Ifitm1基因在小鼠卵泡发育与排卵过程中的功能及相关调控机制

为深入了解哺乳动物卵泡发育的机制,对小鼠卵巢颗粒细胞中干扰素诱导的跨膜蛋白1(interferon-induced transmembrane protein 1,Ifitm1)基因进行超表达和抑制表达分析,通过流式细胞术、荧光定量PCR、EdU法及western blot分析Ifitm1对小鼠颗粒细胞生长的影响及对小鼠排卵相关基因表达的调控作用,并用相关通路抑制剂处理颗粒细胞,探究Ifitm1影响小鼠卵泡发育及排卵的相关机制。结果显示,在小鼠卵巢颗粒细胞中成功地超表达和抑制表达了Ifitm1基因,干扰Ifitm1基因表达使细胞周期蛋白Ccnd1表达降低了63.5%,G0/G1期细胞占比也下降,使细胞阻滞在G2/M期,从而抑制颗粒细胞增殖;干扰Ifitm1基因还导致排卵标记基因Lhr、Ereg、Cyp19a1表达水平提高了1.95~6.76倍(P<0.05),并抑制PI3K/AKT信号通路上关键蛋白p-AKT(Ser473)的表达,而阻断PI3K/AKT信号通路后再抑制Ifitm1基因表达,Lhr、Ereg和Cyp19a1的mRNA水平则未出现明显改变,说明Ifitm1基因通过抑制PI3K/AKT信号通路活性影响排卵。以上结果表明,Ifitm1基因通过PI3K/AKT通路介导在小鼠颗粒细胞生长以及卵泡排卵过程中发挥重要作用。

IFITM1基因启动子甲基化与新疆维吾尔族妇女子宫颈癌的相关性

目的探讨IFITM1基因启动子甲基化与新疆维吾尔族妇女子宫颈癌的相关性以及早期诊断的可行性,分析IFITM1基因甲基化对mRNA表达的影响。方法采用甲基化特异性PCR方法和HPV16、HPV18特异的PCR方法分别检测了40例正常子宫颈组织和40例新疆维吾尔族妇女子宫颈癌组织的IFITM1基因启动子甲基化情况和高危险性HPV的感染情况,并分析两个指标的相关性。用RT-PCR方法检测10例甲基化阳性和10例甲基化阴性的组织IFITM1基因的mRNA表达情况。结果 31例子宫颈癌组织IFITM1基因启动子甲基化,3例子宫颈正常组织发生甲基化,在子宫颈癌中高危险性HPV的感染例数为27例,在正常组织中为5例。40例子宫颈癌组织中,HPV16、HPV18感染阳性的组织IFITM1基因甲基化的发生率增高(P<0.05),在10例甲基化阳性的组织中IFITM1基因mRNA的表达水平明显低于10例甲基化阴性的组织(P<0.01)。结论 IFITM1基因启动子甲基化是子宫颈癌发生的关键分子标志物,具有大规模临床筛选试验的价值。

白来航鸡IFITM1基因表达规律分析及其对鸡内源性反转录病毒转录的影响

IFITMs在天然免疫中发挥重要作用,抑制多种病毒复制。试验取5和30日龄白来航鸡心、肝、脾、胸腺和法氏囊,RT-qPCR检测其IFITM1基因的表达差异;用0.5μmol·L^-1 DNA甲基化酶抑制剂DAC处理鸡成纤维细胞CEF和鸡巨噬细胞HD11,RT-qPCR检测处理后IFITM1的表达水平;PCR扩增IFITM1基因CDS区克隆、测序,进而构建pcDNA3.1-IFITM1真核表达载体;将过表达载体转染至CEF和HD11细胞,RT-qPCR检测IFITM1过表达对鸡内源性反转录病毒ALVE1、OVEX1和EAV-HP转录的影响。结果表明:IFITM1基因在胸腺、法氏囊等免疫器官中的表达量高于心、肝和脾等非免疫器官,且随着日龄的增长,在胸腺中的表达量上升,而在法氏囊中的表达量下降;DAC处理后,IFITM1表达极显著上调;测序发现IFITM1基因CDS区大小为342bp;IFITM1过表达后,ALVE1、OVEX1在CEF和HD11细胞中转录均极显著下调,EAV-HP只在CEF细胞中极显著下调,而在HD11细胞中无显著变化。这一研究初步分析了鸡IFITM1基因的表达规律,构建了其真核表达载体,检测了其对鸡内源性反转录病毒转录的影响,为进一步研究其功能奠定了基础。

