表达IFN-α的重组猪繁殖与呼吸综合病毒的构建及生物学特性分析

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害我国生猪业的重要疫病之一,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是一种免疫抑制性病毒。干扰素(IFN)是一类具有免疫调节功能和抗病毒作用的细胞因子。IFN-α除更直接的抗病毒作用外,还可以调节宿主的先天性和适应性免疫。论文构建表达IFN-α的重组PRRSV,分析重组病毒的生物学特性以及IFN-α的生物学活性。通过反向遗传操作方法将IFN-α插入到PRRSV ORF1b和ORF2a之间,重组质粒转染细胞后可以拯救出重组病毒(rGXAM-P-IFN-α)。插入到PRRSV基因组中的IFN-α可遗传稳定9代。重组病毒生长特性分析可发现rGXAM-P-IFN-α复制能力显著低于亲本病毒。rGXAM-P-IFN-α感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)可显著上调抗病毒基因(PKR,ISG15和ISG54)mRNA表达水平,为进一步研发新型PRRSV疫苗提供参考。

西藏羊和白-藏杂交羊外周血IFN-α、IgG和IL-2的研究

为了解西藏羊和白萨福克羊与西藏羊的杂交后代羊生长发育中免疫因子的分泌特点和免疫学特征,以西藏羊和白-藏杂交羊为研究对象,应用ELISA方法检测0.5、1和1.5岁外周血中干扰素(IFN-α)、免疫球蛋白G(IgG)和白细胞介素-2(IL-2)的质量浓度,分析其变化规律。结果表明:随年龄的增长,藏公羊IL-2呈逐渐降低的趋势,而藏母羊呈逐渐升高的趋势(P<0.05);藏杂交公羊和藏母羊IgG含量都呈逐渐降低趋势,藏公羊下降较明显(P<0.05);藏公羊IFN-α的含量逐渐降低,0.5岁与1岁之间下降趋势明显(P<0.05),而藏母羊变化不大。随年龄的增长,白-藏杂交羊公羊和母羊IL-2含量先降低再升高;白-藏杂交羊公羊IgG含量变化不大,母羊则是先升高后下降趋势,且1岁和1.5岁之间下降明显(P<0.05);白-藏杂交羊公羊IFN-α的含量逐渐降低,而母羊是先升高后下降。

FMDV 3D基因真核表达质粒的构建、表达及对Ⅰ型IFN信号通路的作用

本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用。根据GenBank序列合成3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR、双酶切及测序鉴定正确后分别转染HEK-293T细胞和PK-15细胞,Western blotting及间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测3D蛋白在细胞内的表达及定位。通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)、Real-time PCR、TCID50等试验检测HEK-293T细胞中过表达3D蛋白对水疱性口炎病毒(Versicular stomatitis virus,VSV)诱导的Ⅰ型IFN信号通路的影响。结果显示,真核表达质粒pXJ41-Myc-3D构建成功;3D蛋白在HEK-293T细胞中表达,大小约为55 kDa,主要定位在细胞核中;3D蛋白抑制了VSV诱导的IFN-β启动子活性和IFN-β mRNA水平,促进了VSV的复制。本研究为深入探究3D蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路的作用机制奠定了基础。

IFN-α抗病毒治疗118例慢性乙型肝炎并10年随访分析

目的 探讨IFN-α抗病毒治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者的效果,为CHB的抗病毒治疗提供参考。方法选取接受普通IFN-α治疗且资料完整的CHB患者118例,通过门诊定期复诊和电话随诊收集患者的乙肝五项[乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)]、乙肝DNA定量(HBV-DNA)和谷丙转氨酶(ALT)水平。比较治疗前后、随访期间不同时间点的HBV-DNA和HBsAg阴转率、HBeAg/HBeAb血清转换率和ALT复常率等。结果 HBV-DNA阴转率及HBsAg阴转率随治疗时间的延长而提高,HBV-DNA阴转率在治疗第24、36、48周时的阴转率明显高于第12周,HBsAg阴转率在治疗第48周明显高于第12周和24周,差异均有统计学意义(P<0.05)。停药后第24~432周各随访节点HBV-DNA阴转率及HBsAg阴转率呈先降后趋于稳定的趋势。HBeAg/HBeAb血清转换率随治疗时间的延长而升高,治疗第48周其转换率明显高于第12周(P<0.05);HBeAg/HBeAb血清转换率及SVR随停药时间的延长呈先降后趋于稳定的趋势。停药后,HBeAg/HBeAb血清转换率在各随访节点差异均无统计学意义(P>0.05)。病毒学复发率停药后先上升,在停药第144周呈现稳定趋势。ALT复常率在停药第144周呈现稳定趋势,停药第144周的ALT复常率明显高于停药第12周(P<0.05)。结论 IFN-α抗病毒治疗CHB可取得较好的疗效,在治疗及停药后各随访节点,HBV-DNA阴转率、HBsAg阴转率、ALT复常率、HBeAg/HBeAb转换率均可获得较高的应答率。

