液相色谱法分离纯化固相合成的胸腺素α1

本文为以Fmoc(Nα-芴甲氧羰基 )固相合成法制备的胸腺素α1粗品提出了一条实验室规模的液相色谱法纯化路线 ,共分两步 :第一步采用DEAESepharoseFastFlow填料进行离子交换层析操作 ,分离除去粗品中的大部分杂质 ;第二步用制备型反相高效液相色谱 (用C1 8色谱柱 )进行最后的纯化。终产物纯度可达 95% ,生物活性符合实验指标。

应用液相色谱法分离纯化固相化学合成胸腺素α_1

By using ion-exchange preparative chromatography (IEPC) and reversed-phase high performance liquid preparative chromatography(RP-HPLPC), thymosin α 1 was isolated and purified from the crude product synthesized by the solid-phase peptide synthesis(SPPS) method. The purity of the final product reached 95% through ion-exchange chromatography on DEAE Sepharose Fast Flow chromatography and Delta-Pak TM C18 purification after optimizing the chromatographic conditions. The capacity of purification process was 50mg/circle. The total yield was 36%. The technology is simple and reliable, and can be scaled up easily.

PITC柱前衍生反相色谱法和OPA柱后衍生离子交换色谱法测定氨基酸含量的比较

本文主要讨论了氨基酸的两种测定方法──ＰＩＣＯ·ＴＡＧ反相色谱法和柱后衍生离子交换色谱法（ＩＥＣ），并对两种方法进行了比较，总结出ＰＩＣＯ·ＴＡＧ法测定氨基酸的优越性。

液相色谱法纯化固相合成戈那瑞林

建立了一条液相色谱法两步纯化tBoc固相合成的戈那瑞林粗品的路线。第一步采用离子交换色谱进行初步分离,考察了CM 25 Sepharose Fast Flow填料和CMC填料对分离的影响;选用了CM 25 Sepharose Fast Flow填料,先用pH值6.0、50 mmol.L-1NaAc缓冲溶液平衡,再上样,然后用pH值6.0、50 mmol.L-1NaAc、500 mmol.L-1氯化钠缓冲溶液洗脱,此步除去了粗品中的大部分非极性杂质和部分极性杂质。第二步用制备型反相高效液相色谱(C18色谱柱)进行纯化,考察了不同流动相组成磷酸三乙胺(TEAP)和三氟乙酸(TFA)对分离纯化的影响;选用了TFA体系,流动相A为0.1%TFA、5%乙腈水溶液;流动相B为0.1%TFA、80%乙腈水溶液,梯度洗脱。终产物纯度可达98.5%以上,总收率为72%。

苯扎溴铵、苯扎氯铵的液相色谱分析

建立了苯扎溴铵、苯扎氯铵的高效液相色谱定量和离子色谱定性鉴别的分析方法。定量采用HPLC-DAD,Elite Sino Chrom ODS-BP色谱柱,流动相为甲醇：2.4 mmol/L三氟乙酸水溶液=77：23（V/V）;定性采用IEC-CD鉴别Cl-或Br-。以十二烷基二甲基苄基溴化铵为标样,在10～800 mg/L浓度范围内,线性关系良好（r=0.9998）;2个质量浓度添加水平的平均回收率为100.17%和99.94%。8次平行测定的样品RSD为0.50%。对市场上的3个苯扎溴铵样品进行了检测,有2个不含有溴离子。

反相高效液相色谱与离子交换色谱测定牛肉中肌肽含量的对比研究

目的:考察反相高效液相色谱(RP-HPLC)紫外检测与离子交换色谱(IEC)电导检测2种方法对牛肉中肌肽检测的一致程度。方法:RP-HPLC色谱条件:Agilent TC-C_(18)色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相为乙腈-水(15∶85);柱温35℃;流速1.00 mL·min^(-1);进样体积25μL;检测波长210 nm。IEC色谱条件:Dionex AminoPac^(TM) PA-10(2 mm×50 mm)保护柱和Dionex AminoPac^(TM) PA-10(2 mm×250 mm)分析柱分离,金电极检测,直流安倍电位,检测波形为"Amino Acids(Reference)"。以70%超纯水和30%醋酸钠溶液(100 mmol)为淋洗液;Dionex AminoPac^(TM)PA-10柱流速为0.25 mL·min^(-1),进样体积均为25μL。分别对2种方法的检测下限、精密度、加样回收率等进行考察,并对2种方法测得牛肉样品的结果进行显著性检验(F检验和t检验)。结果:RP-HPLC法线性范围为0.20～5.00μg·mL^(-1) (R2=0.999 7),检测下限和定量下限分别为0.032和0.11μg·mL^(-1),方法精密度(RSD)为1.2%(n=11),样品回收率为97.7%;IEC法峰形对称,线性范围为0.20～8.00μg·mL^(-1) (R^2=0.999 0),检测下限和定量下限分别为0.005 0和0.017μg·mL^(-1),方法精密度(RSD)为1.2%(n=11),样品回收率为92.2%。对测定结果的F检验(方法精密度)表明两者无显著性差异,但t检验(方法系统误差)表明两者有显著差异。结论:2种方法均能较好地对样品中的肌肽进行定性和定量分析,但两者存在系统误差,原因需进一步探索。

离子交换色谱法测定重组人血清白蛋白干扰素α2b融合蛋白纯度

目的:建立并验证应用离子交换色谱(IEC-HPLC)测定重组人血清白蛋白干扰素α2b融合蛋白(r IFNα2b-HSA)纯度的方法。方法:IEC-HPLC色谱条件:TSKgel Q-STAT色谱柱(3.0 mm×10 cm);流动相A液为Tris(HCl)缓冲液,B液为Tris(HCl)Na Cl缓冲液;柱温25℃;流速0.5 mL·min^-1;进样体积20μL;检测波长214 nm;梯度洗脱条件:0~3 min,100%A;3~18 min,100%A→0%A;18~21 min,0%A;21~22 min,0%A→100%A。对该方法的系统适用性、专属性、线性、精密度及定量限进行考察,并与反相色谱法、电泳法纯度测定结果进行比较。结果:系统适用性:IEC-HPLC法杂质与主峰的分离度>1.5,理论塔板数>20000;专属性:用Na OH溶液对供试品进行处理,主峰与杂质峰分离度良好;线性范围为0.05~1 mg·m L^-1(R2=0.9974);方法精密度(RSD)为0.52%(n=6);定量下限为0.0018 mg·m L^-1;用3种方法对3批样品进行纯度测定,结果均大于99.0%。结论:对该方法进行方法学研究,其结果均符合2015年版《中华人民共和国药典》三部《药品质量标准分析方法验证指导原则》相关要求,适用于r IFNα2b-HSA的纯度测定。