IGFBP-5及p53与汉防己甲素抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的关系研究

目的研究汉防己甲素(tetrandrine,Tet)抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用及可能的分子机制。方法采用CCK-8、流式及Western blot分析不同浓度Tet对MCF-7细胞增殖与凋亡的影响;通过real-time PCR、Western blot检测Tet对MCF-7细胞IGFBP-5表达的影响;应用CCK-8分析Tet及IGFBP-5过表达或沉默表达对Tet抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖作用的影响;利用Western blot检测Tet对MCF-7细胞p53表达的影响,以及过表达IGFBP-5和(或)Tet对乳腺癌MCF-7细胞p53表达的影响。结果 Tet呈浓度和时间依赖性抑制MCF-7细胞增殖,诱导G1期阻滞,并降低PCNA表达水平;同时,Tet明显增加MCF-7细胞凋亡比例,升高Bad的蛋白水平,降低Bcl-2的蛋白水平。Tet上调MCF-7细胞IGFBP-5的表达水平,过表达IGFBP-5增加Tet对MCF-7细胞的增殖抑制作用,而沉默IGFBP-5则减弱Tet的这种作用。Tet升高MCF-7细胞的p53蛋白水平,降低MDM2的蛋白水平;过表达IGFBP-5增强Tet对p53表达的促进和对MDM2表达的抑制作用。结论 Tet对MCF-7细胞增殖具有抑制作用,机制可能与其上调IGFBP-5而增强p53信号的功能有关。

隔药灸和电针对克罗恩病大鼠结肠IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5表达的影响

目的研究隔药灸和电针对克罗恩病大鼠结肠IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5蛋白及IGF-I mRNA的调节作用,探讨针灸治疗大鼠克罗恩病肠纤维化的作用机制。方法SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组、电针组和药物组。采用三硝基苯磺酸制备大鼠克罗恩病模型,应用HE染色、Masson染色光镜下观察结肠病理组织学变化及胶原纤维增生情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应检测结肠IGF-I mRNA的变化;采用免疫组织化学Envision法检测结肠IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5蛋白表达变化。结果与正常组比较,模型组大鼠结肠组织胶原增生,IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5蛋白表达均显著增加,IGF-I mRNA表达显著增加。经治疗后,与模型组比较隔药灸组、电针组、药物组大鼠结肠胶原增生均显著减少,隔药灸组较电针组作用显著。隔药灸组、电针组、药物组大鼠IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5蛋白表达均显著降低;隔药灸组对IGF-I、IGFBP-5蛋白的下调作用优于电针组。隔药灸组、药物组IGF-I mRNA表达均显著降低,电针组变化不明显。结论隔药灸和电针能够下调结肠IGF-I、IGF-IR、IGFBP-5蛋白的异常表达,该作用可能是隔药灸和电针改善克罗恩病肠纤维化的重要机制。隔药灸能够下调IGF-I mRNA表达,对IGF-I、IGFBP-5蛋白的下调作用优于电针,该作用可能是其改善克罗恩病肠纤维化优于电针的机制之一。

IGFs对小鼠乳腺IGFBP-5和cyclin D1表达的影响

运用荧光显微镜技术,采用小鼠乳腺组织培养及免疫荧光组化方法,对IGFs在乳腺发育和乳腺功能调控中的作用进行研究。结果表明:①IGFs能抑制各时期小鼠乳腺中IGFBP-5的表达,并且IGF-I对小鼠乳腺中IGFBP-5表达的抑制作用强于IGF-II,说明IGFs可抑制小鼠乳腺细胞凋亡,延缓小鼠乳腺退化过程;②IGFs能促进各时期小鼠乳腺中cyclin D1的表达,并且IGF-I对小鼠乳腺中cyclin D1表达的促进作用强于IGF-II,证明IGFs可促进小鼠乳腺腺泡的发育。