IFN-αIL-6和IL-17检测对结核病辅助诊断价值

目的:评价血清免疫细胞因子对结核分枝杆菌肺病(TB)的诊断价值。方法:回顾性选取2020年11月至2022年10月于河北省胸科医院就诊的139例疑似肺结核患者作为研究对象。按照2018年最新实施的肺结核诊断标准(WS288-2017),其中确诊结核病69例,纳入结核组,非结核病70例纳入非结核组。采用流式免疫荧光发光法检测血清中免疫相关细胞因子IL-6、IL-17和IFN-α水平,并分析三种因子检测对结核病的诊断效能。结果:结核组患者IL-6浓度和IL-17浓度显著高于非结核组,差异有统计学意义(P<0.05);结核组患者IFN-α浓度略高于非结核组,但差异无统计学意义(P>0.05);进行ROC曲线分析:IL-6检测AUC面积为0.658(P<0.001)、IL-17检测AUC面积为0.734(P<0.001)、IFN-α检测AUC面积为0.571(P<0.001)。结论:MTB感染者IL-6、IL-17水平增高,IL-6、IL-17对结核的诊断具有较好的灵敏度和特异度;IL-6、IL-17在临床辅助诊断结核病具有一定的价值。

IFNα-2b治疗323例HBeAg阳性慢性乙型肝炎的效果

目的 探讨IFNα-2b抗病毒治疗乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者的效果。方法回顾性分析2010年1月至2014年1月就诊于南昌大学第二附属医院并接受IFNα-2b治疗的323例HBeAg阳性CHB患者的临床资料,按丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平将其分为3组:ALT<2×ULN(A1组,n=111)、2×ULN≤ALT≤5×ULN(A2组,n=111)以及ALT>5×ULN(A3组,n=101)。观察临床疗效及不良反应,并比较3组间的抗病毒效果。结果 在停药时及停药后第12、24、48、72、96、144、192、240周,323例患者的HBV-DNA阴转率分别为39.9%、40.2%、39.0%、36.2%、34.1%、33.4%、31.3%、30.7%、30.7%;HBsAg阴转率分别为6.2%、6.2%、6.2%、5.9%、5.9%、5.9%、5.6%、5.6%、5.6%;HBeAg血清学转换率分别为28.2%、31.0%、32.8%、34.4%、33.7%、33.1%、32.8%、32.5%、31.6%。在各随访时间点,3组患者的HBV-DNA阴转率和HBeAg血清学转换率比较,A3组显著高于A2组,A2组显著高于A1组(P<0.05);3组患者的HBsAg阴转率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。323例患者均出现发热及类流感样症状,238例(73.7%)出现白细胞及中性粒细胞降低,35例(10.8%)甲状腺功能异常,5例(1.5%)斑秃,1例(0.3%)睡眠障碍,经过密切观察和对症处理后,患者均顺利完成疗程,各指标均基本正常。结论 IFNα-2b治疗HBeAg阳性CHB患者在停药时及停药后随访期间均表现出较好的效果,大多数患者可耐受IFNα-2b的不良反应。IFNα-2b的抗病毒效果可能与ALT水平有关。

