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FMDV 3D基因真核表达质粒的构建、表达及对Ⅰ型IFN信号通路的作用
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作者 苗勤 吴香菊 +4 位作者 齐静 丛晓燕 李均同 王林 杜以军 《山东农业科学》 北大核心 2024年第2期144-150,共7页
本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用。根据GenBank序列合成3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR... 本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用。根据GenBank序列合成3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR、双酶切及测序鉴定正确后分别转染HEK-293T细胞和PK-15细胞,Western blotting及间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测3D蛋白在细胞内的表达及定位。通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)、Real-time PCR、TCID50等试验检测HEK-293T细胞中过表达3D蛋白对水疱性口炎病毒(Versicular stomatitis virus,VSV)诱导的Ⅰ型IFN信号通路的影响。结果显示,真核表达质粒pXJ41-Myc-3D构建成功;3D蛋白在HEK-293T细胞中表达,大小约为55 kDa,主要定位在细胞核中;3D蛋白抑制了VSV诱导的IFN-β启动子活性和IFN-β mRNA水平,促进了VSV的复制。本研究为深入探究3D蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D蛋白 真核表达 Ⅰ型ifn信号通路
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CVB对OL细胞和OL/BDV细胞I型IFN信号转导途径的影响
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作者 翟爱霞 颜冬梅 +4 位作者 王海萍 卜桐 崔乐乐 考文萍 张凤民 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第4期46-51,共6页
探讨柯萨奇病毒(coxsackievirus, CVB)对人类少突胶质细胞(oligodendrocyte, OL)和博尔纳病病毒(Borna disease virus, BDV)持续感染的OL细胞(OL/BDV)中I型干扰素(interferon, IFN)、microRNA-155(miR-155)表达以及干扰素调节因子(inter... 探讨柯萨奇病毒(coxsackievirus, CVB)对人类少突胶质细胞(oligodendrocyte, OL)和博尔纳病病毒(Borna disease virus, BDV)持续感染的OL细胞(OL/BDV)中I型干扰素(interferon, IFN)、microRNA-155(miR-155)表达以及干扰素调节因子(interferon regulatory factor, IRF)7细胞定位的影响。CVB感染OL细胞和OL/BDV细胞0、2、4、6、12和24 h,qPCR检测I型IFN mRNA和miR-155表达水平。OL细胞和OL/BDV细胞分别转染IRF7-EGFP质粒,CVB感染4 h,观察IRF7细胞定位情况。CVB感染OL细胞2、4、12和24 h,IFN-αmRNA和miR-155表达水平显著增加,IFN-βmRNA表达水平在4、12和24 h显著增加;CVB感染OL/BDV细胞IFN-α和IFN-βmRNA表达水平除0 h均显著增加,但miR-155表达仅在12和24 h显著增加。CVB感染OL细胞和OL/BDV细胞4 h,IRF7绿色荧光蛋白由细胞浆转移至细胞核内。综上所述,CVB可诱导OL细胞和OL/BDV细胞I型IFN、miR-155的表达,促进IRF7入核,从而激活I型IFN信号转导途径。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒 OL细胞 OL/BDV细胞 I型ifn信号转导途径 microRNA-155
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脑心肌炎病毒VP1蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路和促进病毒体外增殖 被引量:1
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作者 韩玉梅 谢晶莹 +2 位作者 毕英杰 许淑娟 冯若飞 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第1期18-26,共9页
