中华鳖IGF2和IGF2R基因克隆及其功能研究

【目的】探索胰岛素样生长因子2基因(IGF2)和胰岛素样生长因子2受体基因(IGF2R)在中华鳖生长过程中发挥的作用,为揭示IGFs系统在中华鳖异速生长及两性生长差异中的作用机制打下基础。【方法】采用RACE克隆中华鳖IGF2和IGF2R基因c DNA序列,利用BioEdit、ExPASy、TMHMM Server v2.0、SignalP及SMART等在线软件进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR分析IGF2和IGF2R基因在雌雄中华鳖不同组织、不同表型及不同性类固醇激素处理下的表达变化。【结果】中华鳖IGF2基因cDNA序列全长1180 bp,共编码222个氨基酸残基;IGF2蛋白相对分子量为24.84 kD,理论等电点(pI)为9.00,属于跨膜蛋白,含有1个IIGF结构域。中华鳖IGF2R基因cDNA序列全长8765bp,共编码2443个氨基酸残基;IGF2R蛋白相对分子量为271.92kD,pI为5.64,属于跨膜蛋白,含有14个重复的CIMR结构域和1个FN2结构域。基于IGF2和IGF2R氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树均显示,中华鳖与龟鳖类的亲缘关系最近,与鱼类和两栖动物的亲缘关系相对较远。IGF2和IGF2R基因在中华鳖体内具有广泛的组织表达谱,IGF2基因在精巢中的相对表达量显著高于卵巢(P<0.05,下同),IGF2R基因则恰好相反。IGF2基因在成年中华鳖生长快个体肝脏中的相对表达量显著高于生长慢个体,IGF2R基因的表达模式则相反。在雌二醇(E2)处理下,除雌性中华鳖肝脏中的IGF2R基因相对表达量在注射6 h时显著升高外,IGF2和IGF2R基因在雌雄个体肝脏中的相对表达量整体上呈下降趋势;MT处理对雄性个体肝脏中IGF2基因的表达无显著影响(P>0.05),但在注射48 h后显著提高雌性个体肝脏中的IGF2基因相对表达量,且显著下调雌性中华鳖肝脏中的IGF2R基因相对表达量。【结论】IGF2和IGF2R基因参与调控中华鳖性腺的发育及成熟,且IGF2R可能通过内化降解IGF2而对中华鳖的生长起负调控作用。此外,IGF2和IGF2R基因会通过下调表达量来响应外源激素的刺激,进而实现对中华鳖生长的调控。

LINC01503通过miR-342-3p/IGF2R轴促进上皮性卵巢癌的进展

目的:探讨LINC01503在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达水平和生物学功能及其可能的作用机制。方法:收集2015年5月至2016年5月间在河北医科大学第四医院妇瘤科手术切除并经病理学确诊的85例EOC患者的肿瘤组织和输卵管组织。常规培养人EOC细胞A2780、SKOV3、OVCAR3和OV90及正常人卵巢上皮细胞IOSE80,将si-LINC01503、si-NC及miR-342-3p mimic、miR mimic NC分别转染至SKOV3和A2780细胞,分别作为si-LINC01503组、si-NC组、miR-342-3p mimic组和miR mimic NC组。q PCR法检测EOC组织和细胞中LINC01503的表达水平,Kaplan-Meier法分析LINC01503表达水平与患者生存的关系。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01503/miR-342-3p/IGF2R轴相关分子间的靶向关系。平板克隆、划痕愈合和Transwell实验分别检测敲低LINC01503及转染miR-342-3p mimic对A2780和SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。WB法检测EOC细胞中LINC01503/miR-342-3p通路对IGF2R蛋白表达的影响。构建A2780细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲低LINC01503对移植瘤生长的影响。结果:EOC组织和细胞中LINC01503表达水平分别显著高于输卵管组织和IOSE80细胞(均P<0.01),LINC01503高表达组患者术后PFS和OS均显著短于LINC01503低表达组患者(均P<0.01)。敲低LINC01503、转染miR-342-3p mimic均可抑制EOC细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。敲低LINC01503可下调IGF2R的表达(P<0.01),这一现象可通过转染miR-342-3p inhibitor挽救。敲低LINC01503可抑制A2780细胞裸鼠移植瘤的生长(P<0.01)。结论:在EOC组织和细胞中呈高表达的LINC01503与患者的不良预后密切相关,LINC01503可能通过吸附miR-342-3p影响IGF2R表达进而促进EOC的进展。