化疗联合免疫治疗局部晚期食管癌疗效及对Sil⁃2R、IFN⁃γ、TSGF水平的影响

目的研究化疗联合免疫治疗局部晚期食管癌(LAEC)疗效及对可溶性白细胞介素⁃2受体(Sil⁃2R)、γ⁃干扰素(IFN⁃γ)及恶性肿瘤特异生长因子(TSGF)水平的影响。方法选择2021年3月至2023年7月于中国科学院合肥肿瘤医院治疗的LAEC患者106例,依据随机数字表法将106例患者分为试验组(n=53)、对照组(n=53)。对照组行标准化疗,试验组行化疗联合免疫治疗。观察两组临床疗效、不良反应,比较两组治疗前后血清程序性死亡配体1(PD⁃L1)、程序性死亡受体1(PD⁃1)、Sil⁃2R、IFN⁃γ、TSGF水平。结果试验组客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗期间各不良反应分级比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,试验组血清PD⁃L1、PD⁃1及Sil⁃2R、TSGF水平均低于对照组,血清IFN⁃γ水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论化疗联合免疫治疗可有效降低LAEC患者免疫检查点活性,增强机体免疫,可促进产生IFN⁃γ,抑制Sil⁃2R、TSGF生成,疗效较好,且不增加不良反应,具有一定的临床应用价值。

奶牛乳房炎相关IFNE基因的克隆、表达及功能研究

【目的】研究干扰素ε(Interferon epsilon,IFNE)基因在奶牛乳腺上皮细胞(Bovine mammary epithelial cells,bMECs)炎症中的表达模式及其潜在的分子功能。【方法】通过PCR和测序技术得到IFNE基因的编码区(Coding sequence,CDS)序列,并采用生物信息学方法分析IFNE基因及其蛋白质特性;利用RNAi和qPCR技术检测IFNE、干扰素β(Interferon beta,IFNB)、干扰素κ(Inter⁃feronκ,IFNK)、半胱天冬酶3(Cystathione aspartase 3,CASP3)、半胱天冬酶9(Cystathione aspartase 9,CASP9)等基因在脂多糖(Li⁃popolysaccharide,LPS)诱导bMECs炎症反应中的表达量。【结果】IFNE基因的CDS长度为582 bp,可编码由193个氨基酸组成的具有亲水性且不稳定的非分泌蛋白。与对照组(0 h)相比,在LPS诱导3、6、12和24 h的bMECs中白细胞介素⁃6(Interleukin⁃6,IL⁃6)和白细胞介素⁃1β(Interleukin⁃1β,IL⁃1β)的表达量均显著上调(P<0.05,下同),白细胞介素⁃8(Interleukin⁃8,IL⁃8)的表达量极显著上调(P<0.01,下同),表明成功构建了炎症细胞模型。在炎症细胞模型构建成功的基础上,采用qPCR检测bMECs内IFNE基因的表达量结果表明,与对照组(0 h)相比,IFNE基因在LPS诱导bMECs 3、6、12和24 h的表达量均极显著上调,且在诱导6 h的表达量最高。RNAi实验结果表明,干扰IFNE可使得炎症性bMECs内的IL⁃8、IFNB、IFNK和白细胞介素⁃10受体亚基β(Interleu⁃kin⁃10 receptor subunitβ,IL⁃10RB)基因的表达量均显著上调,IL⁃6、IL⁃1β、CASP3、CASP9和BAD基因的表达量均呈极显著上调。【结论】IFNE基因在LPS诱导的bMECs炎症反应中的表达量极显著上调,干扰IFNE基因可通过调控IL⁃6、IL⁃8、IL⁃1β、IFNB、IF⁃NK、CASP3和CASP9等基因的表达而缓解bMECs炎症反应,为奶牛乳房炎的分子治疗和抗乳房炎分子育种奠定理论基础。

