寻常型银屑病患者VEGF、IFN-y和S100A12的表达及与疾病活动性的相关性

目的分析寻常型银屑病患者血管内皮生长因子(VEGF)、干扰素-y(IFN-y)和S100A12的表达及与疾病活动性的相关性。方法选取2019年8月至2020年8月航空总医院收治的88例寻常型银屑病患者设为观察组,其中进行期31例,静止期28例,退行期29例,根据患者病情严重程度按照银屑病皮损面积及严重程度指数(PASI)积分法分为:轻度(<10分)36例、中重度(≥10分)52例。选取85例同期在本院行健康体检者作为对照组。比较不同人群中VEGF、IFN-y和S100A12的表达水平,并分析VEGF、IFN-y和S100A12与疾病活动性的相关性。结果观察组中VEGF、IFN-y和S100A12的表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度组中VEGF、IFN-y及S100A12表达水平明显低于中重度组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同时期寻常型银屑病患者VEGF、IFN-y和S100A12的表达水平:进行期>静止期>退行期,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,VEGF、IFN-y和S100A12与PASI评分均为正相关(r=0.511,r=0.675,r=0.431,P均<0.05)。结论VEGF、IFN-y和S100A12与寻常型银屑病发生、发展密切相关,监测三者水平变化可评估患者疾病严重程度。

斯氏狸殖吸虫感染大鼠致肝纤维化形成过程中IL-4和IFN-y表达及意义

目的探讨斯氏狸殖吸虫感染大鼠致肝纤维化形成过程中细胞因子IL-4和IFN-吖表达及意义，为阐明Th1／Th2在斯氏狸殖吸虫感染大鼠肝纤维化形成及调节作用提供实验依据。方法SD大鼠36只，随机分为正常对照组（n=6）、感染1周组、感染2周组、感染4周组、感染8周组、感染12周组和感染16周组。每鼠腹腔注射斯氏狸殖吸虫囊蚴15个。按感染时间处死各组大鼠，观测各项指标。HE染色和VG染色观察肝组织纤维化病理形态学变化。免疫组织化学法测定IL-4、IFN-y在大鼠肝纤维化形成过程中的表达动态变化。结果HE染色和VG染色肝组织病理形态学结果显示：随着感染时间的延长，胶原纤维面积比值（S／T）和肝纤维化评级在逐渐提高，肝组织纤维化的程度逐渐加重。免疫组织化学显示：IFN-y的表达阳性细胞百分率在1周至8周在逐渐增加，到第8周末时达到最大，在12周到16周又逐渐减少：而IL-4表达阳性细胞百分率在1周至16周在逐渐增加．到第12周末IL-4表达开始增加迅速。结论斯氏狸殖吸虫感染大鼠可引起肝脏纤维化病变，IL-4和IFN-y在斯氏狸殖吸虫感染大鼠致肝纤维化形成过程中表达增加，其纤维化病变程度与感染时间、IL-4和IFN～1的表达增加有关。提示Th1细胞分泌的细胞因子IFN-y和Th2细胞分泌的细胞因子IL-4在斯氏狸殖吸虫感染大鼠致肝纤维化的自发性免疫调节中起作用。

广西巴马小型猪IFN-Y基因的克隆和序列分析

将猪外周淋巴细胞进行体外培养 ,在刀豆球蛋白A(conA)刺激培养 1 5h后 ,提取培养淋巴细胞总RNA ,应用RT PCR技术扩增广西巴马小型猪Y 干扰素 (IFN Y)基因 ,并克隆到PMD1 8 T载体上 ,进行测序。测序结果表明 ,扩增的cDNA全长 558个碱基 ,包含 50 1个碱基开放阅读框架 ,编码 1 66个氨基酸 ,分子量为 1 9.42ku。此cDNA与人、牛、山羊、马、狗和鼠的IFN Y基因核苷酸比较 ,同源性分别为 74.9% ,86.5% ,86.9% ,81 % ,58.7%和 63 .3 % ,与其它猪种的IFN Y基因核苷酸比较同源性为 1 0 0 %。

