化学分子伴侣对重组绵羊IFN-tau在大肠埃希菌中可溶性蛋白表达的影响

为探索化学分子伴侣对重组绵羊胚胎干扰素(roIFN-tau)在大肠埃希菌中可溶性蛋白表达的影响,以oIFN-tau cDNA为模板PCR法扩增oIFN-tau成熟肽基因后,扩增产物和pBV221表达载体分别用EcoRⅠ和BamHⅠ限制性内切酶双酶切、连接,构建表达载体,并进行双酶切和测序鉴定。用不同浓度的化学分子伴侣(甘油、葡萄糖、β-环糊精、蔗糖、D-甘露醇、二甲基亚枫、乙醇)于42℃诱导阳性重组菌表达4 h,分别取E.coli上清和沉淀做SDS-PAGE分析。SDS-PAGE分析结果表明,甘油、葡萄糖、β-环糊精、蔗糖、二甲基亚砜对oIFN-tau的表达形式没有影响,而D-甘露醇和乙醇增加了oIFN-tau的可溶性表达,为进一步的功能研究奠定了基础。

九龙牦牛IFN-tau基因的克隆测序及聚类分析

研究旨在分析九龙牦牛的干扰素-τ(IFN-tau)基因与其他属种的差异.利用PCR对九龙牦牛的IFN-tau进行克隆并测序,并将该基因的氨基酸序列与其他属种进行聚类分析.结果表明:利用基因组DNA扩增得到的九龙牦牛IFN-tau基因为588bp,与普通牛有98.25%以上的相似度.通过系统发育分析,大额牛、亚洲水牛为一支,山羊、绵羊为一支,美洲野牛、欧洲牛、九龙牦牛为一支,林麝单独为一支.

羊干扰素Tau基因克隆与序列分析

本文应用 PCR扩增技术 ,以国外已发表羊干扰素 Tau(IFN- τ)基因序列为基础设计引物 ,在国内首次从北京绵羊、南江黄羊这两种国产羊的血液中分别扩增出 IFN- τ基因 ,并将 IFN- τ基因插入 PQE- 30载体构建重组质粒 ,经 PCR鉴定及 Sph 、H ind 双酶切鉴定证实为羊 IFN- τ基因的重组质粒。重组表达质粒测序结果表明 IFN- τ(p3)基因全长 5 16 bp,编码 172个氨基酸。实验发现 ,从北京绵羊、南江黄羊扩增出来的 IFN- τ基因序列与已发表的序列相比 ,其碱基同源性分别为 96 .3%、99.0 4 % ,氨基酸同源性分别为 :92 .4 %、97.1%。

荷斯坦奶牛干扰素tau基因的克隆表达及生物活性分析

为了研究荷斯坦奶牛干扰素tau(IFN-tau)的生物学活性,从外周血淋巴细胞克隆得到BoIFNtau基因,并进行进化分析。诱导重组质粒pET/BoIFN-tau在大肠埃希菌BL21中进行表达,获得分子质量为23ku的重组蛋白BoIFN-tau。纯化后的重组蛋白BoIFN-tau用MDBK/VSV系统检测其抗病毒活性为1.09×105 IU/mL;半定量PCR法检测发现BoIFN-tau诱导产生的Mx-1和OAS表达量增加。结果表明获得了具有抗病毒活性的重组BoIFN-tau蛋白。