PEG-IFNα-2b联合替诺福韦治疗慢性乙型肝炎的疗效及对HBeAg转阴率、免疫功能的影响

目的:分析聚乙二醇干扰素α-2b(PEG-IFNα-2b)联合替诺福韦治疗慢性乙型肝炎的效果及对HBeAg转阴率、免疫功能的影响。方法:选取某院2019年3月—2022年3月收治的慢性乙型肝炎患者88例作为研究对象,依据随机抽签法分成研究组与对照组,每组44例。对照组接受替诺福韦治疗,研究组接受PEG-IFNα-2b联合替诺福韦治疗,比较2组HBeAg转阴率、HBsAg转阴率、治疗前后肝功能指标[谷氨酰转肽酶(GGT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)]、免疫功能指标(CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、C3、C4)及血清炎性因子[视黄酸受体相关孤核受体(RORγt)、白细胞介素-17(IL-17)、IL-4]水平。结果:研究组HBeAg转阴率、HBsAg转阴率分别为45.45%、13.64%,高于对照组的11.36%、0,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组GGT、AST、ALT、IL-4、IL-17、RORγt分别为(30.42±5.39)U/L、(31.08±6.64)U/L、(29.37±4.68)U/L、(1.32±0.42)pg/mL、(0.64±0.19)pg/mL、(0.80±0.30),均低于对照组的(56.93±8.75)U/L、(38.72±5.83)U/L、(49.61±6.42)U/L、(3.91±1.14)pg/ml、(3.01±0.87)pg/ml、(1.61±0.36),差异有统计学意义(P<0.05)。研究组CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、C3、C4分别为(66.81±8.55)%、(1.53±0.16)、(1.22±0.01)g/L、(0.42±0.07)g/L,均高于对照组的(61.03±8.49)%、(1.26±0.2)、(0.73±0.09)g/L、(0.22±0.06)g/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PEG-IFNα-2b联合替诺福韦治疗慢性乙型肝炎效果明显,可提高HBeAg、HBsAg转阴率,改善肝功能,增强免疫功能,抑制炎性反应。

IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-4在大鼠肝纤维化早期诊断中的意义

目的探讨细胞因子IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-4在肝纤维化形成过程中的变化及意义。方法50只雄性SD大鼠随机分为正常对照组和实验组,实验组腹腔注射四氯化碳(CCL4),联合饮用含硫代乙酰胺的酒精溶液诱导构建肝纤维化模型,共12 w。造模的第2、4、6、8、12 w收集血清及肝脏标本,苏木素-伊红染色观察肝脏的组织学变化,酶联免疫法检测细胞因子IL-10、TNF-a、IFN-γ和IL-4在血清中的表达水平,并分析其相关性。结果组织学观察发现,实验组2 w时细胞肿胀变性;4 w时小灶性肝细胞坏死,门管区大量炎症细胞浸润;6 w时可见明显肝细胞脂肪变性;8 w时肝细胞变性和坏死加重,出现胆汁淤积,门管区炎症细胞浸润及纤维组织增生,可见不完整假小叶形成;12 w时,可见完整假小叶形成。随造模时间延长,与对照组相比,血清中IL-4、IFN-γ、TNF-α的表达逐渐增加,均高于对照组,有统计学意义(P<0.01)。IL-10的表达水平在2 w时达到峰值后,接着开始降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清中TNF-α、IFN-γ、IL-4表达水平随肝纤维化程度加重而逐渐升高,在肝纤维化的进展过程中发挥重要作用,对肝纤维的诊断及进展观察有一定的参考价值。

IFN-α对山羊副流感病毒3型的抗病毒活性

旨在探讨原核表达纯化的山羊α干扰素(IFN-α)对山羊副流感病毒3型(CPIV3)的抗病毒活性。通过分析山羊IFN-α的序列特点,比对不同种属IFN-α的同源性,进而构建山羊IFN-α成熟蛋白编码基因(去除信号肽基因序列)的原核表达载体pET-30a-gIFN-α,将其转化至感受态细胞Rosetta(DE3),IPTG诱导后镍柱及亲和纯化获得山羊IFN-α。利用RT-qPCR测定山羊IFN-α作用于牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney cell,MDBK cell)后6种干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)的相对表达水平;同时,利用TCID50及Western blot测定其对CPIV3的抗病毒活性。结果表明,原核表达的山羊IFN-α蛋白含量为0.20 mg·mL^(-1),Western blot结果表明表达产物相对分子质量约为20 ku,与预期结果相符。RT-qPCR结果显示,山羊IFN-α孵育MDBK细胞后,可显著刺激RSAD2、STAT1及ISG15等6种ISGs基因的转录上调。与对照组细胞相比,山羊IFN-α显著下调MDBK细胞中CPIV3的病毒滴度,Western blot结果显示,山羊IFN-α孵育显著下调CPIV3非结构蛋白C的表达水平。山羊IFN-α对CPIV3在MDBK细胞中的增殖具有显著抑制作用。本研究扩展了I型干扰素的研究范围,为CPIV3等反刍动物疫病的防控提供新的思路。