GPER抑制IGF2R表达介导缺血性脑卒中的抗炎作用

目的:探讨缺血性脑卒中(IS)的潜在治疗靶标及分子机制。方法:识别GSE16561和GSE22255数据中IS和对照之间的差异表达基因中的免疫相关基因,并进行富集分析。利用随机森林算法对基因进行重要性排序,并评价核心基因的诊断能力。鉴定IS中免疫细胞水平并与核心基因进行相关性分析。在IS和对照的外周血样本中验证关键基因和免疫细胞的水平。此外,在建立的大鼠IS模型中评价G蛋白偶联受体家族(GPER)的治疗作用及调控机制。结果:共鉴定了59个免疫相关的差异表达基因,显著参与MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路。选择重要性排序前10的基因作为核心基因,并发现胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)的诊断能力最高。IGF2R与中性粒细胞的相关性最大。分子实验验证了IGF2R和中性粒细胞在IS患者中显著升高。GPER治疗明显改善了大鼠缺血性脑卒中,并降低了模型大鼠中IGF2R的表达。结论:GPER对IS的治疗作用可能与降低IGF2R的表达有关。

IGF2R基因多态性与结直肠癌和肝癌遗传易感性的相关性研究

目的:探讨IGF2R基因第2020密码子多态(Asn2020Ser)与结直肠癌(CRC)和肝细胞癌(HCC)遗传易感性的关系。方法:采用TaqMan方法检测345例CRC与670名对照以及469例HCC与558名对照的IGF2R Asn2020Ser基因型分布及差异。结果:IGF2R Asn2020Ser基因型分布在CRC-对照和HCC-对照人群间均有显著性差异(P<0.05)。与Asn/Asn基因型相比,Asn/Ser、Ser/Ser和Ser携带者(Asn/Ser和Ser/Ser基因型)的CRC风险分别显著降至0.71倍(95%CI=0.54～0.94,P=0.017)、0.64倍(95%CI=0.42～0.97,P=0.036)和0.69倍(95%CI=0.53～0.90,P=0.008)。类似的,Asn/Ser、Ser/Ser和Ser携带者的HCC风险分别降至0.68倍(95%CI=0.52～0.89,P=0.005)、0.78倍(95%CI=0.52～1.16,P=0.212)和0.70倍(95%CI=0.54～0.90,P=0.006)。结论:IGF2R 2020Ser携带可能对中国人群罹患CRC和HCC具有保护作用。

猪IGF2R基因多态性及其遗传印记

【目的】在猪IGF2R基因的外显子内寻找SNP,以SNP为遗传标记研究IGF2R基因的印记表达特征。【方法】选取3个品种243头瘦肉型商品猪为试验材料,以IGF2R基因为候选基因,通过PCR-SSCP对IGF2R基因多态性进行检测;选取IGF2R基因外显子48的SNP杂合子仔猪3头和成年猪1头,对脑、心脏、肝脏、脾、肾、肺、胃、胰、胸腺、膀胱、肌肉、舌、胎盘的组织器官mRNA产物分别进行RT-PCR-RFLP电泳和RT-PCR-SSCP电泳。【结果】IGF2R基因外显子48中有一个单核苷酸多态性位点,384位碱基由G突变为A,该位点为NspⅠ酶切位点;IGF2R的外显子48在3头仔猪和1头成年猪的主要组织器官仅表达母亲来源的等位基因。【结论】猪IGF2R基因呈母方表达、父方印记的遗传特征。

