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特异性干扰ICP27基因的siRNA对HSV-1病毒复制的影响 被引量:1
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作者 王晓婷 董慧 +2 位作者 王军 全金梅 张伟 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第2期130-135,共6页
针对单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)的ICP27基因和其他疱疹病毒相关基因的高度保守区设计小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),研究其抑制病毒复制的效果。首先构建相应的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA),然后... 针对单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)的ICP27基因和其他疱疹病毒相关基因的高度保守区设计小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),研究其抑制病毒复制的效果。首先构建相应的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA),然后通过病毒滴度测定、real-time PCR和细胞致病变效应(cytopathic effect,CPE)检测所设计的siRNA抑制病毒复制的能力。结果显示,所设计的shRNA-2(靶序列起始位置815)和shRNA-3(靶序列起始位置1 367)具有明显地抑制病毒复制的效果。尤其是shRNA-3,抑制病毒复制的效果更明显,在病毒滴度实验中,与阴性对照相比,其抑制倍数为81,同时可以下调ICP27基因的mR NA表达水平。实验结果表明shRNA-3能够显著抑制HSV-1病毒复制的能力,可以作为HSV-1感染性疾病的补充治疗手段,其对应的靶序列可以作为抗HSV-1新的靶标。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1型(HSV-1) 小干扰RNA(siRNA) RNA干扰(RNAI) icp27基因
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The Herpes Simplex Virus Type 1 Multiple Function Protein ICP27 被引量:6
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作者 Lei ZHAO Wen-bo ZHU Qiong DING Gui-qing PENG Chun-fu ZHENG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2008年第6期399-405,共7页
The herpes simplex virus type 1 (HSV-1) infected-cell protein 27 (ICP27) is an essential,highly conserved protein involved in various steps of HSV-1 gene regulation as well as in the shut-off of host gene expression d... The herpes simplex virus type 1 (HSV-1) infected-cell protein 27 (ICP27) is an essential,highly conserved protein involved in various steps of HSV-1 gene regulation as well as in the shut-off of host gene expression during infection. It functions primarily at the post-transcriptional level in inhibiting precursor mRNA splicing and in promoting nuclear export of viral transcripts. Recently,many novel functions performed by the HSV-1 ICP27 protein were shown,including leptomycin B resistance,inhibition of the type Ⅰ interferon signaling,regulation of the viral mRNA translation and determining the composition of HSV-1 virions. 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 多功能蛋白质 icp27 治疗方法
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HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达 被引量:2
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作者 龙朝钦 杨慧兰 +1 位作者 张发洲 薛礼长 《中国感染控制杂志》 CAS 2011年第2期81-85,共5页
目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)多功能蛋白感染细胞多肽27(ICP27)真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并检测其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。方法提取病毒株HSV-2333 DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双酶切... 目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)多功能蛋白感染细胞多肽27(ICP27)真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并检测其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。方法提取病毒株HSV-2333 DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双酶切连接至真核表达载体pCDNA3.0中。pCDNA3.0-ICP27经双酶切、测序验证,并通过脂质体介导质粒瞬时转染Vero细胞,经RT-PCR和Western blot检测ICP27蛋白的表达。结果 pCDNA3.0-ICP27经双酶切可切出目的片段,测序结果经比对,与基因库中的序列完全一致。转染后经RT-PCR和Western blot检测,证实转染重组质粒组有ICP27蛋白表达,而转染空质粒组及未转染组没有检测到ICP27的表达。结论成功构建了HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并能在Vero细胞中表达。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒2型 疱疹 单纯 感染细胞多肽27 真核表达载体 质粒 疱疹 生殖器
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Herpes Simplex Virus Type 1 ICP27 Protein:Its Expression, Purification and Specific Antiserum Production
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作者 Lei ZHAO Xiao-ming REN Alan C. ZHENG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2010年第3期199-205,共7页
Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) is the causative agent of cold sores and other more serious diseases. HSV-1 infected-cell protein 27 (ICP27) is an immediate-early regulatory phosphoprotein homologous to gene produ... Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) is the causative agent of cold sores and other more serious diseases. HSV-1 infected-cell protein 27 (ICP27) is an immediate-early regulatory phosphoprotein homologous to gene products identified in all classes of herpesviruses so far. To raise the antiserum to ICP27 for further characterization of its biological function, the ICP27 gene was cloned into the pET-28a (+) vector, then ICP27 protein was expressed in E. coli and purified by nickel-nitrilotriacetic acid (Ni 2+ -NTA) affinity resin column, finally the purified protein was used to raise antiserum. Western blot analysis demonstrated that the antiserum recognized the recombinant protein, and the antiserum was able to probe the ICP27 in HSV-1 infected cells with high specificity by immunofluorescence assay (IFA). Therefore, the specific antiserum will provide a valuable tool for further studies investigating ICP27's biological function during HSV-1 infection. 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 抗血清 蛋白质 纯化 生产 BLOT分析 感染细胞 P27基因
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单纯疱疹病毒Ⅱ型ICP27对Vero细胞凋亡作用的研究 被引量:2
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作者 龙朝钦 杨慧兰 +2 位作者 张发洲 薛礼长 杜华 《国际病毒学杂志》 2013年第4期160-165,共6页
目的探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型转录前蛋白ICP27对Vero细胞凋亡作用及其参与细胞凋亡的可能途径。方法用前期构建成功的pcDNA3.0-ICP27质粒瞬时转染Vero细胞,MTr法检测pcDNA3.0-ICP27转染Vero细胞的活性,Giemsa染色及流式细胞术检测转染... 目的探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型转录前蛋白ICP27对Vero细胞凋亡作用及其参与细胞凋亡的可能途径。方法用前期构建成功的pcDNA3.0-ICP27质粒瞬时转染Vero细胞,MTr法检测pcDNA3.0-ICP27转染Vero细胞的活性,Giemsa染色及流式细胞术检测转染后ICP27在细胞凋亡中的作用,实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2mRNAs的变化和对凋亡执行蛋白Caspase-3的活性的检测以探讨ICP27参与细胞凋亡的途径。结果pcDNA3.0-ICP27转染Vero细胞后,M1Tr法检测发现其活性明显低于转染pcDNA3.0及空白转染的Vero细胞活性;Giemsa染色后发现转染pcDNA3.0-ICP27的Vero细胞变圆,细胞核破裂,流式细胞检测发现pcDNA3.0-ICP27转染的Veto细胞发生的凋亡率更高。凋亡执行蛋白Caspase-3的活性明显高于转染pcDNA3.0及空白对照;荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2mRNAs的变化,转染重组质粒的Vero细胞中BaxmRNAs表达量上调,Bcl-2mRNAs表达降低,Bax/Bcl-2明显高于正常培养的Vero细胞及转染pcDNA3.0质粒的Vero细胞。结论ICP27对Vero细胞有促进细胞凋亡的作用。而这种作用可能是使Bax及Bcl-2在细胞中的比例发生变化而导致的。 展开更多
关键词 HSV-2 icp27 真核表达 凋亡
原文传递
单纯疱疹病毒Ⅱ型多功能蛋白ICP27在Vero细胞中的表达及定位 被引量:2
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作者 龙朝钦 杨慧兰 杜华 《国际病毒学杂志》 2014年第6期259-264,共6页
目的 构建单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)感染细胞蛋白27(infected-cell protein 27,ICP27)在Vero细胞中的表达载体,并对其表达进行亚细胞定位.方法 用前期构建成功的pCDNA3.0-ICP27及pEGFP-ICP27通过脂质体... 目的 构建单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpes simplex virus type 2,HSV-2)感染细胞蛋白27(infected-cell protein 27,ICP27)在Vero细胞中的表达载体,并对其表达进行亚细胞定位.方法 用前期构建成功的pCDNA3.0-ICP27及pEGFP-ICP27通过脂质体介导质粒瞬时转染Vero细胞,经Western blot检测ICP27蛋白的表达.并通过荧光显微镜及免疫组化的方法观察ICP27在Vero细胞中的亚细胞定位.结果 ICP27可在Vero细胞中高表达,pEGFP-ICP27转染Vero细胞12h后,就可以在少量的细胞中表达,而在转染后的24h-48h表达量最大.但转染72h后,表达的蛋白含量在细胞中减少.Western blot结果显示,pEGFP-ICP27和pCDNA3.0-ICP27均可表达ICP27,用质粒pEGFP-ICP27转染的Vero细胞,观察荧光却只发现ICP27定位于细胞核中,而用免疫组化方法检测pCDNA3.0-ICP27发现细胞核和细胞质中均有表达.结论 pEGFP-ICP27和pCDNA3.0-ICP27均可成功的使ICP27在Vero细胞中有效表达,且ICP27在细胞核和细胞质中均有表达, 展开更多
关键词 HSV-2 icp27 真核表达 亚细胞定位
原文传递
单纯疱疹病毒2型感染细胞多肽27真核表达质粒的构建及表达
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作者 张发洲 杨慧兰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期208-212,共5页
为了构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞多肽27(ICP27)真核表达质粒,应用PCR技术从HSV-2 333株的基因组中扩增ICP27基因,并连接至真核表达载体pEGFPC2,对阳性克隆进行菌落PCR、酶切和测序鉴定后,成功构建了重组质粒pEGFPC2-ICP27。用X ... 为了构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)感染细胞多肽27(ICP27)真核表达质粒,应用PCR技术从HSV-2 333株的基因组中扩增ICP27基因,并连接至真核表达载体pEGFPC2,对阳性克隆进行菌落PCR、酶切和测序鉴定后,成功构建了重组质粒pEGFPC2-ICP27。用X fect转染试剂盒将重组质粒pEGFPC2-ICP27转染至Vero细胞中,并用RT-PCR及W estern b lot-ting检测其表达情况。结果显示,ICP27基因在Vero细胞中得到正确表达。真核表达质粒pEGFPC2-ICP27的构建成功,为进一步研究ICP27对宿主细胞的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒2型 感染细胞多肽27 真核表达载体 转染
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