ICAP1α基因及其突变体T38A、I138A真核表达载体的构建和鉴定

目的:整合素β1-ICAP1α复合体在细胞黏附等过程中介导双向跨膜信号转导,并与囊泡特异性标记物共定位。文中构建并鉴定ICAP1α基因及其突变体T38A、I138A真核表达载体。方法:以pCMV-SPORT6/ICAP1α质粒为模板,PCR扩增ICAP1α基因片段,双酶切后与AAV载体重组连接。同时采用重叠PCR定点突变法构建其突变体pAAV-T38A、pAAV-I138A表达载体。重组质粒经酶切鉴定和DNA序列测定,筛选出重组pAAV-ICAP1α、pAAV-T38A和pAAV-I138A真核表达载体。结果:阳性重组质粒酶切后测序比对鉴定,与预期序列完全相符。结论:成功构建pAAV-ICAP1α、pAAV-T38A和pAAV-I138A真核表达载体,可为ICAP1α基因及其突变体T38A、I138A的生物学功能研究提供基因材料。