山羊IGFBP-5基因克隆及特征分析

为探讨山羊IGFBP-5基因的特点,进一步研究其在山羊上的表达及生长发育中的作用机制,以初生南江黄羊肝脏组织为材料抽提RNA进行克隆测序,并利用ExPasy、NetPhos、NetO-Glyc、SignalP等生物软件分析IGFBP-5基因CDS区及其编码氨基酸的理化性质、结构特点。结果显示,山羊IGFBP-5基因的CDS全长819 bp,编码272个氨基酸残基,相对分子量为30.392 kD,理论等电点pI=8.56,开始19个氨基酸残基构成信号肽,具有2个疏水区、5个亲水区且总平均疏水性值为-0.619,成熟肽定位于细胞外。二级结构以无规卷曲为主(83.8%),α-螺旋和延伸片段分别为13.6%和2.6%。N-端存在IGFBP信号,C-端有Ⅰ型甲状腺球蛋白结构域,发现3个O-糖基化位点,22个磷酸化位点,主要磷酸化方式有CKⅡ、PKA、PKC、MAPK 4种。山羊与其他物种IGFBP-5基因mRNA及氨基酸序列一致性分别在89%和94%以上,其N-端在几个物种中完全一致。山羊和人IGFBP-5蛋白前体分别有特异性的氨基酸插入(Ala102、Leu3)。山羊IGFBP-5蛋白是位于细胞外且具有信号肽的弱亲水性分泌蛋白,磷酸化是调控其功能的主要因素。

山羊不同组织中IGFBP-5 mRNA的发育表达模式

[目的]探讨IGFBP-5基因在山羊出生后不同组织的发育性表达模式。[方法]采用荧光定量PCR,分析了出生后0、15、30、60、90和120d36只南江黄羊(公、母羔各18只)的心脏、肝脏、脾、肺、背最长肌、半膜肌、臂三头肌和股二头肌样品中IGFBP-5mRNA水平。[结果]母羔的IGFBP-5mRNA表达丰度显著高于公羔。各组织IGFBP-5mRNA表达量呈现肝脏>肺>脾(心脏)>肌肉的趋势(P<0.01),脾与心脏间差异不显著(P>0.01),肌肉的表达值最低。随着日龄的增加,各组织中IGFBP-5mRNA丰度均呈现下降-上调-下降的发育性表达模式,而肝脏和肺中的表达模式具有明显的性别差异。[结论]IGFBP-5mRNA主要在内脏,尤其是肝脏中合成,但在各组织的发育性表达模式一致,性别是一个重要的影响因素。

绵羊IGFBP-5基因的克隆及序列分析

为了克隆IGFBP-5基因的CDS序列及其生物信息学分析,试验以凉山半细毛羊为研究对象,采用RT-PCR方法克隆了IGFBP-5基因的CDS全序列,并用生物信息学方法深入分析其序列。结果表明:IGFBP-5基因的CDS序列为816 bp,编码271个氨基酸,与牛、人、鼠的CDS同源性分别为97%、94%、89%,氨基酸序列同源性分别为98%、98%、95%,Gen Bank登录号为EU727460.1;IGFBP-5基因的氨基酸分子质量为30.3 ku,理论等电点(p I)为8.56;进化分析显示与牛、山羊等哺乳动物关系较近,与蟾、鱼类等亲缘关系较远;IGFBP-5基因存在明显的疏水性区域和亲水性区域,有1个信号肽、22个磷酸化位点、2个N-糖基化位点和3个O-糖基化位点;二级结构分析显示无规卷曲、α-螺旋和β-折叠区域分别为66.42%、22.51%、11.07%;三级结构分析显示存在IGFBP_N和甲状腺球蛋白-Ⅰ型功能域。

IGFBP-5在乳腺发育过程中的生物学作用

细胞生长的调节主要由IGFs起作用,IGFBPs能够通过蛋白水解、翻译后修饰以及同细胞表面和细胞外基质的相互作用来加强或抑制IGFs的作用,从而调节细胞的增殖、存活和分化。IGFBPs也具有独立的作用方式。IGFBP-5与乳腺发育特别是乳腺退化关系密切,IGFBP-5的表达可能是细胞凋亡发生时的普遍事件,尤其是在乳腺退化的初始阶段。

IGFBP-5 mRNA在绒山羊皮肤中表达的研究

为了进一步研究毛囊发生和凋亡的分子机制.实验通过组织原位杂交的方法,研究了IGFBP-5在绒山羊胚胎期115天和成年期10月皮肤毛囊的表达情况.结果表明IGFBP-5在初级毛囊和次级毛囊的毛干皮质表达强烈,在连接组织鞘有微弱表达,而在内根鞘、外根鞘和毛髓质没有表达.从表达结果看,IGFBP-5可能在毛囊发育和绒毛生长中发挥重要作用.

