烟曲霉菌诱导大鼠呼吸道上皮细胞IKKα调控maspin蛋白表达的初步研究

目的研究烟曲霉诱导大鼠呼吸道上皮细胞时是否存在IkB激酶-α（IKBkinase-α，IKKα）调控maspin蛋白表达下调。方法体外培养大鼠呼吸道上皮细胞（ratbronchialepithelialcells，REC），制备灭活的烟曲霉菌菌丝（Aspergillusfumigatushyphae，AFH）悬液诱导REC细胞，以磷酸盐缓冲液（PBS）为对照，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测REC中maspin基因的表达，并通过免疫细胞化学技术观察maspin蛋白及IKKα在REC的表达情况。进一步制备浓度依次增高的AFHl—3悬液诱导REC细胞，WesternBlot技术检测REC的maspin和IKKα蛋白表达。采用SPSS13．0软件进行方差分析和两变量的相关性分析。结果RT—PCR检测显示AFH组与对照组的maspin蛋白的mRNA相对表达量分别为0．128±0．059和2．972±0．353，差异具有统计学意义（t=15．883P〈0．05）。免疫细胞化学结果显示，maspin蛋白在两组中均表达，其中AFH组呈弱阳性，而对照组呈中度阳性，综合计分两组差异有统计学意义（t=3．721P〈0．05）；IKKα显色在AFH组中度阳性，在对照组弱阳性，综合计分差异有统计学意义（t=6．825P〈0．05）。WesternBlot结果maspin与B—actin的灰度比值对照组为0．912±0．023，AFHl—3组分别为0．607±0．030、0．476±0．019、0．416±0．017，组间差异有统计学意义（F=281．91，P〈0．05），且任意两组比较差异均有统计学意义；IKKα与β-actin灰度比值对照组为0．624±0．012，AFHl—3组分别为0．739±0．020、0．778±0．010、0．927±0．017，组间差异有统计学意义（F=200．91，P〈0．05），且任意两组比较差异均有统计学意义。两变量相关性分析结果显示，maspin蛋白表达与IKKα蛋白表达呈负相关关系（r=-0．911，P〈0．05）。结论AFH诱导大鼠REC中IKKα表达上调并伴有maspin蛋白表达下调。

IKKε在卵巢癌中的表达及临床意义

目的探讨I-κB激酶ε(IKKε)在卵巢癌组织中的表达及与卵巢癌转移的关系。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测53例不同临床分期的卵巢癌组织和10例正常卵巢组织中IKKεmRNA和蛋白表达,并分析IKKε表达与卵巢癌转移的相关性。结果Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌组织中IKKεmRNA和蛋白表达高于正常卵巢组织和Ⅰ期卵巢癌组织(P<0.05),且IKKε表达随着卵巢癌临床分期升高而增加(P<0.05),但与卵巢癌的病理类型、组织学分型及年龄无明显相关性(P>0.05)。结论 IKKε表达与卵巢癌的临床分期密切相关,可望成为临床治疗卵巢癌的一个新靶点。

绞股蓝皂苷对光损伤小鼠皮肤中核因子κB、p38MAPK的影响

目的观察绞股蓝皂苷（GP）对光损伤Balb／C小鼠皮肤中核转录因子kappa—B（NF—KB）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）的影响，进一步探讨GP抗皮肤光损伤的可能机制。方法将80只雌性Balb／C小鼠随机分为8组，每组10只。①空白对照组：不做任何处理；@uvB模型组：UVB照射60S；③GP乳膏I组；@GP乳膏Ⅱ组；⑤维生素E乳膏I组；⑥维生素E乳膏Ⅱ组；⑦基质I组；⑧基质Ⅱ组。I组均先外涂相应的乳膏或基质，30min后照射UVB60s；1／组均先用UVB照射60S，30min后外涂相应的乳膏或基质。采用隔日UVB照射7次Balb／C小鼠建立皮肤光损伤动物模型，应用Western印迹法检测小鼠皮肤中NF—KB抑制蛋白（IKB蛋白）、KB抑制蛋白激酶（IKK蛋白）及p38MAPK、磷酸化p38MAPK（pp38）的表达。结果空白对照组小鼠表皮中IKB、IKK蛋白未见表达。UVB模型组小鼠表皮中IKB蛋白水平为0．40±0．07，IKK蛋白为2．01±1．75。GP乳膏I组与Ⅱ组IKB蛋白表达（分别为1．63±0．85和0．90±0．40）明显高于UVB模型组（P值均〈0．05），IKK蛋白表达（分别为0．23±0．12和0．45±0．29）明显低于UVB模型组（P值均〈0．05），与维生素E组小鼠皮肤中IKB蛋白、IKK蛋白的表达结果相似。各组p38MAPK表达量没有明显差异。GP乳膏I组与Ⅱ组磷酸化p38MAPK表达水平（分别为0．425±0．054和0．571±0．090）明显低于UVB模型组（0．835±0．049），与维生素E组相似。结论UVB照射能促使NF-KB活化，激活磷酸化p38MAPK；1．5％GP乳膏能抑制UVB诱导的NF—KB通路及p38MAPK的激活，可能是其抗炎、抗光损伤的作用机理之一。

