基因工程干扰素(IFNα2a)的抗疱疹病毒效应

采用微量细胞病变抑制法在Vero细胞上研究了IFNα2a抗HSV－Ⅰ型和HSV－Ⅱ型疱疹病毒的作用。结果表明，万兴IFNα2a和罗扰素IFNα2a在Vero细胞上500IU／ml可以抗1000TCID50，50IU／ml可以抗100TCID50，5IU／ml可以抗10TCID50的HSV－Ⅰ型和HSV－Ⅱ型疱疹病毒感染细胞。提示万兴IFNα2a和罗扰素均显示明显的抗病毒效应，且两者无明显差别。

基因工程IFNα_(2a)和IFNα_(2b)对肿瘤细胞生长的抑制作用

为了研究不同品牌不同亚型基因工程α干扰素的抗肿瘤效应，采用ＭＴＴ法将不同浓度的α干扰素分别对５种肿瘤细胞进行生长抑制实验。结果表明不同品牌的１００００ＩＵ／ｍｌ，１０００ＩＵ／ｍｌ，１００ＩＵ／ｍｌ的ＩＦＮα２ａ或ＩＦＮα２ｂ对人脑胶质瘤细胞（ＳＨＧ４４），人骨肉瘤细胞（ＨＯＳ８６０３），人白血病细胞（ＨＬ６０），红白血病细胞（Ｋ５６２）和淋巴瘤细胞（Ｒａｊｉ）的生长均有不同程度的抑制作用。其抑制率分别为２０％，１０％，５％左右。进口和国产的不同品牌ＩＦＮα２ａ和ＩＦＮα２ｂ对上述５种肿瘤细胞株均有较明显的生长抑制效应，而且抑制的百分率均相近。

基因工程IFNα_(2a)对肿瘤细胞生长的抑制作用

采用α－干扰素抑制各种肺癌细胞生长的MTT法。结果：不同品牌的10000，1000，100IU／ml的IFNα2a对人脑胶质瘤细胞（SHG—44）、人骨肉瘤细胞（HOS－8603）、人白血病细胞（HL－60）、红白血病细胞（K562）和淋巴瘤细胞（Raji）的生长抑制率分别为20％，10％，5％左右。结论：进口和国产的不同品牌IFNα2a。对上述5种肿瘤细胞株均有较明显的生长抑制效应，且抑制率相近。

IFN-α2b对慢性乙肝患者抗病毒及免疫调节作用

目的探讨IFN-α2b对慢性乙肝患者抗病毒效果及对CD25的免疫调节作用。方法选择160例慢性乙肝患者(轻度93例,中度67例),随机分为IFN和常规治疗组,用生物素-链霉亲和素(BSA)法和Real-time PCR法分别动态检测PHA诱导前后CD25和CD25 mRNA的表达水平,PCR法动态检测患者治疗前后HBV-DNA水平。结果轻、中度组患者经干扰素治疗后,静息态和诱导态CD25表达水平逐渐升高,其CD25 mRNA含量亦升高。第3疗程后,轻、中度组中以干扰素治疗者CD25表达水平与同期常规治疗者相比,差异有显著性(P<0.05)。CD25 mRNA表达水平与CD25的表达具有平行性。IFN治疗者血清和PBMC内HBV-DNA阴转率均高于常规治疗者(P<0.05或P<0.01)。结论IFN-α2b对血清和PBMC内HBV-DNA均有较好阴转效果,阴转率明显高于常规治疗者。IFN-α2b可诱导T细胞活化,CD25表达水平增加,通过免疫调节发挥抗病毒作用。

聚乙二醇修饰重组人IFNα_(2b)体外理化性质的初步研究

目的 分析聚乙二醇（PEG）化学修饰重组人IFNα2b（PEC-IFNα2b）的体外理化性质,并与修饰前IFNα2b进行比较。方法 将IFNα2b与PEG-IFNα2b进行胰酶消化和56℃保温实验,不同时间取样测其抗病毒活性。IFNα2b的抗体与IFNα2b和PEG-IFNα2b做双相琼脂扩散。结果 修饰后的IFNα2b的抗胰蛋白酶降解及抗热能力均明显优于未修饰的IFNα2b,抗原性亦明显下降。结论 对PEG-IFNα2b的体外理化性质进行初步分析,为研究和开发长效干扰素提供理论依据。