长链非编码RNA GAS5通过调节miR-137/IGFBP-5促进PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的探究长链非编码RNA生长停滞特异性转录因子5(growth-arrest specific transcript 5,GAS5)对血小板源性生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的作用和机制。方法首先使用20 ng/ml PDGF-BB刺激原代人主动脉平滑肌细胞(primary human aortic smooth muscle cells,HAoSMC),Real-time PCR方法检测GAS5的表达。然后使用siRNA干扰技术下调GAS5的表达后,MTT检测HAoSMC细胞增殖,Transwell检测细胞迁移,Real-time PCR检测miR-137和IGFBP-5 m RNA的表达,Western blot检测IGFBP-5蛋白表达水平。最后,通过转染miR-137拮抗剂下调miR-137的表达,检测其对GAS5 siRNA调节的IGFBP-5表达、细胞增殖和迁移的影响。结果 PDGF-BB能够上调HAoSMC细胞中GAS5的表达。下调GAS5的表达能够减弱PDGF-BB诱导的HAoSMC细胞增殖、迁移和IGFBP-5表达,上调miR-137的表达。下调miR-137的表达能够降低GAS5下调对IGFBP-5表达与细胞增殖和迁移的影响。结论 GAS5能够促进PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞的增殖和迁移,这是通过miR-137/IGFBP-5通路发挥作用的。

哈萨克马和焉耆马不同组织中IGFBP-5基因表达差异研究

试验旨在探求胰岛素样生长因子结合蛋白-5(insulin-like growth factor binding protein-5,IGFBP-5)基因在哈萨克马和焉耆马不同组织部位中的mRNA表达规律。采用实时荧光定量PCR技术检测在哈萨克马和焉耆马心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、大肠、盲肠、肋间肌、背最长肌、臂肌和臀肌等不同组织中IGFBP-5基因mRNA表达量,同时比较该基因在哈萨克马和焉耆马相同组织中的表达差异。结果表明,哈萨克马和焉耆马表达量最高的均为背最长肌,其次是臂肌,并显著高于心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、大肠、盲肠等内脏组织表达量(P<0.05),大肠中的表达量最低;焉耆马的肾脏、小肠、大肠、盲肠、背最长肌和臂肌中表达量高于哈萨克马相同部位的表达量,其中焉耆马背最长肌和大肠中的表达量极显著高于哈萨克马的相同部位(P<0.01),小肠和盲肠中的表达量显著高于哈萨克马的相同部位(P<0.05)。本试验为深入研究IGFBP-5基因的生物学功能,以及对中国马生产性能的遗传改良提供理论依据。

中国美利奴羊IGFBP-5基因外显子区的PCR-SSCP多态性分析

【目的】以IGFBP-5作为候选基因,寻找与绵羊生产性能有关的SNP位点。【方法】利用PCR-SSCP和DNA测序快速筛查SNP位点;分析该位点在中国美利奴羊中的基因型和等位基因分布情况;并通过多重比较分析不同基因型与中国美利奴羊部分生产性能的关联性。【结果与结论】在绵羊IGFBP-5基因外显子1区发现一个新的SNP位点(C136G),并建立了PCR-SSCP的基因分型方法。对212只中国美利奴羊的检测结果显示有CC、CG和GG3种基因型,基因型频率分别为0.50、0.41和0.09,C等位基因频率为0.70,G等位基因频率为0.30。不同基因型与中国美利奴羊早期生长和羊毛生产性能具有一定的影响:GG基因型个体的初生重、剪毛后体重以及剪毛量显著高于CC基因型(P<0.05);CC基因型个体的毛丛长度明显长于CG基因型个体(P<0.05)。