急性髓细胞性白血病患者血清IL-12、IFN-Y及LDH的测定

目的 通过测定急性髓细胞性白血病(AML)患者血清IL-12、IFN-Y及LDH的变化,来探讨三者在AML的诊断、病情监测、疗效观察及预后判断中的意义.方法 采用酶联免疫(ELISA)法测定43例AML患者不同阶段血清白细胞介素-12(IL-12)、Y干扰素(IFN-Y)水平,全自动生化分析仪酶法测定乳酸脱氢酶(LDH)水平,并与正常对照比较.结果 初诊时IL-12、IFN-Y低于对照组(P<0.01,<0.05),LDH高于对照组(P<0.01);IL-12与IFN-Y呈显著正相关(r=0.498,P<0.01).完全缓解时IL-12和IFN-Y升高,LDH明显下降但仍高于对照组(P<0.01).复发时IL-12、IFN-Y再次减低,LDH再次升高,与CR组比较均有显著性差异(t,t=4.03～17.47,P<0.05),而与初诊组比较三者均无显著性差异;对化疗不敏感者,其血清IL-12、IFN-Y下降幅度及LDH升高的幅度明显高于化疗敏感者.各亚型之间IL-12、IFN-Y、LDH含量均无显著性差异(F=0.11440.530,P>0.05).结论 ①病人血清IL-12、IFN-Y、LDH与AML的发生、发展及预后密切相关.②血清IL-12、IFN-Y和LDH的监测时AML的早期复发及预后判断有一定帮助.③AML各亚型之间血清IL-12、IFN-Y和LDH的含量没有明显变化.

加味五痹汤(肺痹)干预流感病毒感染诱导RIG-I/IFN-I信号通路作用机制研究

目的:观察加味五痹汤(肺痹)对流感病毒(IV)感染的BALB/c小鼠肺组织病理炎症及诱导RIG-I/IFN-I信号通路的作用机制。方法:SPF级BALB/c小鼠24只,随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、加味五痹汤(肺痹)组(C组)、奥司他韦组(D组),除A组外,其余3组以IV FM1-6-E2滴鼻造模。于造模后第7天进行取材,镜下观察小鼠肺组织病理切片,采用qPCR法检测RIG-ImRNA的表达、ELISA法测定血清中IFN-α/β含量、Western-blot法检测NF-κB蛋白的表达。结果:IV感染后B组小鼠肺组织出现水肿、肺泡隔增厚与炎性细胞浸润,各治疗组肺部炎症有不同程度减轻。IV感染组小鼠肺组织内RIG-I的mRNA水平显著升高,与B组相比,C组RIG-I的mRNA表达量升高(P<0.05);感染组NF-κB蛋白表达增高,各治疗组可下调其表达;感染组血清中的IFN-α/β含量增高(P<0.05),治疗组能明显升高IFN-α/β含量(P<0.05),且C组与D组比较有差异性(P<0.05)。结论:加味五痹汤(肺痹)具有抗IV感染的作用,增加RIG-I和IFN-α/β含量及抑制NF-κB表达是其作用机制之一,且RIG-I/IFN-I可能是其信号通路的作用靶点。

肿瘤坏死因子受体相关因子3调控STING/IFN-I信号通路改善狼疮肾炎足细胞损伤的机制研究

目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子3(tumor necrosis factor receptor associated factor 3,TRAF3)对IgG诱导的人肾足细胞(human podocyte cell,HPC)凋亡和炎症的影响及机制。方法 体外培养HPC,用狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)患者的纯化IgG诱导HPC细胞24 h营造炎症环境,将细胞分为对照组、IgG-LN组、IgG-LN联合siRNA组、IgG-LN联合si-TRAF3组、IgGLN联合STING抑制剂H-151(1μmol/L)组、 IgG-LN联合si-TRAF3和STING激活剂ADUS100(10μmol/L)组。CCK-8实验用于检测HPC细胞活力;流式细胞术检测HPC细胞凋亡;RTPCR用于检测各组HPC细胞中IFN-α mRNA水平;ELISA法检测各组HPC细胞中IFN-α、IL-6、IL-1β和TNF-α分泌水平;Western Blot法检测TRAF3和STING蛋白的表达;Co-IP实验验证TRAF3和STING的相互作用。结果 TRAF3沉默抑制IgG诱导的HPC细胞凋亡和炎症因子分泌(P<0.01)。TRAF3通过与STING结合抑制IgG诱导的HPC细胞中STING/IFN-I通路活化(P<0.01)。STING/IFN-I通路抑制改善IgG诱导的HPC细胞凋亡和炎症因子分泌(P<0.01)。STING/IFN-I通路活化可逆转TRAF3沉默对HPC细胞凋亡和炎症的缓解作用。结论 TRAF3沉默可抑制STING/IFN-I活化改善LN患者血清IgG诱导的HPC细胞凋亡和炎症反应。