体内观察IFN-α2b对慢性乙肝患者CD25的免疫诱导作用

[目的]探讨在体内IFN-α2b(干扰素-α2b)对慢性乙肝患者CD25(白细胞分化抗原25)的免疫诱导作用及其抗病毒效果。[方法]采用临床试验将110例典型慢性乙肝患者根据病情分为轻度组(65例),中度组(45例),并给予IFN-α2b治疗3疗程(每疗程12周)。每疗程前后,应用生物素-链霉亲和素(BSA)法和RT-PCR法动态检测体外PHA诱导前后患者PBMC的CD25和CD25 mRNA的表达水平,PCR法动态检测患者外周血单个核细胞(PBMC)内和血清中HBV-DNA。[结果]轻度组和中度组患者经干扰素治疗后的静息态和诱导态CD25表达水平逐渐升高,其CD25 mRNA含量亦同步升高,但与正常对照组仍存在不同差异性(P﹤0.05或P﹤0.01)。IFN-α2b治疗36周后,患者PBMC内、血清中HBV-DNA和HBeAg阴转率两组分别为29(44.62%)、26(40.00%)、39(60.00%)和11(24.44%)、9(20.00%)、17(37.78%),差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]IFN-α2b可诱导慢性乙肝患者表达CD25,促进T细胞活化发挥抗病毒作用。此效果轻度组高于中度组,似与患者病情程度相关。

同位素法体内示踪HSA-IFN-α2b的方法学研究

采用氯胺-T法制备了^(125)I-HSA-IFN-α2b,标记率为82.7%,放化纯度>95%,放射性比活度为O.26 TBq/g。体外WISH/VSV系统抗病毒活性分析表明,^(125)I标记对HSA-IFN-β2b的生物学活性几乎无影响。^(125)I-HSA-IFN-α2b的血清和各组织的回收率分别为102.0%、104.0%(心脏)、100.4%(肺)、100.9% (肝)、104.1%(脾)、101.4%(肾)和103.0%(小肠),均符合方法学考核中回收率达90%～110%的要求。^(125)I-HSA-IFN-α2b的溶液干扰、血清样品干扰和组织样品干扰实验的结果表明,溶液、血清和组织样品对测定均无干扰,可以直接进行测定。根据实验结果可以初步推断,采用^(125)I-HSA-IFN-α2b同位素示踪法进行HSA-IFN-α2b的体内分布排泄研究是可行的。

IFNα2b诱导MxA蛋白的表达及其抗病毒活性研究

目的 研究MxA抗病毒蛋白的表达及其活性。方法 用IFNα2b处理WI - 38细胞或人外周血单核细胞 12h或 2 4h ,并用Western -blot法或FACS法分别进行MxA蛋白表达的检测及微量细胞病变抑制法对重组的MxA和IFNα2b进行抗病毒效应实验。结果 (1)低浓度IFNα2b(>1IU/ml)可诱导WI- 38细胞表达MxA ;(2 ) 10ng/mlMxA可以抵抗 2 0TCID50 的HSV -I、Polio .V感染Vero细胞 ,抵抗 2 0 0TCID50 的VSV感染Wish细胞。结论 MxA是由I型干扰素特异诱导产生的 ,且具有广谱的直接抗病毒活性。

IFN—α2b治疗慢性乙型肝炎30例临床分析

本人通过学习《慢性乙型肝炎治疗指南》临床应用干扰素对慢性乙型肝炎（慢乙肝）进行抗病毒治疗。我采用北京凯因生物技术有限公司生产的重组人干扰素（IFN—α2b凯因益生）治疗慢性乙肝患者30例．取得较好疗效。现报告如下：