草原红牛IGFBP-5基因外显子多态性及对胴体性状的影响

为揭示草原红牛IGFBP-5基因外显子多态性与胴体性状的相关性,采用PCR-SSCP及PCR-RFLP两种方法分别对58头草原红牛群体该基因外显子多态性进行了检测,并对检测到的突变位点用SPSS软件分析其与胴体性状的相关性。结果表明:IGFBP-5基因第3外显子在191bp处存在G(A)突变,该基因多态性与宰前活重、胴体重呈显著相关,BB型显著高于AA型(P>0.05);对其他性状的影响差异不显著。通过研究IGFBP-5基因外显子的多态性,为草原红牛的选种选育提供实验依据。

IGFBP-5基因在不同猪种间的表达差异及5′端序列特征分析

通过实时荧光定量PCR比较了IGFBP-5基因在西藏小型猪、巴马香猪和军牧1号白猪出生、断奶、成年各不同生长发育时期的肝脏、肾脏、脾脏和肌肉组织之间的表达差异,并比较分析了3个猪种IGFBP-5基因5′调控区的突变位点及所引起的转录因子结合位点的改变。从出生到成年阶段,3个猪种中IGFBP-5基因的表达量没有明显的变化规律;在不同生长发育时期3个猪种IGFBP-5均在肾脏和肝脏中高表达;序列同源性比对分析发现,3个猪种中存在多处突变,转录因子结合位点分析发现军牧1号白猪在序列-1 505和-1 497bp的2处突变分别增加了1个GATA-x转录因子结合位点和1个E2F转录因子结合位点。IGFBP-5基因5′调控区在不同猪种间存在的差异可能对IGFBP-5基因在大、小型猪种间的表达差异有影响。

肠内营养支持对克罗恩病营养障碍患者IGF-I、IGF-IR及IGFBP-5水平的影响

目的:探讨肠内营养支持对克罗恩病营养障碍患者血清IGF-I、IGF-IR及IGFBP-5水平的影响。方法:选取我院收治的克罗恩病患者92例,根据治疗方法不同分为对照组及治疗组,每组各46例。对照组予以美沙拉嗪和醋酸泼尼松龙片常规治疗,治疗组在对照组基础上加用肠内营养混悬液静脉滴注。观察并比较两组患者治疗前后血清中IGF-I、IGF-IR及IGFBP-5水平的变化情况。结果:与治疗前比较,两组患者治疗后血清IGF-I、IGF-IR及IGFBP-5水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,治疗组患者治疗后血清IGF-I、IGF-IR及IGFBP-5水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,治疗组患者治疗后的营养状况明显改善,临床总有效率明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:肠内营养支持能够降低克罗恩病营养障碍患者血清中IGF-I、IGF-IR及IGFBP-5水平,改善肠纤维化和营养状态,提高临床疗效。

IGFBP-5在肿瘤中的表达

胰岛素样生长因子结合蛋白-5(IGFBP-5)在多种肿瘤患者的血清、肿瘤组织和细胞株中有不同的表达。在恶性脑膜瘤中表达较良性脑膜瘤减少;在前列腺癌中表达较正常组织增高。IGFBP-5的浓度可以影响某些肿瘤的生成。在一些非肿瘤性疾病中IGFBP-5表达也减少,有必要做更深一步的研究。

不同类型老年女性髋部骨折血清IGF-1及IGFBP-3,4,5表达相关性研究

目的研究不同类型老年女性髋部骨折中外周血清中血清胰岛素样生长因子1(IGF-1)及血清胰岛素样生长因子结合蛋白3,4,5(IGFBP-3,4,5)表达差异及同骨密度的相关性。方法选取年龄大于65岁老年女性髋部骨折患者,检测并比较外周血清中IGF-1及IGFBP-3,4,5表达差异及同骨密度的相关性。结果转子间骨折组转子区骨矿物质密度(BMD)较股骨颈骨折组低(P<0.001),股骨颈组血清中IGFBP-4含量较转子间骨折组低(P<0.001),而IGFBP-5含量高于转子间骨折组(P<0.001)。在血清指标相关性表达中,血清IGF-1表达与股骨颈区BMD成正相关(R=0.46,P=0.002),血清IGFBP-4同转子区BMD成负相关(R=-0.634,P<0.001),血清IGFBP-5同股骨颈区BMD成正相关(R=0.235,P<0.001)。结论外周血清中IGF-1及其结合蛋白表达的差异可能是导致不同类型老年髋部骨折的病理机制之一,但由于IGF-1及其结合蛋白调节机制相当复杂,对于IGF-1及IGFBPs表达机制同骨折类型的关系尚需大量的实验研究进一步证实。

