非洲猪瘟病毒I215L蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

本研究聚焦于非洲猪瘟病毒(ASFV)I215L基因编码的泛素结合酶(UBCv1),对其进行原核系统表达并制备了多克隆抗体。以ASFV CN/GS/2018株为模板,成功扩增I215L基因并插入原核表达载体,形成重组质粒pET28a-I215L。经大量诱导表达后,利用切胶方法成功纯化出重组蛋白。将提纯后的I215L蛋白与佐剂混合对动物进行多次免疫,获得鼠/兔抗I215L蛋白的多克隆抗体。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价,鼠抗I215L多抗效价达到1∶64000以上,兔抗I215L多抗效价达到1∶512000;间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western-blot)结果显示,该多抗具有特异性识别ASFV感染后I215L蛋白的能力,并且显示出良好的效果。本研究在体外表达并纯化了ASFV I215L蛋白,成功获得鼠/兔抗I215L蛋白的多克隆抗体,这为后期ASFV I215L蛋白的结构解析、功能研究及病毒相关致病机制的探索奠定了基础。