生理状态下外周血白细胞干扰素、白细胞介素2、白细胞介素4和白细胞介素10基因表达的荧光定量PCR检测

目的:建立干扰素-γ(IFN-γ),白细胞介素-2(IL-2),白细胞介素-4(IL-4),白细胞介素-10(IL-10)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员生理状态下外周血白细胞IFNγ-、IL-2、IL-4和IL-10 mRNA的表达。结果:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞IFNγ-、IL-2、IL-4和IL-10的mRNA表达进行定量分析,相关系数r>0.99。结论:从分子水平为检测运动过程中细胞因子的改变、评估运动员免疫机能状态提供了简易和准确的检测手段。

液态芯片技术联合检测IFN-γ和IP-10诊断结核性胸腔积液

目的应用液态芯片技术联合检测胸腔积液中干扰素（IFN）-y IFN-y诱导蛋白（IP）-10水平，探讨其在临床快速诊断及鉴别诊断结核性胸腔积液中的应用价值。方法选取渗透性胸腔积液患者，其中结核性胸腔积液组52例；恶性胸腔积液组38例。利用结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT．TB）测定其对结核杆菌反应的效应T细胞数量，即斑点形成细胞数（SFCs），同时利用液态芯片技术测定其IFN-y和IP-10水平，通过Logistic逐步回归法评估IFN-y和IP-10联合诊断时的价值，并比较两种诊断方法的价值。结果T-SPOT．TB法诊断结核性胸腔积液的灵敏度为90．38％，特异度为84．21％，ROC曲线下面积（AUC）及95％CI为0．938（0．867～0．978）；IFN-y、IP－10联合诊断结核性胸腔积液时的灵敏度为98．08％，特异度为97．37％，AUC及95％CI为0．995（0．951～1．000）。2种诊断方法灵敏度和特异度的差异不明显；2种方法诊断一致性良好（Kappa=0．703）；方法间AUC比较差异有统计学意义（z=1．996，P〈0．05），检测IFN-y IP－10水平联合诊断时AUC较大（AUC=0．995）。结论利用液态芯片技术同时检测IFN-y、IP-10水平联合诊断结核性胸腔积液满足了临床快速、准确诊断及鉴别诊断结核性胸腔积液的需要。

IFN-γ在大鼠海马内的免疫组化定位

应用免疫组织化学SP法结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵呈色法研究IFN-γ免疫反应性产物在大鼠海马内的分布。结果表明,IFN-γ免疫反应主要分布于海马CA1、CA2、CA3区,有少量分布于灰被,齿状回。这为海马具有免疫调节功能的观点提供了新的证据。结合文献,推断IFN-γ在海马-下丘脑-垂体-肾上腺的免疫调控中起主要作用。