沉默IGF2R促进膀胱癌5637细胞增殖及肿瘤形成的机制探讨

目的:研究IGF2R在膀胱癌5637细胞中的功能。方法:应用Real-Time PCR和Western blot的方法检测膀胱癌组织及癌旁正常膀胱黏膜组织中IGF2R的表达水平。应用免疫荧光方法研究IGF2R在膀胱癌5637细胞中的定位情况。通过MTT法及体内裸鼠移植瘤的方法检测IGF2R对细胞增殖的影响。Western blot方法研究分子机制。结果:IGF2R在膀胱癌组织中呈现低表达(P<0.05)。体外及体内实验证明,沉默IGF2R表达可以促进膀胱癌5637细胞增殖(P<0.05),并且敲减IGF2R后我们观察到了磷酸化AKT水平的增高。结论:IGF2R在膀胱癌发生、发展过程中起到一个抑癌基因的作用。下调IGF2R可能通过激活AKT信号通路促进肿瘤细胞增殖。

IGF2R基因多态性与胃癌易感性的相关性

目的 探讨IGF2R基因多态性与胃癌易感性的关系.方法 提取华北地区105例胃癌患者及235例健康查体者外周血基因组DNA,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reation-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP）方法检测IGF2R codon 901和codon 2020位点的基因型分布及差异.结果病例组codon 2020基因型AG、GG的分布频率显著低于对照组,且携基因型AG、GG者胃癌发病风险分别是携AA者的0.65倍（95% CI：0.38~0.89,P＜0.05）和0.72倍（95% CI：0.45~0.91,P＜0.05）.将AG、GG基因型合并计算,则其胃癌发病风险是AA基因型的0.68倍（95% CI：0.45~0.91,P＜0.05）.Codon 901多态性在两组间分布差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 IGF2R基因codon 2020位点多态性可能对中国人群罹患胃癌具有保护作用.

Igf2r及Mest印迹基因在供核细胞中的表达及意义

目的:探讨细胞传代培养对胰岛素样生长因子Ⅱ受体(insulin-like growth factor Ⅱ receptor,Igf2r)和Mest基因表达的影响,以及它们在不同部位来源的成纤维样细胞(fibroblast-like cells)中的表达。方法:利用实时定量PCR法检测印迹基因Igf2r和Mest在来源于鼠耳和尾尖的成纤维样细胞中的表达。结果:在鼠尾成纤维样细胞的传代培养中,随着培养代数的增加,Igf2r的表达减弱,Mest的表达无明显变化;Igf2r在鼠尾成纤维样细胞中的表达高于鼠耳。结论:传代培养影响Igf2r基因的表达,Igf2r在不同部位来源的成纤维样细胞中的表达具有差异,为供核细胞的选择及后续的基因印迹研究奠定了基础。

印记基因Igf2r和RB-1在代谢综合征不孕患者子宫内膜表达水平的研究

目的:研究印记基因Igf2r和RB-1在代谢综合征(MS)不孕患者子宫内膜的表达。方法:选择2011年7月至2011年12月因不孕症来我院生殖中心就诊的MS患者11例作为实验组,代谢正常女性15例作为对照组,收集分泌期的子宫内膜组织,采用实时定量聚合酶链反应方法(RT-PCR)测定子宫内膜组织Igf2r和RB-1的表达水平。结果:Igf2r和RB-1在MS患者和代谢正常妇女子宫内膜中均有表达,与正常女性相比较,MS患者子宫内膜Igf2r表达水平下降(P = 0.0051),RB-1表达水平升高(P = 0.0364),具有显著性差异。结论:MS不孕患者子宫内膜组织印记基因Igf2r表达水平明显下降,RB-1表达水平明显升高,两者可能影响MS患者的子宫内膜容受性。

