基于IC_(50)的医疗器械细胞毒性试验方法的研究

针对ISO 10993-5:2009中规定的MTT法的振动条件和观察终点进行研究,并对IC50在MTT法结果评价中的应用情况进行探讨。研究表明,将IC50用于MTT法试验结果的定量分级评价是可行的。

铝对体外培养鸡脾淋巴细胞IC_(50)的测定

铝（Aluminum，Al）是地球上蕴藏量最多的金属元素，铝的免疫毒性作用近来已受到国内外学者的关注，已明确高剂量铝对实验动物的免疫功能有明显抑制。Synzynys^[1]研究表明，氯化铝具有明显的免疫毒性。铝暴露对鸡大脑组织钙稳态将产生失调影响^[2]。目前，国内外铝对体外培养鸡脾淋巴细胞毒性作用的研究未见有文献。本试验以体外培养的鸡脾脏淋巴细胞为试验对象，研究不同浓度铝对免疫细胞毒性作用。

维吾尔药罗勒不同提取部位对ECV304和Raw264.7细胞毒性的相关研究

目的:确定维吾尔药罗勒的不同极性提取部位的细胞毒性,为后续研究提供可靠的实验依据。方法:采用MTT比色法筛选出最佳的细胞铺板密度及给药浓度,并检测罗勒5个不同提取部位对ECV304和Raw264.7细胞的毒性作用,进而确定各部位药的IC50值。结果:两种细胞在96孔板中的最佳接种密度均为1×105个/ml,在溶媒DMSO的最大终体积浓度为1%的条件下,OBL-乙醇、OBL-石油醚,OBL-氯仿,OBL-乙酸乙酯,OBL-正丁醇IC50值分别为320,62.4,29.3,84.8,258μg/ml。结论:维药罗勒各提取部位对ECV304和Raw264.7细胞有不同的毒性作用,为后续研究提供了较为可靠的实验依据。

镍离子体外细胞毒性研究

该文的目的在于深入研究镍离子的细胞毒性,为含镍医疗器械生物学评价提供基础数据。该文选取小鼠结缔组织细胞(L929)、小鼠胚胎心肌细胞(H9c2(2-1))、人胚肾细胞(293[HEK-293])、人成骨细胞(h FOB1.19)、人肝永生化细胞(THLE-3)、人T淋巴瘤细胞(H9)、人外周血B淋巴细胞(IM-9)等七种细胞,按医疗器械细胞毒性试验推荐的MTT法检测,对不同镍离子浓度下细胞毒性进行研究。得出每种细胞在不同镍子浓度下的细胞增殖率,并对细胞毒性进行分级,同时计算每种细胞的IC50值。结果表明不同细胞对镍离子的敏感度不同,H9细胞对镍离子最敏感,而L929细胞对镍离子的毒性最耐受。当镍离子浓度不大于1.25 mg/L时,所有细胞的细胞毒性均不大于1级,可认为此浓度以下为所选七种细胞的细胞毒性安全区。若以L929细胞作为医疗器械细胞毒性评判依据,镍离子浓度在5 mg/L以下时无细胞毒性。本研究结果为初步判断含镍医疗器械中镍离子溶出是否引起细胞毒性及全身毒性提供了实验依据。

苦碟子注射液的体外细胞毒性研究

目的:探讨苦碟子注射液(KDZ)的安全剂量及体外细胞毒性评价的可行性。方法:采用MTT法检测沈阳、通化两个厂家共12批次的KDZ对小鼠成纤维细胞(L929)的细胞毒性级别,并比较各两厂家之间的半数抑制浓度(IC50)差异是否存在统计学意义。结果:12批KDZ的给药浓度与OD值成显著的负相关,相关系数分别为-0.986和-0.924;12批KDZ原液对L929的细胞毒性级别均为4级,稀释64倍时毒性级别均为1级;两个厂家KDZ的IC50比较差异并无统计学意义(P>0.05)。结论:当KDZ稀释64倍时对L929细胞基本无毒,采用细胞评价方法对KDZ进行安全性评估是可行的。

三聚氰胺等4种物质的毒性比较研究

试验旨在通过细胞毒性试验、急性毒性试验对三聚氰胺及其类似物的毒性进行了初步研究。结果表明,三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺、单氰胺的半数抑制浓度(IC50)分别为10.11、3.17、22.560、.305 mg/ml,而三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺的半数致死量(LD50)均大于5000 mg/kg,单氰胺的半数致死量(LD50)小于500 mg/kg。表明三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺为微毒或基本无毒,单氰胺为高毒。

三类钠盐阴离子表面活性剂对CHO细胞增殖活性的影响

探讨三类钠盐阴离子表面活性剂分子结构与其细胞增殖活性之间的关系.运用噻唑蓝比色法检测三类钠盐阴离子表面活性剂对CHO细胞增殖活性的影响,并用半数抑制浓度IC50值表征其毒性大小.结果表明:三类钠盐阴离子表面活性剂的促进作用随其碳链长度的增加而减小;三类钠盐阴离子表面活性剂的抑制作用随其碳链长度的增加而增大;细胞毒性由大到小为烷基硫酸酯钠盐,烷基磺酸钠盐,烷基羧酸钠盐.