清肺口服液黄酮类组分对呼吸道合胞病毒感染小鼠IFN-α/JAK1/STAT1信号通路的影响

目的基于IFN-α/JAK1/STAT1信号通路探讨清肺口服液黄酮类组分抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染的作用机制。方法36只雌性清洁级BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组及清肺口服液黄酮类组分低、中、高剂量组(黄酮组分低、中、高剂量组),每组6只。除正常组外,其余组经鼻予RSV病毒液造模,造模成功后给药,各给药组予相应药物灌胃,正常组和模型组予等体积生理盐水,共4 d。HE染色观察小鼠肺组织病理变化,ELISA检测血清α干扰素(IFN-α)含量,RT-PCR检测肺组织RSV-F、Janus酪氨酸蛋白激酶1(JAK1)和信号传导与转录激活因子1(STAT1)mRNA表达,Western blot及免疫组化染色检测肺组织JAK1和STAT1蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠肺组织明显充血,有大量炎性细胞浸润,血清IFN-α含量明显增加(P<0.001),肺组织RSV-F、JAK1和STAT1 mRNA表达明显升高(P<0.01),JAK1和STAT1蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.001)。与模型组比较,利巴韦林组及黄酮组分各剂量组小鼠肺组织病理损伤状况明显改善,肺组织RSV-F mRNA表达明显降低(P<0.05);黄酮组分高剂量组血清IFN-α含量明显增加,肺组织JAK1和STAT1 mRNA及蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论清肺口服液黄酮类组分具有抗RSV感染作用,其机制可能与上调IFN-α表达,激活JAK1/STAT1信号通路,增强机体免疫功能有关。

PEG-IFN α-2b治疗后慢性乙肝患者体内PBMC中的p11 mRNA GRα mRNA水平与抑郁症的相关性

目的 研究经聚乙二醇干扰素α-2b治疗后,慢性乙肝患者外周血单个核细胞中p11 mRNA、糖皮质激素受体α(GRα) mRNA水平与抑郁症的相关性。方法 对60例慢性乙型肝炎患者进行编号,采用随机数字表法,随机分为观察组和对照组各30例,均常规给予护肝和抗病毒治疗,观察组在此基础上给予聚乙二醇干扰素α-2b治疗,疗程均为24周。采用汉密顿抑郁量表评估两组患者治疗前后的抑郁水平,检测外周血中的炎症因子、神经递质、p11 mRNA和GRα mRNA水平,并对两组患者p11 mRNA、GRα mRNA水平与抑郁症评分进行相关性分析。结果 两组患者治疗24周后,乙型肝炎病毒DNA应答率均较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05)。两组患者治疗24周后,汉密顿抑郁量表评分、血清γ干扰素和肿瘤坏死因子α水平均较治疗前升高(P<0.05或0.01),白细胞介素-4、血浆甲肾上腺素和5-羟色胺水平较治疗前降低(P<0.05或0.01),而观察组汉密顿抑郁量表评分和抑郁症发生率均明显高于对照组(P<0.05)。两组患者治疗24周后,观察组外周血单个核细胞中p11 mRNA水平高于对照组(P<0.05),GRα mRNA水平则低于对照组(P<0.05),且观察组外周血单个核细胞中p11 mRNA与γ干扰素、TNF-α和汉密顿抑郁量表评分呈正相关性(P<0.01),GRα mRNA与血浆甲肾上腺素、5-羟色胺水平和汉密顿抑郁量表评分也呈正相关性(P<0.01)。结论 聚乙二醇干扰素α-2b治疗后慢性乙肝患者外周血单个核细胞中p11 mRNA表达明显升高,GRα mRNA表达明显降低,且与外周血炎症因子和神经递质表达密切相关,可能是导致抑郁症发生的重要原因。

EBV通过抑制IFN-α蛋白表达逃逸免疫应答促进免疫性血小板减少症发生的机制

目的 研究爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)逃逸免疫应答促进免疫性血小板减少症(ITP)发生的机制。方法 从ITP患儿和健康儿童外周血中提取并培养单核细胞,并用EBV对外周血单核细胞进行感染,然后用酶联免疫吸附试验和Western blot检测干扰素-α(IFN-α)蛋白的表达情况。结果 与对照组比较,EBV感染后可抑制人外周血单核细胞分泌IFN-α(P<0.01)。与健康儿童比较,EBV刺激人外周血单核细胞后,IFN-α蛋白表达量显著降低,且ITP患儿外周血单核细胞IFN-α蛋白表达量也明显降低,SOCS3蛋白表达量显著增高(P<0.01)。siRNA靶向SOCS3转染实验结果中,与健康儿童比较,siSOCS3的敲除率高于70%,且敲除SOCS3后再用EBV感染,EBV抑制IFN-α蛋白分泌的作用显著减弱(P<0.01)。转染ZTA质粒后,ZTA蛋白及SOCS3蛋白表达均显著增高。结论 EBV能够通过调控ZTA蛋白表达,从而抑制IFN-α的表达,逃逸免疫应答促进ITP的发生。