PvMSP1-19重组蛋白体外对间日疟患者外周血T细胞免疫功能的影响

目的探讨PvMSP1-19重组蛋白对间日疟既往感染者外周血T淋巴细胞功能的影响。方法间日疟既往感染者外周血单个核细胞(PBMC),在体外分别以PvMSP1-19重组蛋白和IL-2(刺激组)及IL-2(未刺激组)培养,培养第7d时刺激组细胞再用PvMSP1-19重组蛋白刺激24h,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群分泌IL-4和IFN-γ的情况;并以CFSE标记法检测T淋巴细胞的增殖反应。结果在分泌IL-4的淋巴细胞中,CD8+T细胞所占的比例刺激组(8.04%)明显高于未刺激组(3.46%);而分泌IFN-(的CD8+T细胞在刺激组(0.82%)与未刺激组(1.05%)间并无显著性差别。分泌IL-4和IFN-(的CD4+T细胞比例在刺激组(1.81%,0.19%)与未刺激组(1.89%,0.05%)间并无显著性差异。此外,CD8+T细胞的增殖指数刺激组(5.65%)也明显高于未刺激组(3.69%)。结论 PvMSP1-19重组蛋白能显著诱导间日疟既往感染者外周血CD8+T细胞增殖和优先分泌IL-4。

不同肝癌细胞系对IFN-γ治疗的敏感性

目的研究不同肝癌细胞对干扰素(IFN-γ)的敏感性是否存在差异。方法定量RT-PCR检测9种肝癌细胞系的IFN-γ受体表达,并通过比较IFN-γ处理前后HepG2、SNU182、SNU449和PLC4种细胞的周期变化和细胞凋亡情况,判定不同HCC细胞系对IFN-γ的敏感性差异。结果 HepG2、SNU449细胞IFN-γ受体IFNGR1表达低于正常肝组织(<0.5),Huh-7的IFNGR1和IFNGR2的表达均低于正常肝组织(<0.5)。IFN-γ能够诱导HepG2、SNU182和SNU449细胞凋亡,并能阻滞HepG2细胞的G1期向S期的细胞周期转换,SNU182细胞的G2/M期转换,但对PLC细胞生长抑制作用不明显。结论 IFN-γ可通过促进细胞凋亡和细胞周期阻滞抑制肝癌细胞生长,不同的肝癌细胞对IFN-γ敏感性存在差异,提示临床应用IFN-γ进行肝癌治疗时应考虑个体化差异。

窄谱中波紫外线对特应性皮炎患者外周血Th1/Th2表达失衡的影响

65例特应性皮炎(AD)患者使用NB-UVB照射治疗,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测光疗前后血清IFN-γ、IL-12、II-4及IL-13的含量,并对其临床疗效进行评价。同时选30名健康查体者作为正常对照组。AD患者血清IL-4和IL-13水平显著高于正常对照组(P<0.05);IFN-γ略高于正常对照组(P>0.05);IL-12略低于正常对照组(P>0.05)。NB-UVB治疗后血清IL-4和IL-13水平降低,与治疗前相比均有显著性差异(P<0.05);IFN-γ和IL-12水平略降低,与治疗前相比无显著性差异(P>0.05)。NB-UVB照射可下调外周血IL-4及IL-13水平,从而使Th1/Th2表达趋于平衡,这可能是NB-UVB治疗特应性皮炎的机制之一。

初次治疗的肺结核患者血清IL-17检测及意义

目的研究Th17细胞相关因子IL-17在肺结核发病机制中的作用。方法用ELISA法分别测定初治涂阳肺结核患者治疗前组（22例）、治疗1个月组（18例）、治疗6个月组（16例）的IL-17、IFN-y和IL-4水平。以20例健康志愿者为正常对照组。统计分析比较各组间细胞因子水平的差异及相互相关性。结果IL-17、lL-4水平，治疗前组高于治疗1个月组、治疗6个月组及正常对照组（均P〈0．05）；治疗1个月组高于治疗6个月组及正常对照组（均P〈0．05）；而IFN-1水平与前两者恰恰相反。治疗6个月组与正常对照组三者水平差异均无统计学意义（均P〉0．05）。各组中IL-17水平与IFN-y、IL-4水平均无相关性（P〉0．05）。结论人体感染结核杆菌后，IL-17增高。经过抗结核治疗，IL-17水平逐渐降低。提示IL-17在肺结核发病机制中可能起着非常重要的作用。

