鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗与活疫苗免疫鸡病毒载量和免疫效果的比较研究

为比较鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗与活疫苗免疫鸡法氏囊及外周血淋巴细胞(PBMC)中的病毒载量及免疫效果,本研究采用IBD免疫复合物疫苗和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,于免疫后7d、14d、21d、28d、35d、42d采用SYBRGreenI荧光定量PCR、ELISA方法及中和试验检测免疫鸡法氏囊和PBMC中IBDV载量和免疫鸡血清中IBDV抗体滴度,并攻毒,计算两种疫苗的保护率。结果显示,活疫苗免疫7d时IBDV在法氏囊和PBMC中的载量均比其它时间点的高,在14d时到达到最高,之后逐渐下降;两种疫苗刺激产生的IBDV抗体滴度随免疫时间的延长呈升高趋势;在免疫后7d攻毒两种疫苗的保护率均为0,其它时间的攻毒保护率均为100%。本研究结果表明,IBD免疫复合物疫苗与活疫苗免疫后病毒在鸡体内开始大量复制的时间并不相同,但免疫效果基本相同。本实验为IBD免疫复合物疫苗的研发提供实验依据。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗和活疫苗免疫鸡的NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ应答特性比较

为比较鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗和活疫苗免疫对鸡外周血和脾脏淋巴细胞中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ等5种免疫因子表达水平的影响,试验用IBD免疫复合物疫苗和BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,并设立空白对照。于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d取外周血和脾脏,采用ELISA方法测外周血血清和LPS刺激后脾脏淋巴细胞培养上清中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ浓度。结果表明,免疫复合物疫苗免疫对鸡外周血中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ表达基本无影响,活疫苗免疫能引起NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ表达水平上调;免疫复合物疫苗和活疫苗免疫再经LPS刺激后均能引起脾脏淋巴细胞中NF-κB、IL-8、IL-10表达水平上调,但对IL-6表达水平起下调作用,对MHC-Ⅱ表达水平无影响。提示IBD活疫苗免疫对鸡外周血和脾脏免疫功能的影响更大,结果为IBD免疫复合物疫苗的研发提供依据。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对新城疫La Sota疫苗免疫效果的影响

用鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗免疫1日龄SPF雏鸡和普通京粉雏鸡,间隔1、2周后免疫新城疫La Sota疫苗,以单独免疫新城疫La Sota疫苗为对照,免疫后2、3、4和5周对各组鸡采血测定新城疫HI效价,并在免疫5周后用新城疫强毒攻击,计算各组保护率。结果显示,1日龄时首免IBD免疫复合物疫苗间隔不同时间再免疫新城疫La Sota疫苗,与单独免疫新城疫La Sota疫苗相比,新城疫HI抗体水平均无显著差异(P>0.05)。证明IBD免疫复合物疫苗在SPF雏鸡和普通雏鸡上对新城疫La Sota疫苗免疫均无免疫抑制作用。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗和活疫苗对免疫鸡NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达的影响

为研究鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗和活疫苗免疫对鸡外周血淋巴细胞中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-Ⅱ等5种免疫因子mRNA表达的影响,试验用IBD免疫复合物疫苗和BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,并设立空白对照组,于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d取外周血,分离淋巴细胞,用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法测淋巴细胞中NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达水平。结果表明:免疫后7～42 d,活疫苗组NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达均呈现上调,且上调时间主要在免疫后7～14 d;免疫复合物疫苗对NF-κB、IL-6、IL-8、IL-10、MHC-ⅡmRNA表达基本无影响。提示IBD活疫苗免疫对鸡外周血淋巴细胞免疫功能影响大于免疫复合物疫苗。

鸡传染性囊病免疫复合物疫苗和活疫苗对鸡外周血淋巴细胞免疫功能的影响

为比较鸡传染性囊病(IBD)免疫复合物疫苗和活疫苗免疫对鸡外周血免疫淋巴细胞功能的影响,本试验用IBD免疫复合物疫苗和BX株活疫苗免疫1日龄SPF鸡,并设立空白对照,于免疫后7、14、21、2835 d和42 d采用流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率及CD4^+T、CD8^+T、Bu-1^+B细胞数变化。结果显示,免疫后7 d,活疫苗组淋巴细胞凋亡率极显著高于免疫复合物疫苗组和对照组(P<0.01),其他时间3组均无显著性差异(P>0.05);与对照组相比,免疫复合物疫苗组免疫后7~42 d主要引起CD4^+T细胞数升高(P<0.05或P<0.01),活疫苗组主要引起CD8^+T细胞数升高(P<0.05或P<0.01),但均能导致Bu-1^+B细胞数减少(P<0.05或P<0.01)。表明本免疫复合物疫苗和活疫苗均能增强鸡外周血细胞免疫功能,但对体液免疫均有一定的抑制作用。本试验为IBD免疫复合物疫苗的研发提供了依据。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对SPF雏鸡的免疫效果

用鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗和活疫苗分别免疫1日龄SPF雏鸡,免疫后9d观察法氏囊病变,免疫后14、21、28d对各组鸡采血测定IBDV中和抗体,21d及28d时用强毒攻击,计算各组疫苗保护率。结果表明,免疫后9d免疫复合物疫苗组鸡法囊正常,活疫苗组鸡法氏囊全部明显萎缩;免疫后14、21、28d,免疫复合物疫苗组鸡IBDV中和抗体分别为2.9±0.99、8.1±0.88和10.6±1.78,活疫苗组IBDV中和抗体分别为3.3±1.14、8.3±1.16和9.2±1.23,免疫后21d及28d疫苗免疫组均100%保护。试验证明免疫复合物疫苗比活疫苗更为安全,免疫复合物疫苗免疫SPF雏鸡产生比活苗更高的IBDV中和抗体,保护率达100%。

免疫刺激复合物基质为佐剂的猪支原体肺炎活疫苗肌肉注射免疫效果评价

试验旨在探讨免疫刺激复合物基质(ISCOM-基质)作为猪支原体肺炎168株活疫苗佐剂使用的可行性,并考察其配合疫苗肌肉注射时的免疫效力和攻毒保护效力。首先以Quil A、胆固醇和磷脂为原料,采用透析法制备ISCOM-基质,然后将制备好的ISCOM-基质与活疫苗混合孵育,检验其对活疫苗的毒性。于体外用ISCOM-matrix直接刺激或与刀豆蛋白共同刺激淋巴细胞,观察细胞的增殖应答情况。而后将添加ISCOM-matrix佐剂的猪支原体肺炎活疫苗肌肉注射免疫动物,检测血清抗体水平及淋巴细胞增殖应答水平,于免疫后8周攻毒,评价攻毒保护效力。结果表明,所制备的ISCOM-基质不影响活疫苗的活力,并且在体外可直接或协同刀豆蛋白刺激淋巴细胞产生明显的增殖反应,最低起效浓度为0.01 ng/ml;当作为佐剂与活疫苗配合肌肉注射免疫时,可以显著诱导动物对疫苗抗原的细胞免疫应答,体液免疫应答亦有一定程度增强。用肺炎支原体强毒攻毒后25 d剖检,免疫组病变明显较攻毒对照组减轻,显示出较好的攻毒保护效果。

免疫刺激复合物疫苗制备及其对小鼠免疫功能的影响

确定了免疫刺激复合物(ISCOM)疫苗的安全有效剂量及其对小鼠免疫功能的影响。选取体重25 g左右的昆明小白鼠60只,分为12组,每组5只,腹腔分别注射不同剂量(5-200μg)的ISCOM疫苗,观察小鼠健康状态。选取体重28 g左右的昆明小白鼠60只,分为4组,分别在腹腔注射相同剂量的灭菌生理盐水,Lipase+生理盐水,空ISCOM,Lipase+ISCOM疫苗,利用间接ELISA检测血清中特异性抗体效价。结果表明,当注射剂量为5-25μg/只时,小鼠无任何异常症状。免疫后8 d,小鼠血清特异性抗体效价(log2)可以达到10.5,显著高于对照组。因此,ISCOM疫苗能有效引起小鼠的免疫反应。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对1日龄低母源抗体水平雏鸡免疫效果的研究

将鸡传染性法代囊病病毒（IBDV）BX株抗原和IBDV高免血清按一定比例混合,初步制备了无菌的鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1-5（分别含有32、8、4、0.5及0.125单位IBDV中和抗体）,用鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1-5及BX株活疫苗分别免疫1日龄低母源抗体水平雏鸡,免疫后9d观察法氏囊病变,免疫后28d采血测定IBDV中和抗体,并用强毒攻击,计算各组疫苗保护率。结果显示,免疫后9d,复合物疫苗1-3免疫组鸡法氏囊正常,复合物疫苗4、5免疫组和BX株活疫苗免疫组分别有2/10、4/10和5/10的试验鸡法氏囊出现了病变;免疫后28d,复合物疫苗1-5免疫组和BX株活疫苗免疫组IBDV中和抗体效价分别为8.34log2、9.60log2、9.21log2、7.88log2、9.50log2和9.12log2,攻毒保护率分别为90%、100%、100%、80%、90%和80%。试验结果表明鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗2、3（分别含8、4单位IBDV中和抗体）免疫1日龄低母源抗体水平的雏鸡效果最好,攻毒保护率能达到100%。