胰岛素样生长因子结合蛋白3和胰岛素样生长因子结合蛋白5基因在内蒙古白绒山羊皮肤中的表达研究

本研究旨在探明胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor-binding protein,IGFBP)在内蒙古白绒山羊绒毛发育的不同生长阶段皮肤组织中的表达变化情况。试验采用实时荧光定量PCR技术,对内蒙古白绒山羊绒毛生长发育的各个时期皮肤中IGFBP-1～IGFBP-6基因的表达进行了测定,并通过埋植褪黑素组改变绒毛生长周期的研究,来鉴定IGFBP-1～IGFBP-6基因中高表达的结合蛋白的作用。结果表明,IGFBP-3和IGFBP-5在绒山羊绒毛生长发育的各个时期的皮肤组织中均有表达,但是IGFBP-5的表达相对于IGFBP-3的表达具有很强的规律性。结果提示,在内蒙古白绒山羊的绒毛发育过程中,IGFBP-5可能是一个主要的调控因子。

胰岛素样生长因子结合蛋白5对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的证实胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP-5)可以通过调节胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)的过度增殖影响高血压的发病。方法采用Western blot方法检测自发性高血压组大鼠(SHR)和血压正常组大鼠(WKY)原代培养的VSMCs中IGFBP-5的表达。采用MTT方法检测用不同剂量IGFBP-5处理WKY组VSMCs时对该细胞增殖的影响。结果 SHR组和WKY组相比较,IGFBP-5的蛋白表达量显著增高;MTT结果显示,IGFBP-5具有促进WKY组VSMCs增殖的作用。结论 IGFBP-5能够促进VSMCs的增殖进而可能影响高血压的发生、发展。

1,25二羟基维生素D_3联合5-氟尿嘧啶对人食管癌Eca-109细胞移植瘤的影响

目的探讨1,25二羟基维生素D3、5-氟尿嘧啶单独或联合作用对人食管癌Eca-109细胞裸鼠移植瘤胰岛素生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的影响。方法体外培养人食管癌Eca-109细胞,BALB/c裸小鼠皮下接种荷瘤后随机分为对照组(A)、1,25二羟基维生素D3组(B)、5-氟尿嘧啶组(C)、联合用药组(D),2.5μg/kg 1,25二羟基维生素D3、25 mg/kg 5-氟尿嘧啶单独或联合腹腔注射,对照组用等体积生理盐水腹腔注射,观察瘤体生长情况,运用免疫组织化学方法检测移植瘤组织中IGFBP-3蛋白表达,全自动生化分析仪检测血清钙离子水平、Von kossa染色观察肾脏钙沉积情况。结果与A组比较,B、C、D组移植瘤生长缓慢,体积较小,IGFBP-3阳性蛋白染色较深,且表达量较多(P<0.05);而D组较B、C组移植瘤IGFBP-3蛋白表达显著升高(P<0.05)。B、C、D组血清钙离子水平较A组稍有升高,但肾脏组织切片Von kossa染色未见钙沉积。结论 1,25二羟基维生素D3、5-氟尿嘧啶均能抑制移植瘤生长,且联合用药效果更为显著,可能与上调移植瘤组织IGFBP-3蛋白表达有关。肾脏Von kossa染色未见钙沉积。

胰岛素样生长因子结合蛋白5基因在绒山羊染色体的定位研究

胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)是胰岛素样生长因子IGFS的重要调控者,在毛囊细胞的发育和生长周期中起着重要的调控作用。为丰富绒山羊基因组物理图谱和更好地研究绒毛调控机理,本实验利用荧光原位杂交(FISH)技术,以提取的IGFBP-5BAC质粒作为探针与公绒山羊染色体核型标本进行杂交,将IGFBP-5基因定位于绒山羊7号染色体的长臂第一区段第5区。该研究首次报道了山羊IGFBP-5基因的染色体定位,完善了山羊染色体物理图谱和山羊基因组信息。