猪IFN-α_1和IFN-β_1基因的克隆与序列分析

从猪的肝细胞中提取总RNA，应用RT-PCR技术扩增IFN-α1扣IFN-β1基因，分别克隆到PMD18-T载体上。测序结果表明，克隆的IFN—α1核苷酸序列与GenBank上登录的猪IFN-α1核苷酸同源性为100％，与鼠、犬、人和牛IFN—α1基因同源性为71．1％～81．4％。克隆的IFN—β1核苷酸序列与Gen—Bank上登录的猪IFN-β1核苷酸同源性为99．6％，推导的氨基酸同源性为99．5％；与人、牛和马IFN-β1基因同源性为76．9％～80．4％。

胸腺肽α_1对哮喘患者Th_1/Th_2调控的临床研究

目的探讨胸腺肽α1对哮喘患者Th1/Th2调控的影响。方法采用临床随机对照研究的方法将50例轻、中度哮喘患者随机分成两组:基础治疗组(A组)25例,采用吸入糖皮质激素加β2激动剂治疗;实验组(B组)25例,在A组治疗方法基础上,加用胸腺肽α1(基泰)1.6mg皮下注射,一周2次,疗程12周。治疗前后分别测量血清中白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素13(IL-13)指标含量,并观察肺功能FEV1值及免疫球蛋白E(IgE)变化。另设健康对照组(C组)20例。结果A、B两组患者肺功能FEV1值治疗后较基线值分别提高0.27L和0.33L,白天哮喘症状评分分别减少0.78和0.74分,夜间哮喘症状评分分别减少1.02和1.13分,沙丁胺醇使用量分别减少1.84和1.72喷/日,两组之间比较均无显著性差异(P均>0.05)。A、B两组治疗前IL-4、IL-13、IgE水平均较健康对照组明显升高(P均<0.01),治疗后检测上述指标有明显下降(P<0.01),而IFN-γ、IL-12、IFN-γ/IL-4及IL-12/IL-13比值则与之相反。A、B两组之间对比,实验组治疗后IL-12水平及IL-12/IL-13比值高于基础治疗组(P均<0.05)。两组的不良反应轻微,两组之间无显著差异(P>0.05)。结论胸腺肽α1可以提高哮喘患者IL-12水平和IL-12/IL-13比值,在调节哮喘患者的Th1/Th2平衡方面有一定增强作用,在哮喘缓解期维持治疗和调节免疫上有应用价值。

聚乙二醇干扰素α-2a联合胸腺肽α_1治疗慢性乙型肝炎的效果观察

目的研究单用聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)联合应用胸腺肽α1(Tα1)治疗慢性乙型肝炎(CHB)的效果。方法将72例CHB患者随机分为两组,分别采用单用PEG-IFN、PEG-IFN和Tα1联用两种方法治疗,疗程均为48周,比较两组患者的疗效。结果联合组治疗后的腹胀、乏力、纳差较单用组明显改善(P<0.05),两组治疗后的肝区痛和肝脾大比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后24、48周的丙氨酸氨基转移酶与治疗前相比均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);联合组治疗后24、48周的丙氨酸氨基转移酶均低于单用组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗24周病毒降低率比较差异无统计学意义(P>0.05),两组治疗48周病毒降低率比较差异有统计学意义(P<0.05)。联合组发热24例(66.7%),单用组发热18例(50.0%),两组比较差异无统计学意义(P=0.15)。结论 PEG-IFN治疗CHB的效果确切,联合Tα1能取得更好的效果。

猪干扰素α1与胸腺肽α1融合蛋白原核表达系统的建立

依据GenBank已发表的猪干扰素α1（poIFN-α1）成熟肽基因序列,胸腺肽α1（THY-α1）蛋白序列及Escherichia coliB密码子使用频率表,优化并人工合成poIFN-α1和THY-α1基因,利用SOE-PCR法在poIFN-α1和THY-α1之间设计1个13肽Linker。将融合基因克隆至pRSFDue-t 1表达载体,转化BL21（DE3）感受态,37℃培养至菌液OD600为0.6~0.8,IPTG（0.5 mmol/L）诱导,20℃培养12h,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明：目的蛋白为菌体内可溶性表达,经强阴离子交换层析和疏水层析纯化获得高纯度poIFNα1-THYα1融合蛋白。

聚乙二醇干扰素α-2a联合胸腺肽α1治疗慢性乙型肝炎的临床研究

目的探讨聚乙二醇干扰素α-2a(PEG-IFNα-2a)联合胸腺肽α1治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法将83例CHB患者随机分为A、B两组,A组PEG-IFNα-2a联合胸腺肽α1治疗,B组单独使用PEG-IFNα-2a,对治疗前后肝组织学、血清HBsAg、HBeAg、HBVDNA等指标的变化进行观察。结果治疗组患者6个月时的血清ALT、AST复常率显著高于对照组,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组患者治疗6、9、12个月时HBsAg、HBeAg及HBVDNA转阴率与对照组比较均降低,两组比较HBsAg、HBVDNA转阴率差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者肝组织病理肝细胞炎症及纤维化程度较治疗前明显减轻,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PEG-IFNα-2a联合胸腺肽α1治疗CHB疗效优于单一使用PEG-IFNα-2a。