基于IKKβ/NF-κB通路探究香菇多糖联合顺铂对乳腺癌的干预作用

目的探究香菇多糖联合顺铂通过调控I-κB激酶β(IKKβ)/核因子-κB(NF-κB)通路对乳腺癌的作用机制。方法采用完全培养基将香菇多糖胶囊制备成10、20、40μg/mL的溶液,将顺铂制备成10μmol/L溶液。选用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养液进行细胞培养,将其分为模型组、顺铂组(10μmol/L),顺铂+香菇多糖组在顺铂组处理的基础上,分别加10、20、40μg/mL香菇多糖,培养48 h用于体外细胞实验,CCK-8法检测乳腺癌MCF-7细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡情况。随机将大鼠分为模型组、顺铂组(2 mg/kg)、香菇多糖组(15 mg/kg)、顺铂(2 mg/kg)+香菇多糖(15 mg/kg)组、Prostratin(0.5 mg/kg)组,每组10只。将培养的乳腺癌细胞依次注射于各组大鼠乳腺垫内进行造模。各组大鼠进行相应的给药处理,每日ip 1次,模型组大鼠ip等剂量的生理盐水,连续干预28 d。计算各组大鼠瘤体体积、数量并称重;Western blotting法检测各组大鼠NF-κB p65、NF-κB p-p65、IKKβ表达水平。结果与模型组相比,顺铂组、顺铂+香菇多糖(10、20、40μg/mL)组乳腺癌细胞增殖抑制率、细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与顺铂组相比,顺铂+香菇多糖(10、20、40μg/mL)乳腺癌细胞增殖抑制率、细胞凋亡率显著升高(P<0.05),且呈剂量相关性增长。与模型组相比,顺铂组、香菇多糖组、顺铂+香菇多糖组大鼠瘤体体积、瘤体质量、瘤体数目、瘤体内NF-κB p-p65/NFκB p65、IKKβ蛋白表达量显著降低(P<0.05);与顺铂组、香菇多糖组相比,顺铂+香菇多糖组大鼠瘤体体积、瘤体质量、瘤体数目、瘤体内NF-κB p-p65/NF-κB p65、IKKβ蛋白表达量显著降低(P<0.05);与顺铂+香菇多糖组相比,Prostratin组大鼠瘤体体积、瘤体质量、瘤体数目、瘤体内NF-κB p-p65/NF-κB p65、IKKβ蛋白表达量显著升高(P<0.05)。结论顺铂联合香菇多糖可通过调控IKKβ/NF-κB通路,抑制IKKβ表达和NF-κB磷酸化,从而减缓乳腺癌细胞增殖,加速细胞凋亡,限制瘤体发育,从而缓解疾病。

桑叶有效部位对高胰岛素诱导人肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的:观察桑叶有效部位(总多糖、总黄酮、总生物碱)影响核因子-κB(NF-κB)通路对高胰岛素诱导人肝癌Hep G2细胞胰岛素抵抗的改善作用。方法:以人肝癌Hep G2细胞为研究对象,在含10 mg·L-1胰岛素的培养基中培养48 h,建立IR-HepG2模型;采用桑叶有效部位观察对Hep G2细胞胰岛素抵抗的影响,从而确定最佳给药浓度。实验分为空白组,10mg·L-1胰岛素处理组(模型组),总多糖组,总黄酮组,总生物碱组,小白菊内酯组。采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GODPOD)法检测培养液中残存葡萄糖含量,RT-q PCR法检测NF-κB,I-κβ激酶-β(IκKβ)及核因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA的表达,Western blot检测蛋白NF-κB,IκKβ及IκBα的相对表达量。结果:经桑叶有效部位改善Hep G2细胞胰岛素抵抗的筛选得出各给药组最佳给药剂量分别为总多糖组、总黄酮组、总生物碱组、小白菊内酯组最佳给药质量浓度分别为200,100,10mg·L-1,20μmol·L-1。与空白组比较,高胰岛素刺激后,NF-κB,IκKβ含量明显升高(P<0.01),NF-κB结合蛋白IκBα明显降低(P<0.01),表明高胰岛素刺激后NF-κB通路已被部分激活;而桑叶有效部位干预后,与模型组相比,只有黄酮组NF-κB,IκKβ的含量明显降低(P<0.05),抑制IκBα的降解(P<0.05);多糖组和生物碱组影响作用不明显。结论:高胰岛素诱导人肝癌Hep G2细胞发生胰岛素抵抗后,NF-κB通路在一定程度上被激活,推测胰岛素抵抗与NF-κB炎症通路间存在一定的关系;而桑叶黄酮可影响NF-κB通路从而改善Hep G2细胞胰岛素抵抗状态。