海南黄牛IGF2R基因单核苷酸多态性及其生物信息学分析

【目的】明确海南黄牛胰岛素样生长因子2受体基因(IGF2R)遗传多态性及其在海南黄牛群体中的遗传分布情况,为进一步揭示IGF2R基因对海南黄牛生长性状的调控机理提供理论依据,也为分子标记辅助选择提供新的候选位点。【方法】构建海南黄牛DNA混池,通过PCR扩增和测序技术对海南黄牛IGF2R基因编码区(CDS)进行基因多态性分析,并以Chromas序列比对筛选出错义突变SNP位点;应用PCR-RFLP对202头海南黄牛个体进行基因型鉴定,同时对筛选到的SNP位点进行连锁不平衡及单倍型分析,评估海南黄牛群体中各单倍型的分布情况;通过生物信息学方法分析各单倍型和SNP位点对海南黄牛IGF2R基因CDS区mRNA二级结构、蛋白理化性质及蛋白二级结构的影响。【结果】在海南黄牛IGF2R基因CDS区共检测到4个错义突变SNPs位点,分别为SNP1(g.63977A>G)、SNP2(g.63999T>C)、SNP3(g.69772G>A)和SNP4(g.94987A>C),其中SNP1、SNP2和SNP3位点间呈强连锁不平衡状态。4个SNPs位点在海南黄牛群体中均表现为中度多态性,且处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。海南黄牛群体中存在4种单倍型(F>0.01),分别是H1(ATG)、H2(GCA)、H3(ACA)和H4(GCG);各单倍型及SNP4突变型对海南黄牛IGF2R基因CDS区mRNA二级结构及其最小自由能均有影响。海南黄牛IGF2R蛋白为亲水蛋白,存在跨膜结构和信号肽,其二级结构主要由无规则卷曲和延伸链构成,α-螺旋和β-转角的占比较小。【结论】在海南黄牛IGF2R基因CDS区共检测到4个错义突变SNPs位点,在海南黄牛群体中均表现为中度多态性,且处于Hardy-Weinberg平衡状态。海南黄牛IGF2R基因SNP位点突变对其mRNA二级结构及稳定性均会造成影响,致使IGF2R蛋白二级结构肽链构象发生改变,进而对海南黄牛生长性状的调控造成影响。

印迹基因Igf2r的甲基化进程与兔卵母细胞直径关系的研究

本研究以3～4月龄兔为研究对象,收集卵母细胞,按直径将其划分为75～95μm、95～105μm、105～115μm3个组,通过亚硫酸盐测序法检测了印迹基因Igf2r的甲基化程度,并运用RT-PCR对Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、Dnmt3l、Lsh的表达量进行检测。结果表明,在3组卵母细胞内,Igf2r的甲基化比率依次为15.7%、60%、91.5%,甲基化程度随卵母细胞直径的增加而不断提高。

采用dCas9-SunTag-DNMT3A技术调控玻璃化冷冻牛卵母细胞IVF囊胚中IGF2R基因甲基化水平

旨在探究dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统对玻璃化冷冻牛卵母细胞IVF囊胚中IGF2R基因甲基化水平及胚胎发育能力的影响,为冷冻卵母细胞/胚胎特定位点DNA甲基化的精确调控奠定基础。本研究将经过体外成熟的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻,随后进行体外受精,将受精所得到的原核胚进行dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统的注射,统计并计算卵母细胞的发育情况;通过亚硫酸盐测序的方式检测IGF2R基因启动子的甲基化水平,并利用荧光定量PCR检测IGF2R及相关基因的表达水平。与冷冻组相比,注射不同浓度的dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统后,只有40 ng·μL^(-1)组显著地提高了玻璃化冷冻卵母细胞IVF后的发育能力(P<0.05),20和60 ng·μL^(-1)组间差异不显著(P>0.05),但40 ng·μL^(-1)组发育效果仍然显著低于新鲜对照组(P<0.05);对检测冷冻组、新鲜组、40 ng·μL^(-1)组IGF2R基因启动子甲基化水平分析发现,40 ng·μL^(-1)组水平与新鲜组相似,显著高于冷冻组(P<0.05);荧光定量试验结果显示,40 ng·μL^(-1)组IGF2R基因mRNA表达水平相较于冷冻组显著降低(P<0.05),与新鲜组相似。注射40 ng·μL^(-1)的dCas9-SunTag-DNMT3A甲基化编辑系统能够通过有效升高IGF2R基因启动子甲基化水平(P<0.05)及显著降低其mRNA表达水平(P<0.05),来正向调节玻璃化冷冻卵母细胞IVF胚胎的发育情况,提高胚胎发育能力,使得其卵裂率和囊胚率都得到显著提高(P<0.05),同时促进胚胎发育相关基因的表达。