维生素D、IFN-γ与哮喘的相关性研究进展

维生素D通过遗传与非遗传因素影响哮喘,与哮喘的发生、严重程度、肺功能指标等存在明显的相关性。IFN-γ的升高与哮喘严重程度有关。维生素D可以通过影响IFN-γ的表达从而影响哮喘。该文就维生素D、IFN-γ与哮喘的关系作一综述。

阿拉伯木聚糖联合美多芭对帕金森病大鼠炎症因子TNF-α、IL-1β及IFN-γ表达的影响

目的探究阿拉伯木聚糖(araboxylan,AX)联合美多芭对鱼藤酮诱导的帕金森病(parkinson’s disease,PD)大鼠模型炎症因子TNF-α、IL-1β及IFN-γ的影响。方法42只大鼠随机选取28只进行PD造模,造模后分为帕金森模型组(PD组)、美多芭组(M组)和阿拉伯木聚糖组(AX组)、美多芭+阿拉伯木聚糖组(MX组)4个组;其余14只随机均分为空白组和溶剂组,每组7只。M组美多芭干预,AX组AX干预,MX组AX联合美多芭干预,灌胃14 d,每天1次。进行悬挂试验及爬杆实验,蛋白免疫印迹(Western Blotting,WB)检测黑质纹状体IFN-γ蛋白和免疫组化检测黑质纹状体IL-1β蛋白,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组血清TNF-α、IL-1β的表达。结果悬挂实验:AX、M组、MX组较PD组悬挂时间延长,四肢肌力改善,且MX组症状恢复更明显(P<0.01)。WB:AX组、M组、MX组与PD组比较,黑质纹状体IFN-γ的含量减少(P<0.05)。免疫组化:AX组、M组、MX组与PD组比较,黑质纹状体IL-1β表达量明显减少。ELISA:AX组、M组、MX组与PD组比较血清TNF-α降低。差异有统计学意义(P<0.05),MX组较AX组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿拉伯木聚糖联合美多芭抑制鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠炎症因子TNF-α、IL-1β及IFN-γ的释放,较好地改善了大鼠的神经功能。

miRNA146a通过TRAF6下调IFNβ的表达

目的探讨miRNA146a通过TRAF6下调IFNβ的表达情况。方法设计TRAF6基因3’UTR区miRNA146a结合位点的野生型引物,随后预测IRF-3及TRAF6基因3’UTR区域可能的miRNA结合位点,以人cDNA为模板,进行PCR目的片段扩增,将HeLa细胞在含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液进行传代培养,并进行细胞RNA提取,逆转录,进行实时定量RT-PCR、免疫印迹实验。结果miRNA146a、miRNA23a、miRNA24k可上调IRF-3启动子活性,通过表达miRNA146a转染细胞检测IFNβ通路上游分子TRAF6、IRAK1、NF-κB,提示miRNA146a、TRAF6、IRAK1、NF-κB均明显下降,表达miRNA146a降低pGL3c-TRAF6-3UTR萤光素酶活性,干扰miRNA146a可上调萤光素酶活性,miRNA146a下调TRAF6表达,TRAF6 siRNA下调PolyI:C激活的IFNβ启动子活性,TRAF6 siRNA较对照能够显著增加miRNA146a对IFNβ启动子下调作用。结论IRF-3及IFNβ可能是EB病毒诱导宿主miRNA的调控靶点,为防治EB病毒相关疾病提供新的思路。

Th1 cells inducing IFNγ response improves immunotherapy efficacy in gastric cancer

