利多卡因对胰腺癌细胞PANC-1增殖、凋亡和STING/IRF3/IFN-β通路的影响

目的探讨利多卡因对胰腺癌细胞PANC-1增殖、凋亡和干扰素基因刺激因子(STING)/干扰素调节因子3(IRF3)/干扰素-β(IFN-β)通路的影响。方法体外培养PANC-1细胞,阴性对照组不干预,利多卡因低、中、高剂量组分别用20、40、80 mg/L利多卡因干预,阳性对照组用10 mg/L吉西他滨干预。采用CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖率和凋亡率,酶标仪检测细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IFN-β水平,荧光定量聚合酶链反应和蛋白印迹法检测细胞STING、IRF3、Akt和Caspase-3 mRNA及蛋白水平。结果与阴性对照组比较,利多卡因低、中、高剂量组及阳性对照组细胞增殖率、TNF-α水平、Akt mRNA和蛋白水平降低,细胞凋亡率、IFN-β水平及STING、IRF3、Caspase-3 mRNA和蛋白水平增加;利多卡因组随利多卡因剂量增加呈剂量效应关系,但利多卡因组效应未及阳性对照组(P<0.05)。结论利多卡因抑制PANC-1细胞增殖,促进PANC-1细胞凋亡,其机制可能与STING/IRF3/IFN-β通路的激活有关。

狂犬病病毒G蛋白的过表达及对病毒的抑制

【目的】探究G蛋白在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制中的作用,以揭示携带双G基因的重组RABV的Hep-dG与亲代毒株rHep-Flury在神经母细胞瘤(NA)细胞中滴度差异的原因,为RABV致病机制的研究奠定基础。【方法】通过病毒吸附、入侵、荧光定量PCR、Western-blot以及中和抗体阻断等试验,检测G蛋白过表达对IFN-β以及相关因子转录的影响。【结果】Hep-dG感染能显著上调NA细胞中IFN-βmRNA的表达,激活了下游因子STAT1的表达与磷酸化,在较低的感染复数(MOI=0.01)下,Hep-dG感染后24 h即可显著促进IFN-β基因的表达,36 h达到最高水平(P<0.001)。该病毒进入细胞后,产生了更多的病毒Leader RNA和RIG-I mRNA,且与IFN-βmRNA的表达高度一致。抗体阻断IFN-β后,Hep-dG在NA细胞中的病毒滴度显著上升(P<0.01),约为阻断前的7.9倍,且与亲代毒株rHep-Flury无显著差异。与阴性对照比较,5μg的pH-G质粒转染能刺激IFN-β的转录(P<0.05),表明真核表达RABV G蛋白能在一定程度上刺激IFN-β的转录。【结论】本研究初步揭示了G蛋白激活先天性免疫应答的原因和作用。RABV G蛋白的过表达,通过促进病毒Leader RNA的转录,激活了RIG-I介导的IFN-β通路,进而抑制了Hep-dG在NA细胞的繁殖。G蛋白的过表达也对干扰素通路起到一定的作用。