脑心肌炎病毒是一种重要的人畜共患病病原,为了初步研究EMCV介导的天然免疫反应的分子机制,将VP1蛋白克隆至真核表达载体pCMV-HA,转染HEK293细胞后,使其在细胞内过表达,通过ELISA和实时荧光定量PCR检测VP1过表达对IFN-β表达和RLRs信号... 脑心肌炎病毒是一种重要的人畜共患病病原,为了初步研究EMCV介导的天然免疫反应的分子机制,将VP1蛋白克隆至真核表达载体pCMV-HA,转染HEK293细胞后,使其在细胞内过表达,通过ELISA和实时荧光定量PCR检测VP1过表达对IFN-β表达和RLRs信号通路相关因子,以及下游刺激基因表达的影响。结果表明,VP1蛋白可显著抑制IFN-β的表达。进一步研究发现,VP1可显著抑制EMCV引起的RLRs信号通路相关因子mRNA水平(P<0.01),并且随着VP1的表达,MAVS蛋白的表达明显减少,但对MDA5表达无影响。实验数据初步表明,VP1蛋白可以通过抑制MAVS的表达,进而抑制Ⅰ型IFN基因的表达并阻断其下游信号通路发挥作用。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 结构蛋白VP1 Ⅰ型ifn信号通路
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桂枝挥发油与桂皮醛对病毒性肺炎小鼠死亡保护作用及TLR/IFN信号机制研究 被引量:22
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作者 刘蓉 苟玲 +7 位作者 于柳 何婷 杨靖 王哲 龚锡平 汤奇 刘金伟 曾南 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期33-36,共4页
目的:观察桂枝挥发油、桂皮醛的抗甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)作用,探讨其TLR/IFN信号通路机制。方法:制备流感病毒性肺炎小鼠模型,观察药物对模型小鼠的死亡保护作用;ELISA法测定模型小鼠血清IFN-α、IFN-β水平,Real-Time PCR法测定... 目的:观察桂枝挥发油、桂皮醛的抗甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)作用,探讨其TLR/IFN信号通路机制。方法:制备流感病毒性肺炎小鼠模型,观察药物对模型小鼠的死亡保护作用;ELISA法测定模型小鼠血清IFN-α、IFN-β水平,Real-Time PCR法测定模型小鼠肺组织TLR7、MyD88、TRAF-6 mRNA的表达量。结果:桂枝挥发油0.348 mg/kg,桂皮醛0.264 mg/kg、0.132mg/kg治疗给药,及桂枝挥发油0.348 mg/kg预防给药,均能明显提高模型小鼠的死亡保护率。桂枝挥发油0.348 mg/kg显著提高模型小鼠血清IFN-α含量及肺组织TLR7 mRNA表达水平,桂皮醛0.264 mg/kg显著升高IFN-β含量。结论:桂枝挥发油、桂皮醛能提高流感病毒性肺炎小鼠的死亡保护率,表现出抗流感病毒作用,抗病毒作用机制与激活TLR7信号通路,促进IFN的分泌有关。 展开更多
关键词 桂枝挥发油 桂皮醛 甲型流感病毒A PR 8 34(H1N1) TLR ifn信号
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脑心肌炎病毒VP3蛋白抑制I型干扰素信号通路促进病毒体外增殖的研究
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作者 陈磊 侯正阳 +3 位作者 岳佳宇 闫祯芳 谢晶莹 冯若飞 《甘肃畜牧兽医》 2023年第3期89-94,共6页
天然免疫是抵抗病原微生物感染的第一道防线,为探究病毒蛋白在脑心肌炎病毒感染引起的天然免疫应答过程中的作用机制以及对病毒体外复制的影响,本研究应用分子生物学技术构建结构蛋白VP3的表达载体pCMV-Myc-VP3,转染HEK293细胞后,使其... 天然免疫是抵抗病原微生物感染的第一道防线,为探究病毒蛋白在脑心肌炎病毒感染引起的天然免疫应答过程中的作用机制以及对病毒体外复制的影响,本研究应用分子生物学技术构建结构蛋白VP3的表达载体pCMV-Myc-VP3,转染HEK293细胞后,使其在细胞内过表达;感染病毒后,通过实时荧光定量PCR和TCID50分别检测病毒的基因组拷贝数和病毒滴度,以此验证VP3蛋白表达对EMCV体外增殖的影响;另通过荧光定量PCR检测VP3过表达对EMCV引起的IFN-β和信号通路相关因子mRNA转录水平的影响。结果表明,VP3蛋白可促进EMCV在HEK293细胞内的增殖,初步探索发现VP3蛋白可显著抑制IFN-β的表达。WesternBlot检测发现体外表达VP3后,MAVS蛋白的表达明显减少,但对MDA5表达无影响。试验数据初步表明,VP3蛋白可以通过抑制MAVS的表达拮抗I型IFN信号通路的活化,进而促进病毒增殖。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 病毒蛋白VP3 I型ifn信号通路
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猪繁殖与呼吸综合征病毒通过阻碍STAT1/STAT2核转位抑制Ⅰ型干扰素的信号转导
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作者 Deendayal Patel 程晶 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第10期57-57,共1页