中国人α1型干扰素基因新变种的cDNA序列测定及其表达

为了逐步阐明中国人ＩＦＮ－α基因结构与功能的特点，将从一中国汉族正常胎儿肝细胞染色体ＤＮＡ中获得的一组ＰＣＲ克隆产物（ＰＣＲＡ０１、ＰＣＲＡ０２）分别进行核苷酸序列测定。结果表明，以上两次ＰＣＲ产物序列完全相同，它们与过去分离的ＩＦＮ－α１和ＩＦＮ－αＤ基因之间的氨基酸序列差异小于１％，为ＩＦＮ－α１基因的不同变种。ＰＣＲＡ０１、ＰＣＲＡ０２开放读码框架完全相同，与ＩＦＮ－α１和ＩＦＮ－αＤ基因相比较，其第２９９位为Ｔ，与其相应编码的第１００位氨基酸为Ｖａｌ。该基因为继黎孟枫等１９９１年所分离的ＩＦＮ－α１Ｃ基因之后所发现的又一中国人α１型干扰素基因新变种——ＩＦＮ－α１／１００Ｖ，建议命名为ＩＦＮ－α１ｄ基因。将该基因克隆于原核表达载体ＰＢＶ２２０，测定其抗病毒活性为２．４×１０７Ｕ／Ｌ。

胸腺肽α1对慢性乙型肝炎患者Th1/Th2类细胞因子水平的影响

目的:观察胸腺肽α1联合拉米夫定对慢性乙型肝炎(CHB)患者Th1/Th2类细胞因子表达的影响。方法:将慢性乙型肝炎患者48例,分为治疗组24例和对照组24例,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测两组Th1类细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)和Th2类细胞因子白介素-4(IL-4),HBV-DNA水平并比较治疗前、后变化。结果:治疗组和对照组在治疗后6个月乏力、纳差、肝区不适等症状、体征均有所改善,但治疗组改善情况优于对照组,总有效率(95.8%,23/24)明显高于对照组(75.0%,18/24)(P<0.01)。对照组治疗前后各指标差异均无统计学意义(P>0.05);治疗组治疗后IL-4,HBV-DNA水平较治疗前及对照组治疗后明显降低(P<0.01),IFN-γ水平明显升高(P<0.01)。结论:胸腺肽α1能明显提高慢性乙型肝炎患者的Th1类细胞因子中IFN-γ表达水平,改善患者Th1/Th2细胞功能失衡状态,有利于病毒的清除。

通用干扰素与胸腺肽融合基因构建与表达研究

临床上将干扰素(IFN)和胸腺肽(THYα1)联合使用远大于各自单独使用的效果,根据细胞因子协同作用的特点,本文通过DNA重组技术将两者构成一个融合基因。本实验用PCR技术将化学合成的胸腺肽α1基因与干扰素基因通过PCR拼接、扩增并克隆到PGEM-T载体中,构建克隆质粒PGEM-IFNTHY。为使IFNTHY基因在原核细胞中表达,克隆质粒经酶切、插入到表达载体pET28 a中。将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中,经诱导,SDS-PAGE和W esterb lot检测显示,pET28 IFNTHY基因得到了表达;微量细胞病变抑制法和玫瑰花结法显示表达产物有活性。

成人与小儿乙型肝炎病毒相关性肾炎的比较

为正确认识成人与小儿乙型肝炎病毒相关性肾炎（ＨＢＶ－ＧＮ）的特点。对上海医科大学各附属医院中２１例成人及２２例小儿的临床表现，病理类型，治疗反应及转归等不同之处进行了比较，同时，用微量酶联免疫法检测ＨＢＶ标志，肾组织的病理形态，免疫组化法检测肾组织ＨＢＶ抗原，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交检测ＨＢＶＤＮＡ。结果发现成人组病程长于小儿组，提示成人肾脏受损日期较长；临床表现成人呈肾病１１／２１例，慢性肾炎９／２１例，小儿则以肾病为主２１／２２例；病理类型二组均以膜性肾炎占首位，但小儿组为１７／２２例高于成人组１０／２１例。二组共有３４例肾病及慢性肾炎患者对类固醇激素治疗不敏感。有４例患儿接受人α＿１－干扰素治疗，随访１～３年，２例血清ＨＢＶ抗原转阴，另２例尿蛋白消失，上述结果提示：人α＿１－干扰素为治疗小儿ＨＢＶ－ＧＮ开辟了一新的途径。