IGF1R和IGF2R在南江黄羊不同组织和肌细胞中的表达模式比较

为了探讨IGF1R和IGF2R基因在山羊不同组织及肌细胞中mRNA的表达模式,本研究采用qRT-PCR检测了南江黄羊妊娠期3个阶段(E45、E60和E105)的背最长肌及出生后5个时期(B3、B30、B60、B90和B120)的肌肉组织(背最长肌、臂三头肌)和内脏(心、肝、肺)中IGF1R和IGF2R的mRNA水平,以及骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,SMSCs)增殖和分化过程中二者的表达模式。结果表明,在胎儿期的背最长肌中,IGF1R与IGF2R均呈现先上升后下降的表达趋势,其中IGF1R在E45和E60的表达量高于IGF2R(P<0.05,P>0.05),在E105的表达量低于IGF2R(P<0.01)。在出生后阶段,IGF1R在肺中表达量最高,肝中最低;相反,IGF2R在肺中表达量最低,在背最长肌中最高。随着羔羊的发育,IGF1R与IGF2R的表达量在心中呈现上升的趋势,在肝中呈现"下降-上升-下降"的表达变化,而在肺中两者的表达趋势相反(B90前)。在背最长肌和臂三头肌中,IGF1R的表达量呈现持续上升模式(B90前),IGF2R则呈现出"下降-上升-下降"的趋势。此外,IGF1R和IGF2R在SMSCs增殖阶段(24、48和72 h)呈现"下降-上升"的表达模式,分化早期(0～3 d)低表达而后期显著增加(分化5 d,P<0.05),随后下降。本研究获得了IGF1R和IGF2R基因在南江黄羊不同组织及SMSCs中的表达模式,初步揭示IGF1R在山羊肺中的高表达与肝中的低表达对器官的生长和功能维持具有关键作用,IGF1R与IGF2R协同促进其肌肉组织发育和肌细胞的增殖分化。

IGF2R在非小细胞肺癌中的表达及与肿瘤进展的相关性研究

目的探讨胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况与临床病理因素的关系。方法收集80例NSCLC组织及10例癌旁正常肺组织石蜡标本制成切片,利用免疫组织化学染色(SP)法检测IGF2R的表达,并分析其与各种临床病理因素的关系。结果 IGF2R主要定位于细胞膜及细胞质,80例NSCLC组织中,46例(57.5%)为高表达,在非癌性肺组织中弱表达或无明显表达。IGF2R表达同低级别pTNM分期(P=0.038)、局部淋巴结转移减少(P=0.021)相关。结论 IGF2R的表达与NSCLC低级别pTNM分期、局部淋巴结转移减少相关。