融合蛋白IFNα2a-α-MSH对小鼠黑色素瘤生长的抑制作用

目的观察融合蛋白IFNα2a-α-MSH对小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用。方法将小鼠黑色素瘤细胞株B16接种于C57BL/6小鼠背部皮下,待肿瘤直径长至4mm以上时,将小鼠分为4组,分别经肌肉注射生理盐水(阴性对照)、IFNα2a(9×106U/kg鼠重)、IFNα2a-α-MSH(9×106U/kg鼠重)及腹腔注射环磷酰胺(20mg/kg鼠重,阳性对照),前3组1次/d,阳性对照组隔日1次,共11d。隔日测量肿瘤大小;末次给药后24h,处死小鼠,称瘤重,并计算肿瘤抑制率。结果 IFNα2a-α-MSH可明显抑制小鼠黑色素瘤的生长,且其抑瘤作用明显强于IFNα2a。结论 IFNα2a-α-MSH对小鼠黑色素瘤生长有较强的抑制作用,为IFNα2a-α-MSH临床治疗黑色素瘤提供了实验依据。

α2b-IFN诱导CD25表达和对PBMC内HCV RNA的阴转作用

目的探讨α2b-IFN对PBMC内CD25的诱导及对HCV-RNA、抗-HCV转阴效果。方法用BSA法检测慢性丙肝患者治疗前后CD25表达水平。以α2b-IFN（3MU／d）治疗3个月为一疗程，共2个疗程，于治疗前后分别检测患者PBMC内HCV-RNA和血清HCV-RNA、抗-HCV。结果慢性丙肝患者α2b-IFN治疗后静息期、诱导期CD25表达水平分别为（3．44±0．77）％、（33．62±3．95）％，PBMC、血清内HCV-RNA和抗-HCV转阴率分别为42．31％（11／26）、57．69％（15／26）和65．38％（17／26），与对照相比差异有显著性（P〈0．01～P〈0．05）。结论α2b—IFN可诱导CD25表达，对PBMC内HCV-RNA具有肯定的治疗作用，其疗效优于常规治疗。

人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白在毕赤酵母中表达及质量控制

筛选获得毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K/hsa-ifnα2b,胞外分泌表达rHSA-IFNα2b药物蛋白。经摇瓶及5 L发酵罐条件优化,确定最佳发酵条件。经50 L发酵罐工艺放大,发酵产量稳定,可达到350 mg/L。离心获得发酵上清液,超滤浓缩10倍,再依次通过Blue Sepharose 6FF亲和层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析及Q Sepharose 6FF离子柱纯化。纯化产品进行SDS-PAGE纯度检测、SEC-HPLC检测、相对分子质量测定、N端测序、内毒素检测和生物活性检测。筛选获得一株高产菌,优化获得最佳的发酵条件。纯化产品检测(SEC-HPLC)纯度大于95%,相对分子质量为85 821,氨基酸的N端测序为DAHKSEVAHRFKDLG,与预期的相符。内毒素含量小于5EU/mg,符合国家药典的要求。体外生物细胞活性高达1.6×106IU/mg。具有良好的工业应用价值。

重组人干扰素α 2b抗流感病毒的研究

采用鼻腔给药方法,随机选取昆明小鼠60只,每组20只,共分3组,第1组为病毒对照组,第2组为感染前给药组即感染病毒前24h给药,第3组为同时给药组即病毒感染与用药同时进行,小鼠每天滴鼻给药1次,IFNα2b滴鼻剂剂量为10000IU/只,病毒浓度为10个EID50,对照组给予生理盐水,连续给药6d后处死小鼠,观察小鼠肺部病变,并采用血凝滴定法检测鼠肺中流感病毒含量。观察重组人干扰素α2b(IFNα2b)抗流感病毒效果,小鼠肺部病变严重程度依次为1组>3组>2组,血凝滴定结果表明,1、2与3组GMT平均值分别为4.141,2.000,2.070,重组人干扰素α2b滴鼻剂对流感病毒有明显抑制作用。