氯解磷定注射液的杂质谱

目的研究氯解磷定注射液的杂质谱。方法用高效液相色谱对2家企业41批样品进行杂质定量检测,根据液-质联用分析和定向合成确证杂质结构,采用质量平衡法标化杂质对照品并分别测定校正因子。对已获得对照品的杂质进行IC50细胞毒性评价。结果氯解磷定注射液的主要降解杂质为杂质A、C和F(氯解磷定的Z型异构体),其中杂质A的IC50值约为主成分的1/3,需重点检测和控制。结论通过对氯解磷定注射液杂质谱的研究,确定了氯解磷定的8个杂质并分析了杂质的来源与毒性,为质量控制提供参考。

利用BALB/c3T3细胞毒性预测急性经口毒性初试剂量的验证研究

目的依据经济合作与发展组织(OECD)2010年7月正式发布的导则No.129来验证"利用BALB/c 3T3成纤维细胞预测急性经口毒性试验初始剂量"在国内实验室的可行性和适用性,并为建立细胞毒性试验预测急性经口毒性试验初始剂量试验的操作规程提供方法学上的依据。方法将BALB/c 3T3细胞接种于96孔板中,培养1 d后染毒。染毒2 d后,用中性红染色3 h后解吸,于540 nm下用酶标仪测定吸光度(A)值。将原始数据进行处理和拟合分析,得到IC50(抑制细胞活性50%的化学品浓度)后,代入预测模型计算,得到急性经口毒性的LD50推测值。试验所用受试物共8种,分别为二甲基亚砜,乙醇,氯化钠、葡萄糖以及4种本实验室用于大鼠急性经口毒性评价试验的样品。结果根据国内现行的毒性分级标准可知,利用细胞毒性试验得出的受试物的LD50值与文献所报道的或本实验进行的急性经口试验得到LD50值的毒性分级基本一致。结论利用BALB/c 3T3细胞毒性试验可以较为准确的判断急性经口毒性试验的初始剂量。

产高活性抗癌物质卵黄状多囊菌JSW103(粘细菌)的筛选

以肿瘤细胞株为筛选模型,对分离的粘细菌代谢的产物进行定向、高通量筛选,在较短时间内得到了1株产高活性抗癌物质的粘细菌。根据其形态鉴定为多囊菌属(Polyangium)的卵黄状多囊菌(Polyangium vitellinum),命名为JSW103。JSW103代谢产生的甲醇提取的混合物对肿瘤细胞系B16和SGC7901体现有较强的选择性,其IC50分别达到了0.2701μg/mL和0.097μg/mL,并且对Bel 7402、H446、MCF-7也表现出较高的活性。

甲基莲心碱增强阿霉素抗肿瘤作用的体外实验研究

目的观察甲基莲心碱(neferine，Nef)在体外对阿霉素(adriamycin，ADR)抗肿瘤作用的影响以探讨其化疗增敏作用。方法以人乳腺癌细胞(MCF-7／S)和人骨肉瘤细胞(Soas-2)为细胞模型，采用MTT法检测药物的细胞毒性，PI染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果1、5、10μmol／L Nef对细胞无明显细胞毒性，但可使ADR对人乳腺癌细胞(MCF-7／S)和人骨内瘤细胞(Soas-2)的IC50下降。不同浓度ADR分别与5，10μmol／L Nef合用24h后，MCF-7／S细胞和Soas-2细胞的凋亡率分别较不合用Nef时增加。结论Nef能增强ADR的体外抗肿瘤作用，可能是一种化疗增敏剂。

盐酸千金藤碱抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的探讨盐酸千金藤碱(CH)对乙型肝炎病毒的体外抑制作用。方法 MTT法检测CH对HepG2.2.15的细胞毒性;酶联免疫吸咐(ELISA)法检测不同浓度CH对细胞上清液中HBsAg和HBeAg的影响;荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测CH在用药后第9天对细胞内外HBV DNA拷贝数的影响。结果 CH对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)为10.24μmol/L;对HBsAg和HBeAg分泌的半数抑制浓度(IC50)分别为7.01,6.64μmol.L-1,治疗指数(TI)分别为1.46,1.54;对细胞上清液中HBV DNA拷贝数的IC50为3.49μmol.L-1,对细胞内HBV DNA拷贝数的IC50为4.25μmol.L-1,TI值分别为2.93,2.41。结论 CH在体外对HBsAg和HBeAg的分泌和对细胞内外HBV DNA的复制均有明显的抑制作用。

十种苯丙氨酸衍生物对小鼠黑色素瘤细胞系B16的作用研究

该文研究了十种苯丙氨酸(Phe)的对位衍生物Fp、Clp、Bp、Ip、Ap、Np、Sp、Mp、Pp、Cp对小鼠黑色素瘤细胞系B16的细胞毒性、诱导细胞凋亡作用和抑制细胞成集落作用。结果表明,它们的细胞毒性大小依次为Pp、Fp、Mp、Ip、Sp、Ap、Bp。其中Mp和Ip的毒性相近,Sp和Ap的毒性相近。它们诱导细胞凋亡的作用强弱依次为Fp、Mp、Ip。其中Mp和Ip的作用相近。它们抑制细胞成集落的作用大小依次为Pp、Fp、Ip、Mp、Sp、Bp、Np、Ap。其中Pp、Fp、Ip、Mp的作用相近,Sp、Bp、Np的作用相近。初步的细胞毒理分析表明,Fp、Mp、Ip能够诱导B16细胞凋亡和抑制B16细胞形成集落。

双氯芬酸缓释胶囊与片剂的杂质谱研究

目的:研究双氯芬酸钠缓释胶囊剂和双氯芬酸钾片剂的杂质谱。方法:用液相色谱进行杂质检测分析,根据液质分析和定向合成确证杂质结构,采用质量平衡法标化杂质对照品,并进行IC50细胞毒性评价和基因毒性预测;通过对19家企业170批样品的进一步实验与综合分析推断杂质的来源,并根据杂质形成的原因提出针对性防控措施。结果:双氯芬酸钠和双氯芬酸钾制剂易降解,其中杂质B、C毒性高,需重点检测和控制。结论:双氯芬酸制剂易受水分和光照等因素影响而降解,不同企业药品的杂质水平存在较大差异,可通过一系列措施提高药品质量。