IFITM1基因在HeLa细胞中的功能研究

目的:研究IFITM1基因转染对子宫颈癌HeLa细胞的影响,以及抑制子宫颈癌HeLa细胞生长的作用。方法:应用脂质体法介导IFITM1基因转染子宫颈HeLa细胞,用RT-PCR方法、免疫荧光法、MTT法及流式细胞术检测IFITM1基因转染HeLa细胞的生物学特性。结果:转染后的HeLa细胞:①RT-PCR检测及激光共聚焦显示重组质粒组中mRNA及蛋白表达含量明显高于对照组及空载体组,而对照组及空载体组蛋白表达无统计学差异。②MTT结果显示重组质粒组细胞存活率均明显低于空载体组及未转染HeLa细胞组,而后两组无统计学差异。③AnnexinV/PI双色流式细胞仪检测表明,重组质粒组的HeLa细胞凋亡水平明显高于空载体组和未转染HeLa细胞组,有统计学差异。结论:IFITM1蛋白与子宫颈鳞癌有着密切的关系,该基因可能是一种潜在的抑制子宫颈鳞癌发生的基因。

IFITM1基因真核表达质粒的构建及鉴定

目的:获得IFITM1基因片段并构建真核表达质粒。方法:采用RT-PCR技术扩增IFITM1,将扩增产物连接至pcDNA3.1载体,对重组质粒进行测序验证,结果:构建了真核表达质粒pcDNA3.1-IFITM1,通过酶切、测序等方法验证完全正确。结论:成功构建了IFITM1基因的真核表达质粒,为下一步探讨IFITM1基因在子宫颈癌HeLa细胞中的作用提供了实验基础。

干扰素介导的跨膜蛋白1与卵巢上皮性癌耐药相关性研究

目的:探讨干扰素介导的跨膜蛋白1(IFITM1)与卵巢上皮性癌化疗耐药性的相关性。方法:应用免疫组化测定68例初治卵巢上皮性癌组织和卵巢癌顺铂敏感细胞株A2780、顺铂耐药细胞株CP70中IFITM1的表达,Western blotting检测两种卵巢癌细胞株中IFITM1蛋白的表达。结果:免疫组织化学显示铂类化疗敏感性卵巢癌组和耐药性卵巢癌组的表达强度之间的差异有统计学意义(P=0.043),Western blot实验显示卵巢癌CP70细胞株中IFITM1表达水平明显高于A2780细胞株。结论:IFITM1表达强度与卵巢癌铂类化疗的敏感性相关,检测IFITM1对判断卵巢癌化疗疗效具有临床意义。

IFITM1蛋白在新疆维吾尔族妇女子宫颈癌mRNA的表达水平

目的:研究IFITM1蛋白在新疆维吾尔族妇女子宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义。方法:应用实时定量逆转录PCR方法检测15例维吾尔族妇女子宫颈鳞癌及其癌旁子宫颈正常组织中IFITM1基因mRNA表达水平。结果:15例子宫颈癌组织中IFITM1的mRNA表达丰度为(64.79±42.71)%,正常宫颈组织中IFIM1的mRNA的表达丰度为(128.29±88.77)%,正常宫颈组织表达丰度显著高于子宫颈癌组织(t=-2.497,P=0.09)。新疆维吾尔族妇女慢性子宫颈炎与子宫颈鳞癌组织中IFITM1基因mRNA的表达具有统计学差异(P<0.05)。结论:IFITM1蛋白与新疆维吾尔族妇女的子宫颈鳞癌有着密切的关系,该基因可能是一种潜在的抑制子宫颈鳞癌发生的基因。

卵巢上皮性癌中干扰素介导的跨膜蛋白1的表达意义

目的:探讨干扰素介导的跨膜蛋白1(Interferon-induced transmembrane protein 1,IFITM1)基因在卵巢上皮性癌中表达的相关性及其意义。方法:应用Western blotting检测正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤和卵巢上皮性癌组织中IFITM1蛋白表达。免疫组织化学检测12例正常卵巢、21例卵巢良性肿瘤、18例卵巢交界性肿瘤和85例卵巢上皮性癌组织中IFITM1的蛋白表达,同时分析IFITM1表达状况与临床病理因素之间的相关性。结果:Western blotting显示卵巢上皮性癌和卵巢交界性肿瘤中IFITM1表达水平明显高于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤。免疫组化显示在正常卵巢组织中IFITM1阳性表达率为41.7%(5/12),在卵巢良性肿瘤组织中71.4%(15/21),在卵巢交界性肿瘤组织中为72.2%(13/18),在卵巢上皮性癌中为77.6%(66/85),IFITM1蛋白表达强度在正常卵巢、良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤、上皮性卵巢癌间的比较有统计学意义(P<0.05)。IFITM1蛋白表达与病理类型、肿瘤分化程度、肿瘤FIGO分期有关(P<0.05),与淋巴结转移、腹水无明显相关性。化疗敏感组和耐药组的IFITM1表达强度间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IFITM1在正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤和卵巢上皮性癌组织中的表达依次升高,并与卵巢癌以铂类为基础的化疗耐药性产生有相关性,为进一步研究IFITM1在卵巢癌诊治及化疗中的应用前景提供依据。