人α2a干扰素酵母工程菌高产培养条件的研究

研究了摇瓶培养条件对人α2 a干扰素酵母工程菌生长及表达的影响 ,结果表明 ,当基础料中腺嘌呤含量为 2 0μg/m L,在发酵进行至 1 2 h时再加入 2 0μg/m L腺嘌呤时 ,IFN-α2 a生物活性及比活分别达到了 7.3× 1 0 6IU/m L及 6 .77× 1 0 7IU/mg。发酵过程中后期补入适量葡萄糖 ,且维持低糖水平 ,有利表达。维持总碳源含量不变 ,使培养基中葡萄糖与蔗糖比例为 1∶ 0 .1 ,结果 IFN- α2 a生物活性及比活分别比对照增加了一倍以上。在发酵进行至 1 2 h时 ,加入 2 g/L谷氨酸 ,IFN-α2 a生物活性及比活分别比对照提高了 1 .76倍及 1 .94倍 ,而添加 0 .2 5～ 1 .0 g/L赖氨酸也能显著提高表达水平。培养基初始 p H对产物表达有较大影响 ,初始 p H为 6 .5时 ,对表达最有利。利用上述摇瓶培养优化条件 ,在 2 .6 L 生物反应器中进行补料分批培养 ,人 α2 a干扰素生物活性达到了1 .3× 1 0 7IU/m L,为原工艺的 3倍。

聚乙二醇干扰素α-2a联合ETV治疗HBeAg阴性CHB临床研究

目的探讨聚乙二醇干扰素α-2a(Peg-IFNα2a)联合恩替卡韦(ETV)治疗HBe Ag阴性慢性乙型肝炎(CHB)48周的疗效及安全性。方法回顾性纳入2013年6月至2015年6月在首都医科大学附属北京佑安医院接受Peg-IFNα2a(135μg/周)联合ETV(0.5 mg/d)治疗的50例初治HBe Ag阴性CHB患者,收集基线和治疗过程中每12周的临床数据,包括HBV DNA和HBs Ag水平等,分析48周HBV DNA不可检测率、HBs Ag清除率及不良反应发生情况。结果 Peg-IFNα2a联合ETV治疗48周,全部患者HBV DNA低于检测值(<20 IU/m L);HBs Ag清除率及血清学转换率分别为24%和16%。不良反应主要表现为发热、乏力、脱发、食欲下降、皮疹和甲状腺功能减退,给予对症及支持治疗,均可继续原方案。结论 Peg-IFNα2a联合ETV可提高HBe Ag阴性CHB的HBs Ag清除率,且安全性良好,是值得探索的优化治疗策略之一。

HBsAg冲击致敏的自体DCs诱导的CIK细胞对慢性乙型肝炎的治疗作用

目的:探讨HBsAg冲击致敏的自体DCs及其诱导的HBsAg特异性CIK细胞对慢性乙型肝炎(CHB)的治疗作用.方法:研究对象分为HBsAg特异性CIK细胞治疗组(特异性CIK组,23例),拉米夫定组(LAM组,17例)和干扰素组(IFNα2b组,13例),所有病例均按标准诊断为慢性乙型肝炎(CHB),轻度.常规分离外周血单个核细胞,进一步培养诱导成为HBsAg冲击致敏的DCs及HBsAg特异性CIK细胞,分别经皮下和静脉回输.另选LAM和IFNα2b常规治疗作为对照.观察HBV标记物、肝功能的变化和毒副作用,治疗结束后随访.结果:自体HBsAg冲击致敏的DCs及其诱导的HBsAg特异性CIK(细胞可促进CHB患者HBeAg和HBVDNA阴转,HBeAg/HBeAb的血清转换,肝功能的恢复,疗效高于拉米夫定治疗组(P<0.05),与干扰素治疗组比,无显著差异(P>0.05).结论:HBsAg冲击致敏的DCs及其诱导的HBsAg特异性CIK细胞对CHB有治疗作用,有临床应用前景.

