ICOSL敲基因小鼠日本血吸虫病模型的免疫应答及其免疫病理(英文)

目的观察ICOSL敲基因(ICOSL knockout,ICOSL-KO)小鼠感染日本血吸虫后的免疫应答及其免疫病理反应。方法建立ICOSL-KO小鼠及野生型C57BL/6J小鼠日本血吸虫病模型,收集感染前(0周)和感染后(4～20周)的小鼠脾淋巴细胞用SEA进行诱导培养72小时后,采用ELISA双抗夹心法检测培养上清中Th1(IFN-γ、IL-12)及Th2(IL-4、IL-10、IL-13)细胞因子表达水平。应用ELISA法检测同期血清中SEA特异性抗体IgG、及其亚类IgG1、IgG2a的表达水平。应用HE染色法观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变。结果ICOSL-KO小鼠Th1细胞因子IFN-γ、IL-12表达明显高于野生型小鼠,而其Th2型细胞因子(IL-4、IL-10、IL-13)表达水平却显著低于野生型小鼠。ICOSL-KO小鼠血清SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的水平显著低于野生型C57BL/6J小鼠的水平,其Th2分化指数与IgG1/IgG2a的比值亦低于野生型小鼠的水平,特别是在感染7、12、16周后具有显著性差异。且ICOSL-KO小鼠的肝脏虫卵肉芽肿病变显著小于野生型小鼠。结论感染日本血吸虫的ICOSL-KO小鼠Th2免疫应答显著下调并导致肝虫卵肉芽肿病变减弱,表明ICOS–ICOSL信号通路在血吸虫病免疫病理中具有重要作用。

基因敲入小鼠甲亢性低钾型周期性麻痹模型的评价

目的用基因敲入Ca V1.1-R528H小鼠建立甲亢性低钾型周期性麻痹模型并对其进行评价。方法8周龄基因敲入Ca V1.1-R528H雄性小鼠及8周龄野生型C57BL/6J雄性小鼠各36只,采用三因素两水平2×2×2析因设计方法按体重随机原则(三因素分别为突变、甲状腺素及胰岛素因素,两水平为有或无)分为8组。其中有甲状腺素处理组的小鼠制备高甲状腺素毒症,按350μg/kg体重连续腹腔注射左旋甲状腺素钠12 d,末次给药后有胰岛素处理组按0.8 U/kg体重给予腹腔注射短效胰岛素,分别检测并记录各组小鼠注射前(0 min)及注射后(30、60 min)的血钾。结果 (1)制备高甲状腺素毒症的小鼠出现烦躁不安、易激怒及毛色枯燥现象,相比对照组,饮食及饮水量明显增多,而体重增加缓慢。甲状腺功能检测显示T3、T4明显高于相应对照组,TSH明显低于相应对照组,且差异均有显著性(P<0.05)。(2)单独给予甲状腺素或胰岛素处理,突变组与野生组血钾同时间点比较并没有统计学差异,而在高甲状腺素毒症下给予胰岛素处理后,突变组与野生组同时间点(30、60 min)比较突变组血钾显著低于野生组(P<0.05)。(3)主效应及交互作用:单独突变因素或甲状腺素因素对血钾并没有作用,仅有胰岛素对降低血钾有作用(P<0.05);甲状腺素因素和突变因素之间以及胰岛素因素和突变因素之间均有交互作用(P<0.05);甲状腺素因素和胰岛素因素之间没有交互作用。结论 (1)高甲状腺素毒症制备成功。(2)利用基因敲入Ca V1.1-R528H小鼠成功的建立了甲亢性低钾型周期性麻痹模型。

肾癌敲基因小鼠模型建立及应用的研究进展

肾癌是一种高度遗传异质性的遗传疾病。目前多个重要的肾癌相关基因已被克隆。这些基因包括VHL、FH、c-Met、TSC1、TSC2、FLCN、PBRM1、BAP1、SETD2、Trp53、PTEN及APC等。为了研究肾癌的发病机理和测试新的治疗方法,与这些基因相应的敲基因肾癌小鼠模型已经建立。可是,除了TSC1、TSC2、FLCN和Trp53外,大部分单基因敲除小鼠模型未能产生与人类肾癌相似的表型。最近的VHL-PBRM1、VHL-BAP1、PBRM1-BAP1肾特异性双基因敲除小鼠模型普遍产生透明肾细胞癌(CCRCC),是肾癌敲基因小鼠模型发展史上的一个新的里程碑,为肾癌的研究和药物测试提供了新的工具。肾特异性FLCN敲基因小鼠模型和VHL-Trp53-Kif3a三基因敲除小鼠模型已用于药物试验,并成功地取得了预期的结果。