泼尼松对结核性胸膜炎ADA及细胞因子IL-6和IFN-γ的影响

目的:观察泼尼松对结核性胸膜炎患者胸腔积液腺苷脱氢酶(ADA)及细胞因子IL-6和IFN-γ表达水平及疗效的影响。方法:随机将40例结核性胸膜炎患者分为激素治疗组和常规治疗组,两组均接受常规抗结核化学治疗,激素治疗组加用泼尼松30 mg/d,连用7d。分别于治疗前和治疗7、14d采用ELISA法测定患者胸腔积液中IL-6和IFN-γ表达水平,酶比色法测定ADA水平。结果:40例患者经治疗后胸腔积液ADA、IL-6和IFN-γ水平均有不同程度的降低,激素组降低程度均大于常规组(P<0.05)。治疗6个月后,激素组完全有效13例、部分有效5例、无效2例;常规组完全有效10例、部分有效7例、无效3例;激素组疗效好于常规组(P<0.05)。常规组胸膜厚度为(1.43±0.20)mm,粘连7例;激素组胸膜厚度为(1.09±0.13)mm,粘连2例;两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:早期增加激素治疗能有效降低结核性胸膜炎患者IL-6、IFN-γ、ADA水平,治疗效果满意。

毛细支气管炎患儿血清IL-18、IFN-γ水平变化及临床意义

目的:探讨毛细支气管炎患儿血清细胞免疫因子IL-18、IFN-γ水平及其与病情严重程度的相关性。方法:(1)采用ELISA方法,检测68例毛细支气管炎患儿治疗前、后和随访2个月时的血清IL-18、IFN-γ水平变化;(2)将68例毛细支气管炎患儿按呼吸困难评分,分成轻度、中度和重度,采用ELISA方法检测各组患儿血清IL-18、IFN-γ水平变化。结果:(1)观察组患儿治疗前血清IFN-γ、IL-18水平明显低于对照组(P均<0.01),治疗后其水平升高,显著高于观察组治疗前,但仍低于对照组(P均<0.01);随诊2个月后,IL-18、IFN-γ水平接近对照组。(2)轻度毛细支气管炎患儿血清IL-18、IFN-γ水平与中度组比较差异无统计学意义(P>0.05),而明显高于重度组(P<0.01)。(3)治疗前毛细支气管炎血清IFN-γ水平与IL-18水平成正相关(r=0.58,P<0.01)。结论:毛细支气管炎患儿血清IL-18、IFN-γ水平均下降,并与病情严重程度有关。

涂阳活动性肺结核患者HRCT评分与细菌学及免疫学相关性分析

目的探讨HRCT评分标准在诊断活动性肺结核中的应用价值。方法对42例痰涂阳性肺结核患者,进行HRCT检查和评分,每侧肺组织划分为为三个区域,分别对各类型CT征象所累及范围进行评分;分析评分结果与痰细菌学检查结果和外周血结核菌特异性IFN-γ水平之间的相关性。结果根据结核菌涂片结果分为4组,其中,AFB(+)12例、AFB(++)11例、AFB(+++)10例、AFB(++++)9例,相关性分析显示(1)HRCT总评分与痰阳性分级有正相关性(r=0.9661P<0.0001);(2)HRCT总评分与结核菌抗原ESAT6、P4-6、P8.10特异性IFN-γ释放水平均呈正相关(r=0.4805,P=0.0017,r=0.4451,P=0.0083,r=0.4211,P=0.0131)。结论以活动性肺结核患者复杂的CT征象的范围为基础的HRCT评分标准与细菌学及免疫学均呈正相关,表明该HRCT评分标准对临床诊断治疗和疗效判定具有一定指导意义。

黄芪多糖对甲流HA2蛋白真核表达载体免疫效果影响的研究

目的:检验不同剂量黄芪多糖对甲流HA2蛋白真核表达质粒免疫大鼠效果的影响。方法:首先,将编码HA2的质粒p HA2/EGFP转染CHO细胞,通过PT-PCR和荧光检验其在真核细胞中的表达效果。然后将60只大鼠随机分为6组,分别注射p EGFP-N1、生理盐水和p HA2/EGFP加不同浓度的黄芪多糖,注射前收集大鼠血清作为对照,据最后一次注射后第36天处死各组大鼠收集各组大鼠的血清,测量血清中细胞因子IFN-γ、IL-4和血清中Ig G对不同流感毒株血凝素的反应情况。结果:p HA2/EGFP+中等剂量APS组的IFN-γ、IL-4和血清中Ig G对血凝素的反应情况均与低剂量组和阴性对照组有显著性差异(P<0.05)。p HA2/EGFP+中等剂量APS组的细胞因子水平和对血凝素反应与高剂量组无显著性差别(P>0.05)。结论:中等剂量的黄芪多糖能增强甲流HA2蛋白真核表达质粒的免疫效果。