基于CRISPR/Cas9技术建立IGF2R基因修饰PK-15细胞

作为我国特色的地方种质资源,藏猪对高海拔、低氧、强紫外线辐射等恶劣环境具有良好的适应性,前期研究发现藏猪的IGF2R(insulin-like growth factor 2 receptor,IGF2R)基因在其内含子上有1段274 bp的缺失,且该缺失为藏猪独有的变异,关于IGF2R是否参与藏猪对低氧等恶劣环境的适应性调节的相关研究尚未报道。为了建立IGF2R基因274 bp修饰的猪细胞系,研究IGF2R基因对藏猪低氧耐受特性的影响,通过CRISPR/Cas9技术建立基因修饰PK-15细胞系,并通过PCR、实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western-blot)、免疫荧光(immunofluorescence,IF)等方法鉴定其分子特征,随后分别利用CCK-8和RT-qPCR、Western-blot对基因修饰细胞进行活力和凋亡基因检测。结果显示,已成功构建IGF2R基因274 bp修饰的猪细胞系,IGF2R基因表达量极显著下调(P<0.01)。基因修饰细胞活力在72 h时极显著上升(P<0.01),并且含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase9)和BCL-2关联X(BCL2-associated X,BAX)蛋白的水平显著下调(P<0.05),并且B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL2)基因的mRNA水平极显著上升(P<0.01)。成功构建了IGF2R基因精确修饰的PK-15细胞系,并初步进行了功能研究,为研究IGF2R基因功能提供细胞模型,并为后续基因编辑猪的制备奠定基础。

切割穹窿海马伞大鼠海马IGF2及其受体IGF2R蛋白的表达变化

目的:观察穹窿海马伞切割后不同时间点海马胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor,IGF2)及其受体IGF2R蛋白的表达变化及定位。方法:应用ELISA、Western blot和免疫荧光组织化学方法检测海马内IGF2及其受体IGF2R蛋白,以及齿状回门区和颗粒下层中IGF2/Hoechst和IGF2R/Hoechst阳性细胞的数量及形态学变化。结果:(1)ELASA结果显示:IGF2在切割后7 d表达开始上升,14 d达最高水平,随后缓慢下降,28 d时降至正常水平。(2)Western blot结果显示:IGF2R也存在一个相应的表达升高与消退的过程,说明两者具有明显的相关性。(3)免疫荧光染色结果显示:正常组海马齿状回门区和颗粒下层IGF2及其受体IGF2R阳性细胞的数量较少,切割穹窿海马伞后第3 d数量稍有增多,但差异不明显;7 d时阳性细胞明显增多;14 d时阳性细胞继续增多,并达到最高水平;21 d后阳性细胞的数量开始下降,28 d时接近正常组水平。结论:切割穹窿海马伞后IGF2及其受体IGF2R的高表达可能与海马神经再生中抑制神经干细胞和放射状胶质细胞增殖,从而启动其向神经元等分化有关。

IGF1R和IGF2R基因在鸭脂肪组织中的发育表达模式比较

为比较胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)和胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)在鸭脂肪组织发育中的作用,利用RT-PCR技术,扩增出鸭IGF1R、IGF2R部分编码区序列,并采用荧光定量PCR检测IGF1R、IGF2R基因mRNA丰度在1～8周龄鸭腹脂、背皮和肝脏中的表达变化。成功获得了鸭IGF1R和IGF2R部分序列,长度分别为798 bp和716bp。腹脂中IGF1R和IGF2R基因的表达都呈先上升后下降的变化规律,4周龄时表达量最高;皮下脂肪中IGF1RmRNA的表达规律是在1周龄时极显著高于其他各时间点(P<0.01),2周龄时显著下降,随后缓慢上升到4周龄时达到最高,之后又逐渐下降。IGF2R mRNA的表达水平呈先上升后波动下降的趋势,以4周龄时表达量为最高,5～8周龄时波动下降;肝脏中IGF1R和IGF2R基因的表达规律相似,表达量总体都呈现1周龄后急剧下降而后平稳的趋势。综合上述结果可知,IGF1R和IGF2R基因对肝脏的脂肪合成以及肝外脂肪组织增殖、分化的调控具有差异性。