微生物来源的谷氨酰胺转氨酶(mTG)介导的单一定点修饰的PEG IFN-α2a(英文)

PEG修饰被认为是改善重组蛋白药物特性的最有效手段,包括增加蛋白质药物在体内的血浆半衰期,降低免疫原性和抗原性。目前典型的PEG修饰手段为将PEG连接至蛋白质的游离氨基,包括赖氨酸和N-末端,但这种连接缺乏选择性,产物为混合物,活性及工艺稳定性差,难以控制。酶法PEG化修饰能有效克服上述缺点,其中谷氨酰胺转氨酶(TGase)可以作为PEG化定点修饰用酶。文中选择重组人干扰素α2a(IFNα2a)进行酶法修饰反应,通过计算机模拟预测IFNα2a可以在第101位Gln特异性定点修饰。将IFNα2a与40 kDa的Y型PEG在微生物来源的谷氨酰胺转氨酶(mTG)催化下进行定点PEG化修饰。结果显示,mTG可以介导IFNα2a特异性位点Gln的单一定点PEG修饰,产生分子量为58 495.6 Da的PEG-Gln101-IFNα2a分子。圆二色谱结果显示,PEG-Gln101-IFNα2a与未修饰的IFNα2a具有相同的二级结构。SD大鼠药代结果显示,与IFNα2a相比,PEG-Gln101-IFNα2a能有效提高药代动力学参数,强于已上市PEGIFNα2a-PEGASYS?。

干扰素α2a与白细胞介素-2联合作用对体外HepG2.2.15细胞增殖及乙型肝炎病毒复制的影响

目的探讨干扰素α2a(interferonα2a,IFNα2a)与白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)联合作用对体外肝癌细胞HepG2.2.15增殖及乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响。方法用不同浓度的IFNα2a(5 000、10 000、15 000 IU/ml)和IL-2(2 500、5 000、10 000 IU/ml)单独及联合作用HepG2.2.15细胞96 h后,采用WST-1法检测细胞增殖情况,倒置相差显微镜观察联合作用组细胞形态学变化,ELISA法检测联合作用组细胞上清中HBsAg和HBeAg的表达,斑点杂交法检测联合作用组细胞HBV-DNA的复制情况。结果与不同浓度的IFNα2a和IL-2单独作用相比,二者联合作用对HepG2.2.15细胞增殖的抑制作用明显增强(P<0.05);IFNα2a与IL-2联合作用组HepG2.2.15细胞显微镜下可见细胞逐渐变圆,胞浆中颗粒增多,增殖变慢,细胞间接触不紧密,细胞周围碎片增多;联合作用组细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的表达明显受到抑制(P<0.05);5 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2、10 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2和15 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2对HepG2.2.15细胞HBV-DNA的复制有抑制作用。结论 IFNα2a与IL-2联合作用对HepG 2.2.15细胞增殖及HBV-DNA复制均有抑制作用。本实验为后续体内动物实验及筛选合适的疫苗佐剂奠定了基础,也为新型乙型肝炎疫苗及治疗性乙型肝炎疫苗的研究提供了参考。

其他型别肠道病毒感染手足口病患儿病毒排泌时间分析

目的了解非肠道病毒71型(EV71)非柯萨奇病毒16型(CA16)肠道病毒(其他型肠道病毒)感染手足口病患儿的排毒时间,以及重组人IFNα2b喷雾剂干预治疗对其排毒时间的影响。方法收集2016年12月至2017年12月杭州市儿童医院收治住院的其他肠道病毒感染手足口病患儿共159例,在入院2 d内同时采集患儿粪便和咽拭子样本,通过荧光定量PCR法进行病毒检测。对实验室确诊资料完整的87例患儿咽部及肠道排毒情况进行追踪和随访,实验组采用重组人IFNα2b喷雾剂干预治疗(52例),对照组用开喉剑喷雾剂治疗(35例),观察两组病毒转阴情况。结果159例患儿治疗第1周时粪便病毒核酸检测均为阳性,第2周时出现转阴病例,至第6周全部转阴。重组人IFNα2b喷雾剂干预治疗对其他肠道病毒型手足口病5~7 d咽部排毒的累计转阴率为54.0%,高于对照组的40.0%,但差异无统计学意义(χ^2=1.382,P>0.05);两组肠道病毒累计转阴率比较差异无统计学意义(χ^2=0.131,P>0.05)。结论其他肠道病毒感染手足口病患儿第2周出现肠道病毒转阴。重组人IFNα2b喷雾剂干预治疗一定程度略提高咽部排毒转阴率。