ICOS-Ig融合蛋白阻断ICOS信号通路可抑制异基因反应性T淋巴细胞的功能

本研究探讨ICOS-Ig融合蛋白阻断ICOS-B7h信号通路对异基因反应性T淋巴细胞的作用和机制。建立稳定高表达ICOS-Ig的CHO细胞株,培养制备纯化的ICOS-Ig融合蛋白;以C57BL/6小鼠脾脏来源的CD4+淋巴细胞为反应细胞,BABL/C骨髓源成熟树突状细胞为刺激细胞,应用不同浓度梯度的ICOS-Ig干预,以相同浓度的人Ig作为对照。结果显示:获得的目标蛋白的分子量为54kD,内毒素含量<10EU/ml。ICOS-Ig在≥10μg/ml时可显著减少DC刺激引起的异基因反应性T淋巴细胞的增殖效应(p<0.01)。ICOS-Ig不影响T淋巴细胞的活化,ICOS-Ig浓度与CD4+ T淋巴细胞的凋亡成正相关。单纯刺激组、ICOS-Ig10μg/ml和20μg/ml干预组的CD4+Annexin V+PI-细胞群的频率分别为15.1%、26.4%和33.6%。ICOS-Ig作用后,Th1细胞因子TNFα分泌降低,Th2细胞因子IL-4分泌增加。结论:ICOS-Ig融合蛋白阻断ICOS通路可明显减弱异基因反应性T淋巴细胞的增殖反应,并改变Th细胞的极化,对CD4+ T淋巴细胞的活化无影响,但可促进活化的T淋巴细胞凋亡。

ICOS信号对感染日本血吸虫小鼠CD154/CD40表达的影响

目的探讨可诱导共刺激分子(Inducible costimulator,ICOS)信号对感染日本血吸虫小鼠的CD154/CD40表达及免疫病理的影响。方法建立ICOS转基因(ICOS transgenic,ICOS-Tg)小鼠及野生型FVB/NJ小鼠日本血吸虫病模型,应用流式细胞术、免疫组化技术分别检测感染前后的小鼠脾淋巴细胞与肝脏虫卵肉芽肿周围炎性浸润细胞CD154、CD40表达水平。应用HE染色法观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变动态变化。结果与野生型FVB/NJ小鼠相比,ICOS-Tg小鼠脾淋巴细胞CD154、CD40表达水平升高,在感染后12、16周差异有统计学意义(P均<0.05);ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿炎性浸润细胞CD154、CD40表达亦显著升高,在感染后7、12、16、20周差异有统计学意义(P均<0.05)。且ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿体积显著大于野生型小鼠(P<0.01或0.05)。结论在日本血吸虫感染中,ICOS信号对CD154/CD40表达具有一定的调控作用,在免疫病理中起重要调控作用。

细胞因子IL-10对ICOS-GL50信号介导的T细胞依赖性B细胞产生抗体的促进作用

目的研究ICOS—GL50信号在T细胞依赖性B细胞体外增殖、抗体分泌中的作用，进一步探讨细胞因子IL-10对ICOS-GL50信号介导的体液免疫中的作用。方法分别采用台盼蓝活细胞计数法和ELISA法检测ICOS—L929基因转染细胞和细胞因子IL—10对PWM介导的B细胞体外增殖及分泌抗体的效应。结果ICOS-L929基因转染细胞能够促进PWM介导的B细胞体外增殖，而不能显著上调抗体的分泌；加入IL-10后，能显著促进PWM介导的B细胞体外增殖和抗体分泌。结论细胞因子IL-10在ICOS—GL50信号介导的机体T细胞依赖的体液免疫应答反应中发挥着重要的协同作用。

ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫对CD28/CD86表达及Th1/Th2极化的影响

目的探讨上调可诱导共刺激分子(ICOS)信号对感染日本血吸虫小鼠CD28/CD86的表达及Th1/Th2极化的影响。方法建立ICOS转基因(ICOS-Tg)小鼠及野生型FVB/NJ小鼠日本血吸虫病模型,应用流式细胞术分析感染前(0周)和感染后(4～20周)小鼠的脾CD4+T淋巴细胞上CD28与脾CD19+B淋巴细胞上CD86的表达水平。应用免疫组化法检测同期小鼠肝脏虫卵肉芽肿周围炎性浸润细胞上CD28、CD86表达水平变化。取同期小鼠脾淋巴细胞用SEA进行诱导培养72 h后,采用ELISA法检测培养上清中Th1(IFN-γ、IL-12)及Th2(IL-4、IL-13)细胞因子表达水平。采集同期小鼠的血清,应用ELISA法检测血清中SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的表达水平。应用HE染色法观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变动态变化。结果ICOS-Tg小鼠脾CD4+T细胞上CD28和脾CD19+B细胞上CD86的水平与同期野生型FVB/NJ小鼠相比明显升高,且分别在感染4周后(50.57±7.54 vs 40.38±5.43,P<0.05)及在感染12周后(76.46±10.55 vs 65.10±10.17,P<0.05)差异显著。ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿的CD28、CD86表达亦高于野生型FVB/NJ小鼠的水平,且分别在感染7周后(0.485±0.094 vs 0.357±0.078,P<0.05)及感染12周后(0.649±0.072 vs 0.537±0.064,P<0.05)差异显著。ICOS-Tg小鼠Th2细胞因子(IL-4、IL-13)水平从感染7周后比野生型FVB/NJ小鼠显著升高(皆P<0.05);ICOS-Tg小鼠血清SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的水平显著高于野生型FVB/NJ小鼠的水平(P<0.05、0.01、0.001不等);ICOS-Tg小鼠Th2分化指数与IgG1/IgG2a的比值亦高于野生型小鼠,分别在感染7、12、16、20周后(P<0.05、0.001)及12、16周后(皆P<0.05)具有显著性差异。在整个病程中,ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿体积显著大于野生型FVB/NJ小鼠。结论感染日本血吸虫的ICOS-Tg小鼠CD28、CD86表达及其Th2免疫应答显著上调,并伴随肝虫卵肉芽肿病变增强,表明ICOS信号对CD28-CD86信号通路具有一定的调控作用,且在介导Th2极化及肝虫卵肉芽肿的发生、发展中发挥重要作用。

可诱导共刺激分子/可诱导共刺激分子配体信号通路对血吸虫肝纤维化的影响

目的 探讨可诱导共刺激分子（ICOS）/可诱导共刺激分子配体（ICOSL）信号通路对日本血吸虫病所致肝纤维化的影响.方法 建立ICOSL基因敲除（ICOSL-KO）日本血吸虫病小鼠模型78只和野生型C57BL/6J日本血吸虫病小鼠模型77只,分别于感染前（0周）及感染后4、7、12、16和20周采集小鼠血清,应用ELISA法检测血清中透明质酸（HA）和羟脯氨酸（HYP）的含量.应用免疫组织化学法检测小鼠肝脏中TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白（Collagen-Ⅰ）水平.分别应用HE染色法和胶原纤维Masson染色法动态观察感染小鼠肝脏内虫卵肉芽肿病变及纤维化程度.组间计量资料比较采用t检验,组间率的比较采用x2检验.结果 小鼠感染日本血吸虫后,随着时间的延长,其血清中HA、HYP水平逐渐升高.在感染后7、12、16和20周,ICOSL-KO小鼠血清HA水平均低于野生型小鼠[（161.32±15.44）比（186.01±21.24） ng/mL,t=2.528 2,P＜0.05;（166.73±18.18）比（231.39±20.12） ng/mL,t=4.342 4,P＜0.05;（193.58±21.06）比（252.51±25.29） ng/mL,t=4.003 9,P＜0.05;（253.98±24.53）比（310.88±23.86） ng/mL,t=3.718 0,P＜0.05].而ICOSL-KO小鼠的血清HYP水平则在感染后12、16和20周均低于野生型小鼠,两组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）.免疫组织化学检查结果显示,ICOSL-KO小鼠于感染后7～20周肝脏TGF-β1、α-SMA和Collagen-Ⅰ蛋白表达水平皆显著低于野生型小鼠（均P＜0.05）.肝组织HE染色结果显示,ICOSL-KO小鼠的肝脏虫卵肉芽肿体积小于野生型C57BL/6J小鼠（均P＜0.01）.Masson染色结果显示,ICOSL-KO小鼠肝纤维化程度显著低于野生型小鼠,两组纤维化程度评分的差异有统计学意义（均P＜0.05）.野生型C57BL/6J小鼠死亡率高于ICOSL-KO小鼠,在感染后20周,两组病死率的差异有统计学意义（55.84％比37.18％,x2=5.427,P＜0.05）.结论 感染日本血吸虫的ICOSL-KO小鼠肝纤维化程度和相关指标均显著降低,表明ICOS/ICOSL信号通路与感染日本血吸虫导致的肝纤维化密切相关.