鸡传染性支气管炎山东A株病毒S_1高可变区基因的克隆

参照国外已发表的M41高可变区S1序列设计一对引物 ,跨度为 1 .7kb左右。采用差速离心法浓缩病毒 ,提取病毒RNA ,经RT_PCR扩增 ,得到与设计同样大小的PCRDNA片段 ,将PCR产物纯化 ,与质粒载体 (pGEM_TEasyVector)连接 ,并转入大肠杆菌JM1 0 9,获取阳性克隆。增菌培养后用小量碱提取法提取质粒 ,利用PCR扩增法与EcoRI酶切分析进行鉴定。对阳性质粒DNA进行测序 ,利用Omiga2 .0、Dnasis等分子生物学软件进行分析 ,并与标准M41株、T株等进行序列比较 ,结果表明 :山东传支A株与标准M41株同源性较高 ,最大同源率为 99% ;与标准T株同源性较差 ,最大同源率为 80 %。理论酶切图谱与M41相同 ,为同一基因型。