pcEgr-IFNγ重组质粒的构建与体外X射线诱导表达特性

目的 :扩增小鼠IFNγcDNA全长并构建pcEgr_IFNγ重组质粒 ,研究该重组质粒在不同剂量X射线作用下在B16细胞中的表达及时程。 方法 :利用PCR方法扩增小鼠IFNγcDNA全长 ,插入 pcDNA3.1质粒的多克隆位点 ,用Egr_1的启动子替代pcDNA3.1质粒的CMV启动子 ,构建成 pcEgr_IFNγ重组质粒 ;通过脂质体转染法将重组质粒转染入B16细胞 ,利用ELISA试剂盒检测在不同剂量X射线作用下 ,重组质粒的表达量及表达时程。 结果 :IFNγcDNA的扩增产物经测序 ,结果基本与已知序列相符 ,重组质粒经酶切鉴定 ,得出相应的特异带。不同剂量X射线照射后 ,pcEgr_IFNγ在B16细胞中表达量为77.73～94.60pg/ml ,明显高于对照组(P<0.05～P<0.01) ;2GyX射线照射后6h ,pcEgr_IFNγ表达量最高 ,为90.00pg/ml,明显高于对照组(P<0.001)。 结论 :用本实验克隆的IFNγcDNA所构建的 pcEgr_IFNγ重组质粒 ,经X射线的诱导 ,在被转染的B16细胞中表达量明显增高。对重组质粒X射线诱导表达的剂量时程的检测 ,为将来pcEgr_IFNγ基因治疗合并放疗的体内研究奠定了基础。

Egr-IFNγ重组质粒的构建和在B16细胞中的辐射诱导表达

小鼠IFNγ cDNA基因连接到Egr-1启动子的下游构建成Egr-IFNγ重组质粒,利用质脂体介导转染B16细胞,用ELISA方法检测x射线照射后IFNγ表达的剂量效应和时程。结果表明,实验组的表达水平明显高于对照组,其中20Gy和2Gy照射组高于其它实验组(p<0.01)。26y照射后6h IFNγ表达量最高(p<0.01)。转染后的B16细胞每隔24h接受2Gy x射线照射,结果显示第一次照射后表达量最高(p<0.01),然后逐渐降低。结果提示电离辐射可激活Egr-IFNγ重组质粒,并调节IFNγ基因表达,这项研究可能对肿瘤治疗的研究有一定的意义。