鸡沙门氏菌外膜蛋白亚单位疫苗的研究Ⅰ.免疫激发复合物型(ISCOM)亚单位疫苗的研究

用十二烷酰肌氨酸法提取鸡沙门氏菌外膜蛋白（ＯＭＰ）.作为抗原，制备免疫激发复合物型（Immunostimulating Complex,ISOOM）亚单位疫苗。ISCOM型OMP亚单位疫苗在透射电镜下可见笼型颗粒结构，直径为６０ｎｍ～１２０ｎｍ。无菌性检测结果为无菌，具有可靠的安全性。对３周龄雏鸡肌注接种，６周龄攻毒，接种８０μｇＯＭＰ／只１ＳＣＯＭ型亚单位疫苗的雏鸡对鸡白痢沙门氏菌或鼠伤寒沙门氏菌的攻击具有显著的免疫保护力。

猪肺炎支原体P97R1抗原免疫刺激复合物的制备及对活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究

为增强肌肉注射免疫条件下猪肺炎支原体(Mhp)活疫苗的免疫刺激能力,并补充其缺乏的针对重要黏附因子P97R1的应答,本实验采用透析法制备含有P97R1的免疫刺激复合物(ISCOM-P97R1),并将ISCOMP97R1作为活疫苗的佐剂,通过小鼠模型进行免疫学评价。结果表明,电镜下观察所制备的ISCOM-P97R1具有ISCOM的典型蜂窝状结构,直径为30 nm^40 nm,P97R1蛋白的包封率可达85.6%。免疫后7 d即可在小鼠血清中检测到高水平的特异性P97R1抗体,并且其针对Mhp全菌蛋白的抗体也显著高于无佐剂的活疫苗对照组。结果表明,ISCOM-P97R1对Mhp活疫苗免疫刺激能力具有显著的增强作用,同时可以有效诱导产生针对P97R1的免疫应答,进一步增强了疫苗的保护能力。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对1日龄中等母源抗体水平雏鸡免疫效果的研究

将鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗和BX株活疫苗分别免疫1日龄中等母源抗体水平京红雏鸡,同时免疫1日龄SPF雏鸡作对照,免疫后第9天观察法氏囊病变,免疫后第28天采血测定IBDV中和抗体,并用强毒攻击,计算各组疫苗保护率。结果显示,免疫后第9天,免疫复合物疫苗组SPF雏鸡和京红雏鸡法氏囊均正常,BX株活疫苗组SPF雏鸡法氏囊出现了萎缩病变;免疫后第28天,对照SPF雏鸡和京红雏鸡的免疫复合物疫苗组、BX活疫苗组IBDV中和抗体效价分别为9.2log2、8.5log2和7.2log2、4.4log2,攻毒保护率均为100%。试验结果表明免疫复合物疫苗免疫1日龄中等水平母源抗体雏鸡效果很好,能产生较高的中和抗体,攻毒保护率能达到100%。

新城疫复合物疫苗对1日龄雏鸡免疫效果的研究

用新城疫病毒La Sota株作为复合物疫苗抗原,与新城疫特异性中和抗体混匀配制成4种不同比例的复合物疫苗,用1日龄普通雏鸡进行免疫效果对比试验。试验1～4组分别为免疫复合物疫苗1～4,试验5组免疫常规新城疫活苗,试验6组为空白对照组。免疫后3周采血测定HI抗体效价,同时用新城疫强毒北京株F48E9攻击。试验结果显示,试验1～6组HI抗体效价分别为3.2log2、3.1log2、3.3log2、3.2log2、3.1log2、2.9log2;攻毒后,试验1～6组鸡的死亡率分别为15%、20%、0%、35%、30%、50%。因此,新城疫病毒LaSota株与新城疫特异性抗体制备成复合物疫苗,能保持疫苗中抗原的免疫原性,并可减轻疫苗的毒副作用,提高疫苗的安全性,其免疫效果比常规活苗好。

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗与活疫苗体外介导鸡淋巴细胞NF-κB表达的调节通路研究

