瘤源性IDO2对黑色素瘤形成及生长的影响

目的研究B16-BL6细胞内IDO2基因表达对小鼠黑色素瘤生长、发展及抗肿瘤免疫的影响。方法通过G418药物筛选建立稳定细胞系B16-BL6/IDO2^+及B16-BL6/IDO2^+,q PCR法检测IDO2的表达,MTT实验检测IDO2表达对细胞增殖的影响;然后以构建的稳定细胞在小鼠体内建立肿瘤模型,观察IDO2表达对黑色素瘤形成、生长的影响;最后在处死小鼠后通过流式细胞术检测引流淋巴结内Treg、CD4^+/CD8^+T细胞百分比及T淋巴细胞凋亡率,LDH法检测肿瘤特异性细胞毒反应来观察肿瘤组织内IDO2表达对引流淋巴结内肿瘤免疫的影响。结果成功建立B16-BL6/IDO2^+及B16-BL6/IDO2^-稳定细胞系:B16-BL6/IDO2^-细胞持续稳定低表达IDO2且不受LPS及IFN-γ的诱导;与B16-BL6/IDO2^+细胞相比,B16-BL6/IDO2^-细胞在体外增殖速度减慢,体内实验显示其肿瘤生长速度减慢、肿瘤质量减轻;进一步流式细胞术结果发现:引流淋巴结内Treg百分比下降、CD8^+T细胞数量增加、T淋巴细胞的凋亡率减少;LDH法检测CD8^+细胞特异性特异性杀伤肿瘤细胞反应增强。结论黑色素瘤细胞内IDO2的表达参与体内肿瘤的生长过程,且能影响其引流淋巴结内肿瘤免疫反应。

敲低吲哚胺2,3双加氧酶2基因抑制荷黑素瘤小鼠肿瘤生长并增强其免疫功能

目的以吲哚胺2,3双加氧酶2(IDO2)作为治疗靶标,研究IDO2基因表达在肿瘤治疗中的作用及其对免疫应答的影响。方法采用B16-BL6细胞株构建小鼠黑素瘤种植模型,以携带IDO2小干扰RNA的质粒(IDO2-shRNA)及对照组质粒(scramble-shRNA)尾静脉高压注射法治疗小鼠黑素瘤;游标卡尺测量肿瘤大小;流式细胞术检测各组引流淋巴结内调节性T细胞(Treg)百分比、T细胞凋亡百分比,以及脾脏内树突状细胞(DC)表面共刺激分子CD80、CD86表达情况;乳酸脱氢酶法检测CD8+T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力;ELISA检测血清内肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果 IDO2-shRNA治疗组肿瘤的形成时间较晚,肿瘤的生长速度缓慢,离体肿瘤质量明显减少;IDO2-shRNA治疗组引流淋巴结内的Treg减少,T细胞凋亡降低,脾脏DC表面共刺激分子CD80、CD86明显增加;CD8+T细胞杀伤B16-BL6的能力增强,血清内TNF-α、IFN-γ表达水平升高。结论敲低荷瘤小鼠体内IDO2可抑制黑素瘤生长,提高机体的抗肿瘤免疫反应。

吲哚胺2,3双加氧酶与肿瘤免疫逃逸

吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)及其类似物IDO2作为免疫调节酶可能在肿瘤诱导机体产生免疫耐受过程中起着关键性作用。肿瘤细胞表达IDO使得其所处的微环境出现"色氨酸饥饿",抑制T细胞增殖,同时,色氨酸代谢产物对T细胞亦存在细胞毒性作用。肿瘤诱导IDO表达主要受干扰素影响,而其机制是肿瘤微环境中的CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)高表达可溶性CTLA所致。这一过程可被IDO特异性抑制剂1-甲基色氨酸(1-MT)所逆转,1-MT还具有增强肿瘤化疗药物疗效的作用,故其有望成为一种有效的抗肿瘤药物。

新型1,2,3-三氮唑类衍生物的合成及抗炎活性研究

吲哚胺2,3-双加氧酶2(IDO2)在炎症特别是类风湿性关节炎(RA)方面的作用逐渐被阐明,IDO2成为RA治疗的潜在靶点.目前尚未见活性强、选择性高的IDO2小分子抑制剂被报道.以吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)抑制剂epacadostat为先导化合物,借助计算机辅助药物设计,设计合成了24个未见文献报道的1,2,3-三氮唑类衍生物.生物活性研究表明,目标化合物均具有IDO1和IDO2酶抑制活性,其中(Z)-N-((1-(2-((4-(N-(3-溴-4-氟苯基)-N’-羟基甲脒)-1,2,5-噁二唑-3-基)氨基)乙基)-1H-1,2,3-三氮唑-4-基)甲基)呋喃-2-甲酰胺(I-11)在100nmol/L浓度下对IDO1和IDO2酶的抑制率分别为76%和49%,优于先导化合物epacadostat(分别为62%和25%).抗炎活性研究表明,化合物I-11可有效抑制脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症因子TNF-α的分泌,并且对小鼠耳肿胀抑制率(56.81%,100 mg/kg,灌胃)优于阳性对照Naproxen(45.29%,150 mg/kg,灌胃),表现出较好的抗炎活性.

色氨酸与肿瘤免疫

色氨酸(tryptophan,Trp)作为人体必需氨基酸,生理功能多样,在肿瘤的代谢过程中具有重要意义。在人体中,色氨酸主要经犬尿氨酸代谢,既促进肿瘤细胞固有的恶性特性,又限制肿瘤免疫,因此它是癌症免疫治疗的重要药物开发靶点。肿瘤中色氨酸代谢的改变常伴随色氨酸相关酶基因表达的异常,其中以吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-bioxygenase,IDO)相关基因表达和色氨酸2,3-双加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase,TDO)相关基因改变最为常见。基于此,IDO抑制剂、TDO抑制剂及联合治疗被应用于大量的临床试验中。本文从色氨酸代谢出发,阐述肿瘤中犬尿氨酸代谢途径、肿瘤细胞IDO、TDO、犬尿氨酸(kynurenine,KYN)相关基因的表达调控,并概述色氨酸相关肿瘤治疗方案的新进展,为肿瘤治疗方案的进一步探索提供新思路。