脐带血H19、IGF2R和IGF2基因甲基化对正常出生体质量婴幼儿生长发育的影响

目的探讨脐带血中生长相关基因甲基化状态与婴幼儿期生长发育的相关性,了解婴幼儿生长发育迟缓的可能原因和机制.方法采用巢式病例对照的研究设计,选取2014年1月-2018年12月舟山妇幼保健院收治的50例生长发育迟缓婴幼儿为迟缓组,根据1:1的比例,以出生体质量、孕周、喂养方式和婴幼儿实际年龄4个变量匹配的50例发育正常婴幼儿为对照组.在分娩后立即采集脐带血,检测H19、IGF2R和IGF2基因的甲基化水平;在出生后第6、12、18、24个月4个时间点评价婴幼儿的生长发育情况.采用线性回归模型,分析子代身高和体质量与脐带血H19、IGF2R和IGF2基因甲基化水平的相关性.结果子代生长发育相对迟缓组脐带血H19基因1fr片段CG位点和5fr片段CG位点甲基化水平高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05).H19基因2fr片段CHH位点甲基化水平低于对照组(P<0.05),其余位点甲基化水平差异均无统计学意义(P>0.05).整合H19、IGF2R和IGF2基因CG、CHG和CHH类型各片段后,H19基因CHH位点甲基化水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);其余位点甲基化水平差异均无统计学意义(均P>0.05).调整新生儿性别和喂养方式等混杂因素后,线性回归模型分析结果显示,子代6、12、18、24月龄身高、体质量与脐带血H19、IGF2R和IGF2基因甲基化水平的关联性差异均无统计学意义(P>0.05).结论H19基因高甲基化状态可能与子代生长发育相对迟缓相关,而IGF2R和IGF2基因甲基化水平与子代生长发育无明显的关系.

细胞复制衰老过程中IGF2R基因表达及H3组蛋白修饰的变化

目的研究细胞复制性衰老过程中胰岛素样生长因子2受体基因（IGF2R）的表达与H3组蛋白修饰谱的变化。方法培养人胚肺成纤维细胞（HPF），以细胞群倍增数（PDL）为23（PDL23）为年轻组细胞，PDL＝50（PDL50）为复制衰老细胞，观察细胞复制衰老过程中生物学性状改变；采用实时定量PCR法观察细胞PDL30、PDL40、PDL50 IGF2R基因的表达，并采用染色质免疫共沉淀-实时定量PCR法（chromatinimmunoprecipitation-real time quantitative PCR methods，CHIP-PCR）检测IGF2R基因转录起始区组蛋白修饰（H3-Ac、H3K9-tri—Me、H3K9-Ac和H3K4-tri—Me）的状况。结果与年轻细胞相比，衰老细胞体积变大，增殖能力减弱，细胞周期停滞，衰老特异性肛半乳糖苷酶着色阳性，IGF2RmRNA表达增加（P〈0．05），IGF2RmRNA表达与细胞PDL呈正相关（r=0．871）。相对年轻细胞而言，老年细胞的IGF2R基因在转录起始点上游0．6kb处和转录起始点下游1．2kb处以H3-Ac、H3K9-Ac和H3K4-tri—Me组蛋白修饰为主，而在转录起始点下游1．6～4．0kb处H3K9-Ac修饰降低，H3K9-tri—Me组蛋白修饰升高，但H3K4-tri—Me组蛋白修饰占主要地位。结论IGF2R与细胞衰老程度相关，其基因表达受H3组蛋白修饰调控，表观遗传学参与细胞衰老进程。

肿瘤相关印迹基因研究进展

基因印迹指的是某些基因呈不遵从孟德尔定律的亲源依赖性单等位基因表达 ,其另一等位基因不表达或表达极弱 ,具有这种现象的基因被称为印迹基因。基因印迹在进化论意义上的优势可能是有效地防止了单性生殖 ,维持了遗传多样性 ,但也增加了隐性突变转为显性的危险性。基因印迹的产生及维持机制甚为复杂 ,DNA差异甲基化、特殊的染色质结构和反义转录产物等可能是比较重要的因素。印迹基因及其控制机制的异常(如 :印迹丢失、杂合性丢失、染色体单亲双体性以及突变失活等)在人类遗传性疾病尤其是肿瘤发生中的作用正引起越来越多的注意。目前已知IGF2、H19、M6P/IGF2R、p57KIP2、p73、NOEY2等均属印迹基因 。