Ⅰ型干扰素(IFNs),IFN-α/β诱导抗病毒应答,在天然免疫抗病毒感染中起着重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抑制Ⅰ型干扰素的合成,但其是否抑制IFN的信号转导尚未明确。本研究结果发现PRRSV干扰IFN的信号转导通路。用PRRSV VR238... Ⅰ型干扰素(IFNs),IFN-α/β诱导抗病毒应答,在天然免疫抗病毒感染中起着重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抑制Ⅰ型干扰素的合成,但其是否抑制IFN的信号转导尚未明确。本研究结果发现PRRSV干扰IFN的信号转导通路。用PRRSV VR2385株感染MARC-145细胞,经IFN-α处理的感染细胞中,干扰素刺激基因ISG15和ISG56的转录、信号转导蛋白及转录激活因子(STAT)2水平均显著低于未经过IFN-α处理过的对照感染细胞。在PRRSV感染的细胞中,IFN诱导的STAT1和STAT2磷酸化及其异源二聚体的形成都未受影响,但大部分的STAT1/STAT2/IRF9的三聚体仍存在于PRRSV感染细胞的细胞质中,表明三聚体的核易位受到了阻碍。PRRSV VR2385感染的细胞中过度表达的NSP1β抑制了ISG15和ISG56的表达,并阻止STAT1的核转位,这些都表明NSP1β可能是抑制IFN信号转导的病毒蛋白。PRRSV感染的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)也抑制INF-α刺激的ISG基因和STAT2蛋白的表达。相反,已获批上市的的低致病性疫苗株Ingelvac PRRSV MLA感染PAMs,不需要添加外源的IFN就能活化包括趋化因子和抗病毒细胞因子等IFN诱导基因的表达,且检测不出其对IFN的信号转导产生影响。这些发现都说明PRRSV通过阻碍ISGF3的核转位阻止Ⅰ型干扰素的活化和信号转导通路。 展开更多
关键词 Ⅰ型干扰素信号转导抑制 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ifn ifn信号转导 MLV
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核苷(酸)类似物经治慢性乙型肝炎患者干扰素α治疗过程中细胞因子信号抑制因子3的表达与抗病毒疗效的关系 被引量:38
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作者 王永力 吴文煜 +4 位作者 尤洁 严伟明 罗小平 宁琴 韩梅芳 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期27-32,共6页
目的为探讨核苷(酸)类似物(NAs)经治慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者干扰素α治疗过程中部分患者应答不佳的分子机制,研究干扰素信号途径中负性调控因子细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)的表达与临床抗病毒疗效的关系。方法选取参加OSST研究... 目的为探讨核苷(酸)类似物(NAs)经治慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者干扰素α治疗过程中部分患者应答不佳的分子机制,研究干扰素信号途径中负性调控因子细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)的表达与临床抗病毒疗效的关系。方法选取参加OSST研究的54例CHB患者的外周血和配对肝组织样本,检测不同时间点(包括基线、12周、24周、36周及48周)HBsAg定量等,观察抗病毒疗效。同时采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学等方法检测外周血单个核细胞(PBMC)和配对肝组织(基线和48周)标本中的SOCS3的mRNA的表达水平。48周治疗结束时,出现HBsAg阴转或HBeAg血清学转换者被定义为应答组,反之为非应答组。用配对t检验比较正态分布变量;使用Mann-WhitneyU检验比较非正态分布变量组之间中位数的差异。结果在治疗48周后,聚乙二醇干扰素(Peg-IFN)组血清HBsAg水平持续下降(第48周平均下降1.14log10IU/ml,与基线相比P=0.001),而在恩替卡韦组在治疗期间几乎不变(第48周平均下降0.05log10IU/ml,与基线相比P=0.12)。Peg-IFNα-2a治疗过程中,非应答组外周血和肝组织中SOCS3的mRNA表达较应答组明显增高。肝组织免疫组织化学结果显示基线时非应答组SOCS3表达较应答组明显增强(P=0.027),在Peg-IFNα-2a治疗48周后,非应答组SOCS3的表达较基线和应答组明显增高(分别为P=0.003;P=0.012)。结论NAs经治CHB患者在干扰素α抗病毒治疗过程中,非应答组患者外周血单个核细胞以及肝组织中SOCS3的表达较应答组明显增强。推测SOCS3可能通过负性调控JAK-STAT信号通路,影响临床抗病毒疗效,部分揭示了干扰素抵抗的机制。 展开更多
关键词 肝炎 乙型 慢性 抗病毒治疗 ifn信号通路 SOCS3
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荆芥挥发油及其主要成分抗流感病毒作用与机制研究 被引量:73
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作者 何婷 汤奇 +6 位作者 曾南 苟玲 刘金伟 杨靖 于柳 王哲 龚锡平 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1772-1777,共6页
