性(P<0.05)。结论:加味五痹汤(肺痹)具有抗IV感染的作用,增加RIG-I和IFN-α/β含量及抑制NF-κB表达是其作用机制之一,且RIG-I/IFN-I可能是其信号通路的作用靶点。

MID2对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的调控作用

本试验旨在研究MID2(midline 2)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制的调控作用。首先用PRRSV BJ-4毒株感染MARC-145细胞,通过RT-qPCR和Western blot技术分别检测MID2的mRNA转录水平和蛋白表达水平,发现PRRSV感染能够上调MID2的表达。为了进一步探究MID2对PRRSV复制的影响,本研究过表达或沉默MID2表达,再接种PRRSV,通过RT-qPCR和Western blot技术,检测PRRSV ORF7的转录水平及N蛋白的表达水平,结果显示MID2能够抑制PRRSV复制。随后将pCMV-Flag-MID2和pGL3-IFN-β-Luc真核表达质粒共转染到HEK293T细胞中,通过双荧光素酶报告基因试验检测IFN-β的启动子活性,结果表明MID2能够正调控I-IFN信号通路。最后将MID2与RIG-I的真核表达质粒共转染到HEK293T细胞中,通过Co-IP试验发现MID2和RIG-I存在相互作用,且MID2能够以剂量依赖的方式促进RIG-I的表达,增强RIG-I介导的I-IFN信号通路。以上结果说明,MID2可能通过与RIG-I互作,促进RIG-I的表达,并激活I-IFN信号通路,从而抑制PRRSV复制。本研究首次发现MID2通过正调控I-IFN信号通路抑制PRRSV复制。

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠RIG-I信号传导通路的影响

目的:研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的BALB/c小鼠肺组织中RIG-I信号传导通路的影响,探讨其可能的抗病毒机制。方法:RSV滴鼻感染BALB/c小鼠,不同剂量金欣口服液灌胃给药进行干预,于首次滴鼻后24 h、72 h、144 h取各组小鼠肺组织,Real time RT-PCR分别检测RSV-M、RIG-I、IPS-I和IFN-β在mRNA水平的表达情况,Western Blot检测RIG-I和IPS-I在蛋白水平上的表达情况。结果:RSV感染24 h和72 h后,其肺组织中RIG-I、IPS-I和IFN-β的表达均较正常组显著升高,金欣口服液不同剂量组RIG-I、IPS-I和IFN-β表达较RSV组明显下调;144 h后,RIG-I、IPS-I和IFN-β表达量显著下调,金欣口服液不同剂量组能上调RIG-I、IPS-I和IFN-β的低表达。结论:RSV能诱导RIG-1信号传导通路的激活从而促进IFN-β的表达,而金欣口服液能通过调控RIG-1信号通路从而调节IFN-β的表达。

MicroRNA-1285及其靶标DDX3X对猪塞内卡病毒感染PK-15细胞的调控作用

[目的]探究MicroRNA-1285(miR-1285)及其靶标DDX3X在猪塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)感染PK-15细胞中的调控作用。[方法]利用qRT-PCR、双荧光素酶活性及Western blot等方法研究miR-1285和DDX3X对I型干扰素(IFN-β)分泌及RIG-I信号通路的作用,分析miR-1285及DDX3X对SVA 3C蛋白基因表达的影响。[结果]SVA感染PK-15细胞后,miR-1285表达量显著升高,并且miR-1285与DDX3X存在负靶向关系,二者可促进IFN-β转录及蛋白水平的表达。miR-1285通过靶向DDX3X对RIG-I信号通中的MAVS、TRAF3信号分子起调控作用。对于SVA 3C蛋白基因,DDX3X可以显著抑制其转录,并且可以逆转miR-1285所诱导的上调趋势。[结论]SVA感染PK-15细胞后,宿主miR-1285及其靶标DDX3X对IFN-β及病毒3C蛋白的表达具有调控作用,研究结果将为明确miRNAs调控SVA感染的分子机制奠定基础,并为SVA的防控和诊断提供新的科学依据。

柯萨奇B_4病毒对小鼠胰岛的影响及干扰素的保护作用

采用我国流行的柯萨奇B4病毒 (CB4V)感染swiss小鼠 ,建立I型糖尿病的动物模型 ,并观察干扰素对CB4V引起的I型糖尿病的保护作用。结果表明 ,80 %的小鼠在感染后 72h出现低血糖 ,血糖在 (90 .87±8.2 6 )mg/L范围之内 ,6～ 8周全部发展为高血糖。糖刺激的胰岛素释放量在感染后 72h增加 ,但至 3～ 8周明显低于正常对照组。在用CB4V感染小鼠的同时给予干扰素 ,目的在于观察干扰素对CB4V攻击胰岛 β细胞的保护作用 ,结果经干扰素治疗后的感染小鼠 ,当给干扰素到 6周 ,80 %小鼠血糖在 (118.6 6± 5 .73)mg/L范围之内 ,而低糖与高糖刺激下的胰岛素释放量分别在 (18.34± 3.5 0 )uIU/mL ,(31.5 1± 4 .71)uIU/mL范围之内 ,均与正常对照组无差异 (p >0 .0 5 )。

IFN-γ、MVECs、中药、针灸及I-N-EN关系的探讨

γ干扰素是一种具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等生物学功能的重要细胞因子;“免疫-神经-内分泌网络”是由免疫系统、神经系统和内分泌系统三大系统共同组成的维持和调节机体正常的生理功能和内环境稳定的调节网络;微血管内皮细胞是一种多功能的代谢及内分泌“器官”;中药、针灸是中医理论基础的重要组成部分,是预防和治疗疾病的两大主要手段。文章探讨了γ干扰素、微血管内皮细胞、中药、针灸以及免疫-神经-内分泌网络的相互关系,并提出了今后的研究方向,即筛选能够诱导微血管内皮细胞分泌γ干扰素的中药及其有效成分,以此来提高动物机体的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能。

湿疹方治疗湿疹45例

目的:观察湿疹方治疗湿疹的临床疗效及对外周血白介素-4(interleukin-4,IL-4)、白介素-10(interleukin-10,IL-10)、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)水平的影响。方法:将90例患者随机分为对照组和治疗组,每组各45例。对照组采用盐酸西替利嗪联合复方甘草酸苷口服,治疗组在对照组的基础上使用湿疹方,共治疗4周。观察两组患者的临床疗效及治疗前后IL-4、IL-10、IFN-γ变化情况。结果:对照组有效率为75.56%,治疗组有效率为88.89%,两组有效率比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后IL-4、IL-10水平均较治疗前升高,且优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后IFN-γ水平较治疗前降低,且优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:湿疹方治疗湿疹疗效显著,可能主要通过升高IL-4、IL-10水平,降低IFN-γ水平起到抗炎作用。