为研究鸡传染性法氏囊病(IBD)免疫复合物疫苗与活疫苗体外刺激对鸡淋巴细胞NF-κB表达的影响,以及IBD免疫复合物疫苗和活疫苗引起淋巴细胞NF-κB的表达是否与PKC通路、PTK通路、Ca2+通道的调节有关,以及对细胞内Ca2+浓度的影响,试验选取28日龄SPF鸡脾脏,分离脾脏淋巴细胞,分别用IBD免疫复合物疫苗和BX株活疫苗刺激,另外设立分别加入PKC抑制剂、PTK抑制剂、Ca2+抑制剂、NF-κB抑制剂的对照组,加LPS的阳性组,加PBS的空白组。体外分别培养21 h和45 h后,ELISA方法测定细胞培养上清中NF-κB浓度,激光共聚焦显微镜观察细胞内NF-κB核移位情况,流式细胞仪测定细胞内Ca2+浓度。结果表明,IBD免疫复合物疫苗和活疫苗体外刺激均能够引起NF-κB、Ca2+浓度升高,使NF-κB发生核移位,但免疫复合物疫苗引起细胞内Ca2+浓度的升高与对照组无显著性差异,活疫苗与对照组差异显著(P<0.05)。提示IBD免疫复合物疫苗和活疫苗体外刺激能够激活淋巴细胞内NF-κB,引起Ca2+浓度的升高,但两种疫苗引起NF-κB表达的上调与PKC、PTK通路无相关性,与Ca2+通道的调节有关。

HBsAg免疫刺激复合物型疫苗制备

目的制备中国仓鼠卵巢细胞（CHO）细胞表达的重组乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的免疫刺激复合物型（ISCOMs）疫苗。方法采用离心法和透析法制备了HBsAg的免疫刺激复合物。结果电镜下观察ISCOMs直径为30-40nm左右的蜂窝状结构。十二烷基磺酸钠电泳（SDS-PAGE）分析表明，离心法和透析法制备的颗粒的HBsAg蛋白均由P23、GP27和GP30组成。Bradfords法测定离心法和透析法制备的ISCOMs的蛋白回收率分别为31．50％和41．15％。结论HBsAg免疫刺激复合物型的成功制备为ISCOMs型乙型肝炎疫苗的研制打下了基础。

免疫刺激复合物(ISCOM)疫苗的研究进展

综述了免疫刺激复合物(ISCOM)的结构和组成,其所制疫苗引起的抗体应答、细胞应答和粘膜应答的研究近况。同时对ISCOM疫苗的作用机理和其在免疫预防中的应用作了相应的概述。

新城疫疫苗(抗原)抗体复合物诱导鸡免疫应答

本文报道了用新城疫疫苗 (抗原 )与新城疫抗血清制备的新城疫疫苗 (抗原 )—抗体复合物诱导鸡的免疫应答反应试验。结果为 1日龄和 7日龄鸡接种新城疫灭活疫苗 (抗原 )—抗体复合物 (IV -Ab -C)和新城疫活疫苗 (抗原 )—抗体复合物 (V -Ab -C)后血凝抑制 (HI)抗体效价都很低 (3log2以下 ) ,但加强免疫一次后HI抗体效价迅速升高 ,达到 4log2以上。 1日龄接种新城疫病毒IV -Ab -C 2 8d后强毒攻击保护率达 91.6 7%— 10 0 %。以上结果表明 ,新城疫疫苗 (抗原 )—抗体复合物不能诱导 1日龄和

免疫刺激复合物疫苗研究进展

免疫刺激复合物疫苗研究进展黄银君，周育彪（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）医学和兽医学发展史上最大的成就是应用疫苗免疫和预防人和动物的传染性疾病，成功地控制了部分传染性疾病的危害，并在一些国家和地区已被清除和消灭了某些传染性疾病，如美国已消...

免疫复合物疫苗用于鸡新城疫病毒感染的研究

以鸡新城疫病毒上海株sh09作为抗原,与鸡新城疫卵黄抗体IgY按照一定的比例配置免疫复合物疫苗。用无特定病原鸡进行免疫分组试验,实验分为对照组、灭活苗组、免疫复合物疫苗组3组,每隔1周取鸡测定血凝抑制(Hemagglutination Inhibition,HI)抗体效价。攻毒实验在免疫实验的基础上增加1组常规弱毒苗组。结果表明,制备的复合物疫苗在鸡体内HI抗体效价上升较显著,其免疫效果比常规疫苗好,能很好地应对强毒株的攻击。