苏云金芽胞杆菌ICP基因工程菌的研究进展

综述了近年来国内外利用杀虫细菌苏云金杆菌ＩＣＰ基因构建工程菌，包括植物根际定居菌、植物疫苗、重组杀蚊蓝细菌和杆状病毒Ｂｔ重组菌等研究的历程及现状、成功的范例及存在问题．文中亦讨论了该研究领域的应用前景．

重组苏云金杆菌ICP基因工程菌研究进展

综述了苏云金杆菌ICP基因及重组ICP工程菌的研究进展,描述了工程菌构建的主要方法,以及目前构建获得的各类ICP工程菌的特点,讨论了ICP工程菌的应用前景和发展方向。

特异性干扰ICP27基因的siRNA对HSV-1病毒复制的影响

针对单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)的ICP27基因和其他疱疹病毒相关基因的高度保守区设计小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),研究其抑制病毒复制的效果。首先构建相应的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA),然后通过病毒滴度测定、real-time PCR和细胞致病变效应(cytopathic effect,CPE)检测所设计的siRNA抑制病毒复制的能力。结果显示,所设计的shRNA-2(靶序列起始位置815)和shRNA-3(靶序列起始位置1 367)具有明显地抑制病毒复制的效果。尤其是shRNA-3,抑制病毒复制的效果更明显,在病毒滴度实验中,与阴性对照相比,其抑制倍数为81,同时可以下调ICP27基因的mR NA表达水平。实验结果表明shRNA-3能够显著抑制HSV-1病毒复制的能力,可以作为HSV-1感染性疾病的补充治疗手段,其对应的靶序列可以作为抗HSV-1新的靶标。

shRNA表达载体对HSV-2 ICP4基因的干扰效应

目的构建针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2) ICP4基因的短发夹RNA(shRNA)重组表达载体,探究该载体表达的shRNA对HSV-2的抑制作用。方法重组表达载体通过脂质体转染法转染HEK293细胞,并接种HSV-2,48h后,实时荧光定量RT-PCR检测mRNA转录情况,Western blot检测ICP4蛋白的表达情况,终点滴定法测定病毒的滴度。结果与对照组相比,干扰组对mRNA抑制率为71%,使蛋白表达减少71.81%,并且病毒滴度也明显降低(P<0.05)。结论构建的pGPU6/Neo-shRNA ICP4重组质粒表达载体能在体外细胞水平上干扰HSV-2 ICP4的基因表达,抑制HSV-2在细胞中复制。

鸡传染性喉气管炎病毒WG株ICP4基因的鉴定及其在潜伏位点的表达

根据传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)SA-2株ICP4基因序列设计并合成3对引物,以ILTV中国王岗株(WG)DNA为模板扩增ICP4基因,并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列,分别与ILTV SA-2株、BHV-1、EHV-1、EHV-4、MDV-1、MDV-2、HVT、PRV、VZV、HSV-1和HSV-2的ICP4基因及其推导的氨基酸序列比较后发现,ILTV毒株之间ICP4基因相对保守,核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为99.7%和99.1%,但与其它α-疱疹病毒的ICP4基因的同源性则较低,低于3.0%。对潜伏感染鸡三叉神经节中病毒基因的检测显示,在人工感染ILTV WG株后第10 d～60 d内均能检测到ICP4特异RNA,而gB、gC、TK则未能检出。鉴于目前国内外对α-疱疹病毒潜伏感染相关基因以及ICP4基因序列和结构功能的研究,ILTV WG株ICP4基因的克隆和序列测定,以及病毒基因在潜伏感染鸡三叉神经节中的差异表达,为进一步研究ICP4基因的功能及确定潜伏感染相关基因奠定了基础。

鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株ICP4基因的鉴定及其在潜伏位点的表达

根据传染性喉气管炎病毒（Infectious Laryngotracheitis Virus，ILTV）SA2株ICP4基因序列设计并合成3对引物，以ILTV中国王岗株（WG）株DNA为模板扩增ICP4基因，并对其进行了序列测定。将ILTV WG株的ICP4基因及其推导的氨基酸序列分别与ILTVSA-2株、BHV-1、EHV-1、EHV-4、MDV-1、MDV-2、HVT、PRV、VZV、HSV-1和HSV-2的ICP4基因及其推导的氨基酸序列比较后发现，ILTV毒株之间ICP4基因相对保守，核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为99．7％和99．19／5，但与其他α-疱疹病毒的ICP4基因的同源性则较低，低于3．0％。对潜伏感染鸡三叉神经节中病毒基因的检测显示，在人工感染ILTVWG株后第10460d内均能检测到低水平的ICP4特异RNA，而gB、gC、TK则未能检出。鉴于目前国内外对α-疱疹病毒潜伏感染相关基因以及ICP4基因序列和结构功能的研究，ILTVWG株ICP4基因的克隆和序列测定，以及病毒基因在潜伏感染鸡三叉神经节中的差异表达，为进一步研究ICP4基因的功能及确定潜伏感染相关基因奠定了基础。

CFTR基因突变与特发性慢性胰腺炎

慢性胰腺炎发病机制中遗传因素的作用,目前尚未完全明确。研究表明,特发性胰腺炎患者可有CFTR基因突变。现就CFTR基因突变及其与特发性胰腺炎之间关系作一综述。

传染性喉气管炎病毒田间分离株与疫苗株的遗传进化关系分析

采用PCR方法扩增了22个传染性喉气管炎病毒（ILTV）田间分离株的ICP4基因片段，并与GenBank收录的部分鸡胚源（CEO）弱毒疫苗毒株、细胞培养源（TCO）弱毒疫苗毒株和国内分离强毒株进行了序列比较。结果显示：所有田间分离株和国内近期分离的LJS09毒株所测定，C刚基因片段均为676bp；与国内早期分离的王岗（wG）株7LTCO疫苗株相比，田间分离株和CEO疫苗株在ICP4基因的272～283nt部位均存在12个碱基的缺失；遗传进化树显示，田间分离株与CEO疫苗株的距离较近，处于同一个大分支上，而与TCO疫苗株及WG株的距离相对较远，处于不同分支上。上述结果表明，我国ILTV田间分离株的遗传特性与CEO疫苗株接近。

不同理化处理对苏云金芽胞杆菌质粒稳定性的影响

研究了用溴化乙锭诱变、升温和添加SDS等 3种处理对苏云金芽胞杆菌质粒稳定性的影响。结果表明 ,用 4.5 μg/ml的溴化乙锭处理野生菌株YBT 1 5 2 0和HD 5 6 7,对其携带ICPs基因的质粒的稳定性无影响。升温至 42℃时 ,野生菌株YBT 1 4 6 3和YBT 96 0 3的携带ICPs基因的质粒分别有 0 .41 %和 0 .37%发生丢失 ,一些小质粒 (<2kb)也发生丢失。继续升温至 44℃和 46℃培养突变株BMB1 6 0和BMB1 70 ,其质粒可进一步丢失。在46℃培养条件下添加 0 .0 5 %SDS进行处理后 ,突变株BMB1 70质粒丢失的百分率提高 。

siRNA对单纯疱疹病毒2型ICP4基因抑制作用的研究

目的 探讨RNA干扰对单纯疱疹病毒2型（HSV2）ICP4基因表达和HSV2 DNA复制的抑制作用.方法 化学合成靶向作用于HSV2 ICP4的四对siRNA和阴性对照siRNA,分别命名为siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3,siRNA-4及siRNA-N,转染Vero细胞,过夜后用HSV2 HG52标准毒株感染上述Veto细胞,1、2、3、4d和5d收集Vero细胞和上清液,荧光定量RT-PCR检测ICP4 mRNA的表达水平,荧光定量PCR检测HSV2 DNA拷贝数,Western-Blot检测ICP4蛋白表达水平.结果 与阴性对照相比,四对siRNA对HSV2 ICP4 mRNA和蛋白均有不同程度的抑制作用,以siRNA-2抑制作用最强,并且均可显著降低HSV2 DNA拷贝数.结论 靶向作用于HSV2 ICP4的siRNA可显著抑制ICP4mRNA及蛋白表达和HSV2 DNA拷贝数,提示siRNA可通过抑制HSV2 ICP4基因表达而抑制HSV2的复制.

苏云金芽胞杆菌研究进展

论述了苏云金芽胞杆菌的作用范围、ICPs基因的多样性、杀虫机理、基因工程以及产业化研究的进展情况。

苏云金芽孢杆菌的研究发展史与“十一五”立项思考

论述了苏云金杆菌研究发展史以及主要研究领域和今后的研究热点,并对“十一五”立项进行了探讨。