Objective: Cancer immunotherapy has made remarkable advances in recent years, but its effectiveness in treating gastric cancer is often limited by the complexity of the tumor microenvironment and the lack of effective biomarkers. This study aimed to identify effective biomarkers for immunotherapy treatment by characterizing the tumor microenvironment.Methods: We retrieved the RNA-seq data from gastric cancer patients treated with the programmed death 1(PD-1) blockade pembrolizumab. Differentially expressed genes associated with clinical outcomes were identified and further analyzed using gene ontology(GO) and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG) pathway analysis. Gene signature scores were calculated by single sample Gene Set Enrichment Analysis(ssGSEA). The infiltration levels of immune cells were quantified using the xCell website. Cell type enrichment analysis was performed to compare treatment response and non-response groups, and regression analysis was used to investigate the relationship between interferon gamma(IFNγ) immune response and immune cell infiltration. Biomarkers were identified using least absolute shrinkage and selection operator(LASSO) analysis.Results: Compared to normal tissues, cytokine activity and interleukin-6 production were highly activated in gastric tumors. Responders to pembrolizumab showed significantly up-regulated expression of IFNγ responserelated genes. Cell type enrichment analysis revealed that Th1 cells were significantly enriched in the tumor microenvironment of responders. Regression analysis indicated that Th1 cells induced IFNγ response more efficiently than other cell types. Using signatures of Th1 cells, stromal cells and IFNγ response, a set of eight genes were identified that effectively predicted the efficacy of immunotherapy treatment and patient prognosis.Conclusions: Th1 cells promote therapeutic efficacy of PD-1 blockade by promoting IFNγ immune response in gastric cancer. The identified biomarkers have the potential to improve the effectiveness of immunotherapy treatment for gastric cancer patients.

上皮IFNγ信号传导和区室化抗原呈递协调肠道免疫

所有有核细胞均表达主要组织相容性复合物I和干扰素-γ(IFNγ)受体,但上皮细胞所具有的IFNγ信号传导或通过主要组织相容性复合物I进行抗原呈递的特异性功能尚未被探索。研究人员发现,在感应IFNγ时,结肠上皮细胞有效地将病原体和自身衍生的抗原呈递给同源的上皮内T细胞,这些T细胞位于上皮屏障的关键位置。上皮细胞的抗原呈递赋予同源的上皮内T细胞ATP酶的胞外表达,这限制了胞外三磷酸腺苷的积累以及随后组织巨噬细胞中NLRP3炎性小体的激活。相比之下,组织巨噬细胞的抗原呈递以及炎性小体相关的白细胞介素-1α和白细胞介素-1β的产生,促进了CD4+T细胞在体内向产生粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的T细胞的致病性转化,从而促进结肠炎和结直肠癌。综上所述,该研究揭示了需要上皮细胞进行IFNγ感应和抗原呈递的关键检查点,这些检查点控制体内致病性CD4+T细胞反应的发展。

不同基质松节油膏对骨性关节炎大鼠的疗效及关节炎症的影响

目的比较以羊油和酥油为基质制作的松节油膏和以凡士林为基质制作的松节油膏对骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)大鼠的疗效及关节炎症的影响。方法选取SD雄性大鼠90只为研究对象,10只作为空白组,其余80只大鼠关节注射单碘乙酸钠(Monoiodoacetate,MIA)建立OA模型,造模成功后,随机分为模型对照组(不用任何药物)、阳性对照组(外用消肿止痛酊0.5 mL/次)、松节油膏高剂量组(80 mg/kg)、松节油膏中剂量组(40 mg/kg)、松节油膏低剂量组(20 mg/kg)、凡士林高剂量组(80 mg/kg)、凡士林中剂量组(40 mg/kg)、凡士林低剂量组(20 mg/kg),各给药组3次/d,连续7 w。各组大鼠给药50 d后断尾取血,比较各组大鼠关节炎指数、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的水平、白细胞(White blood count,WBC)中性粒细胞(Neutrophils,NEU)计数。结果与空白组比较,模型对照组大鼠关节指数,血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平,WBC及NEU计数均升高(P<0.05);与模型对照组比较,松节油膏高、中、低剂量组和凡士林高、中、低剂量组大鼠关节指数、大鼠血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ、WBC及NEU计数显著降低(P<0.05);与松节油膏中剂量组比较,凡士林高中低剂量组大鼠关节指数、大鼠血清IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平相对较高(P<0.05)。结论以羊油和酥油为基质制作的松节油膏和以凡士林为基质制作的松节油膏均能改善关节功能,减轻炎症反应和软骨破坏,尤以羊油和酥油为基质制作的松节油膏效果更明显。