ODF2基因敲减对小鼠精子活力和生育力的影响

目的:探讨外周致密纤维蛋白2(ODF2)基因敲减对小鼠精子活力和生育力的影响。方法:构建了3个携ODF2目的基因的基因敲减腺病毒载体及一个空载对照载体。感染ICR小鼠后,通过RT-PCR和Western印迹实验从3个目标载体中确定敲减效果最佳的载体。用此载体感染小鼠,分析基因敲减小鼠多项精子运动参数、睾丸组织病理以及小鼠产仔情况。结果:用敲减效果最佳的载体感染小鼠发现,基因敲减小鼠的精子多项运动参数显著低于正常对照组,睾丸组织生理结构出现异常,产仔数与对照组比较下降明显[(10.86±1.28)只vs(12.72±2.05)只,P=0.001]。结论:ODF2基因表达减少的确会造成小鼠精子多项运动参数异常、睾丸生理结构异常和生育力下降。

YBX1基因肠道特异性敲低小鼠模型的建立

Y-盒结合蛋白1(Y-box binding protein 1,YBX1)是冷休克蛋白超家族的成员,由YBX1基因编码。YBX1在机体多个组织中高度表达,参与多种生理功能的调节。然而目前YBX1在肠道中的作用尚不清楚。本研究先用CCK-8法在细胞水平上检测过表达/抑制YBX1基因对猪(Sus scrofa)肠上皮细胞IPEC-J2、大鼠(Rattus norvegicus)肠上皮细胞IEC-6增殖的影响。然后利用Cre-loxP基因敲除系统,构建YBX1基因肠道特异性敲低小鼠(Mus musculus)模型。通过YBX1flox/flox小鼠与PVillin-Cre^(+/-)小鼠杂交繁育获得子代小鼠。利用PCR方法鉴定小鼠基因型,采用实时定量PCR技术(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测YBX1基因肠道特异性敲低小鼠和对照小鼠YBX1的表达情况,验证基因敲低的效率。结果表明,过表达/抑制YBX1基因不影响细胞增殖,模型小鼠YBX1的mRNA水平下降为对照鼠的62%,蛋白水平下降为对照鼠的63%,证明YBX1基因肠道特异性敲低小鼠构建成功,为深入研究YBX1在肠道中的功能和作用机制提供稳定可靠的动物模型。

腓骨肌萎缩症2型(CMT2)小鼠模型的研究进展

腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease,CMT)是人类最常见的遗传性运动和感觉神经疾病之一,全球群体发病率约为1/2500。CMT主要分为脱髓鞘型(包括CMT1,CMT3,CMT4和CMTX1)和轴索型(CMT2)。迄今为止,先后已有17个CMT2的致病基因被定位和克隆,然而对这些基因的致病机制所知甚少。建立CMT2小鼠模型是从动物水平研究突变基因致病机制的有效手段。目前已成功构建了近10种CMT2的转基因小鼠、基因敲除小鼠或基因敲入小鼠模型,其中尤以带有人源致病基因的转基因小鼠模型为多。文章简要介绍了CMT2小鼠模型构建策略,着重阐述了CMT2小鼠模型的研究进展,并对个别小鼠模型进行了剖析。

胎盘糖皮质激素受体低表达对孕期抑郁模型雌性子代的影响

目的探索糖皮质激素受体(GR)对孕期抑郁小鼠子代抑郁倾向的影响。方法利用普通小鼠进行孕期抑郁(PND)造模,并用Western blot检测不同性别胎盘绒毛中GR表达情况;利用转基因工具鼠获得胎盘GR敲低小鼠,共20只。Western blot检测胎盘GR敲低效果并分析胎盘组织学改变;对胎盘GR敲低小鼠进行孕期抑郁造模,比较GR敲低组抑郁孕鼠的仔鼠(KD)与GR非敲低组仔鼠(N-KD)生长发育情况;动物行为实验检测仔鼠运动能力和抑郁倾向。结果PND小鼠雌性仔鼠胎盘绒毛GR表达显著升高(P<0.05);胎盘GR敲低小鼠的胎盘GR表达显著降低(P<0.05);KD组仔鼠胎盘形态未见异常(P>0.05);KD组仔鼠生长发育未见异常(P>0.05);KD组仔鼠成年后运动能力未见异常(P>0.05);KD组雌性仔鼠在成年后更有抑郁倾向(P<0.05)。结论敲低胎盘GR可能增加孕期抑郁小鼠雌性子代抑郁倾向。