斜带石斑鱼IFN-γ基因的克隆与表达分析

IFN-γ在天然免疫和适应性免疫应答中均发挥着重要的作用。由于低等脊椎动物IFN-γ与哺乳动物IFN-γ相似性非常低,硬骨鱼类的IFN-γ近年来才得到鉴定。本研究报道了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的IFN-γ基因,并对其表达进行了分析。斜带石斑鱼IFN-γcDNA全长为867 bp,编码200个氨基酸。其基因组全长为5 104 bp,由4个外显子、3个内含子组成。氨基酸序列比对显示斜带石斑鱼IFN-γ与高等脊椎动物IFN-γ的序列相似性较低,仅为32.5%～39%,与其他硬骨鱼类的IFN-γ相似性为38.0%～68.5%。序列分析结果显示,斜带石斑鱼IFN-γ分子C末端中存在IFN-γ的特征序列以及核定位基序。二级结构分析结果显示斜带石斑鱼IFN-γ序列中包含6个α螺旋结构,其排列与高等脊椎动物的IFN-γ类似。应用荧光定量PCR检测了IFN-γ基因在Poly I:C诱导后的表达变化。发现在肾、脾、鳃、头肾、皮肤和胸腺组织中,Poly I:C能显著诱导IFN-γ的表达,在胸腺中上调倍数最高,其次为头肾、脾、肾、皮肤和鳃,而在脑和心脏组织中没有显著变化。据此推测,IFN-γ在斜带石斑鱼抵抗病毒感染的过程中起有十分重要的作用。

新城疫病毒7793株对结肠癌小鼠肝转移的抑制效果及其可能的机制

目的:以脾脏保留法建立结肠癌小鼠肝转移模型,评价新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)7793株对小鼠结肠癌肝转移的抑制效果,并初步探讨NDV抑瘤的免疫激活机制。方法:经脾注入1×107/ml小鼠结肠癌细胞CT26的单细胞悬液0.1 ml,建立结肠癌CT26小鼠肝脏转移瘤模型;建模小鼠随机分3组(每组20只):PBS阴性对照组、NDV7793给药组和5-FU给药组,于建模当天起连续5 d经腹腔分别注射PBS(0.1 ml/d)、NDV7793(512 HU/kg)和5-FU(20 mg/kg)。观察各组小鼠的生存状态,分析肝脏成瘤情况,计算抑瘤率和胸腺指数。ELISA法检测模型小鼠肝脏的IFN-γ水平。结果:成功构建小鼠结肠癌肝转移模型。NDV7793给药组小鼠未观察到明显的不良反应,生活状态好于PBS组和5-FU组。NDV7793组和5-FU组小鼠的肝转移瘤数量较PBS组均显著减少[(20.40±5.20)、(205.50±19.21)vs(265.30±35.73)个,均P<0.01],NDV7793组的抑瘤率明显高于5-FU组(75.4%vs 48.0%,P<0.05),NDV7793组小鼠的肝脏癌灶范围小,癌细胞以坏死或凋亡为主。NDV7793组和5-FU组小鼠的中位生存期明显长于PBS阴性对照组(30、22 vs 17 d,P<0.01)。NDV7793组小鼠肝脏IFN-γ的表达和胸腺指数均显著高于5-FU组和PBS组(均P<0.05)。结论:NDV7793株对结肠癌小鼠的肝转移具有较强的抑制效果,并可能通过上调肝脏的IFN-γ以及提升胸腺指数来抑制结肠癌的肝转移。