目的:体内、体外实验观察荆芥挥发油及主要成分薄荷酮、胡薄荷酮的抗甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)作用及其Toll样受体/干扰素(toll-like receptor/interferon,TLR/IFN)信号通路机制。方法:制备流感病毒性肺炎模型小鼠,以预防和治疗方式... 目的:体内、体外实验观察荆芥挥发油及主要成分薄荷酮、胡薄荷酮的抗甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)作用及其Toll样受体/干扰素(toll-like receptor/interferon,TLR/IFN)信号通路机制。方法:制备流感病毒性肺炎模型小鼠,以预防和治疗方式给药,测定模型动物肺组织病毒滴度以评价药物体内抗H1N1效应。ELISA法观察药物对模型小鼠血清干扰素-α(interferon-alpha,IFN-α),干扰素-β(interferon-beta,IFN-β),白介素-2(interleukin-2,IL-2),白介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)水平的影响及病毒感染狗肾传代细胞(Madin-Darby canine kidney cell,MDCK)上清液中IFN-β分泌水平的影响。实时荧光定量RT-PCR法观察药物对病毒感染MDCK细胞白介素1受体相关激酶-4(IL-1R-associated kinase-4,IRAK4)与Toll样受体3(toll-like receptor-3,TLR3)mRNA表达水平的影响。结果:体内实验表明,荆芥挥发油0.226 mg.kg-1、薄荷酮0.5 mg.kg-1及胡薄荷酮0.19 mg.kg-1治疗方式给药明显降低感染小鼠肺组织病毒滴度;荆芥挥发油0.226 mg.kg-1明显升高感染小鼠血清IFN-α,IL-2含量;薄荷酮0.5 mg.kg-1显著提高血清IFN-β含量。薄荷酮0.5 mg.kg-1、胡薄荷酮0.19 mg.kg-1明显降低病毒感染小鼠血清IL-6含量。荆芥挥发油0.452,0.226 mg.kg-1及胡薄荷酮0.19 mg.kg-1明显降低模型小鼠血清TNF-α含量。体外实验显示,荆芥挥发油0.1 g.L-1、胡薄荷酮0.1 g.L-1显著升高感染细胞上清液中IFN-β含量,并使细胞IRAK4 mRNA表达水平显著升高;薄荷酮0.25 g.L-1使感染细胞IRAK4 mRNA表达显著增强,但明显降低TLR3 mRNA表达。结论:荆芥挥发油、薄荷酮及胡薄荷酮治疗方式给药能显著降低病毒感染小鼠肺组织病毒滴度,显示出体内抗病毒作用,但预防给药效果不明显。体内抗病毒感染机制与提高感染小鼠干扰素(IFN-α,IFN-β),IL-2水平,抑制IL-6,TNF-α分泌有关;细胞模型结果提示药物通过TLR3和TLR7信号通路影响IFN-β的表达。 展开更多
关键词 荆芥挥发油 薄荷酮 胡薄荷酮 甲型流感病毒(H1N1) 病毒滴度 细胞因子 TLR ifn信号
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Roles of IκB kinase ε in the innate immune defense and beyond
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作者 Junjie Zhang Mao Tian +1 位作者 Zanxian Xia Pinghui Feng 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2016年第6期457-465,共9页
IκB kinase ε(IKKε) is a non-canonical IκB kinase that is extensively studied in the context of innate immune response. Recently, significant progress has been made in understanding the role of IKKεin interferon(I... IκB kinase ε(IKKε) is a non-canonical IκB kinase that is extensively studied in the context of innate immune response. Recently, significant progress has been made in understanding the role of IKKεin interferon(IFN) signaling. In addition to its roles in innate immunity, recent studies also demonstrate that IKKε is a key regulator of the adaptive immune response. Specifically, IKKεfunctions as a negative feedback kinase to curtail CD8 T cell response, implying that it can be a potential therapeutic target to boost antiviral and antitumor T cell immunity. In this review, we highlight the roles of IKKε in regulating IFN signaling and T cell immunity, and discuss a few imminent questions that remain to be answered. 展开更多
关键词 IB kinase (IKK ) 抗病毒的有免疫力的反应 ifn 信号 T 房间免疫
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