IGFBP-3在真核细胞中的分泌表达及功能分析

将人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的cDNA片段亚克隆入pSectagA载体,构建真核分泌型表达载体pSectag-IGFBP3。采用脂质体转染的方法将真核表达载体转染人肾癌786-O细胞,转染48 h后用免疫印迹法检测IGFBP-3的表达状况;同时以Annexin V-EGFP/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察分泌表达的IGFBP-3对宿主细胞的促凋亡作用。转染48h后,经Western blotting检测,在细胞培养上清中有分泌表达的IGFBP-3蛋白。流式细胞技术检测结果表明,表达产物可直接作用于宿主细胞,发挥促肿瘤细胞凋亡的作用。由此表明所构建的重组表达质粒pSectag-IGFBP3能在真核细胞水平正常表达并发挥生物学功能,为进一步探索IGFBP-3的作用机制奠定了基础。