饲粮能量差异对海南猪IGFBP6基因mRNA表达的影响

将36头质量为(61.70±1.00)kg的海南猪随机分为2个处理组,分别饲喂高、低能量水平的2种日粮,以研究不同能量水平对IGFBP6基因表达量及生产性能的影响。相比之下,高能量水平饲粮可显著提高海南猪平均日增质量(P<0.05),并显著降低料肉比(P<0.05)。RT-PCR结果表明,低能量水平饲粮可促进IGFBP6基因表达量。海南猪IGFBP6基因表达量与平均日增质量、平均日采食量均呈不显著正相关(P>0.05);与料肉比呈显著负相关(P<0.05)。饲粮能量水平可影响海南猪的生产性能,但对海南猪IGFBP6基因表达量的影响不显著。

海南地方猪IGFBP6基因多态性分析

采用PCR-SSCP技术,对五指山猪、海南地方猪2个品系(临高猪、屯昌猪)等猪种的IGFBP6基因的多态性进行研究。结果表明,引物P1和P2的PCR片断SSCP分析表现有多态性,且出现3种基因型。随后的测序结果表明,它们都在相应的区域存在着变异;引物P1在海南地方猪种大多表现BB基因型和以B等位基因为主,引物P2大多表现CC基因型和以C等位基因为主。SPSS软件分析五指山猪IGFBP6基因多态性与其3个生长阶段的关联程度,结果发现,引物P1 AA基因型和引物P2 DD基因型的猪个体在2月龄、8月龄、12月龄的生长体重高于其它基因型,但个体差异均不显著(P>0.05)。

APB-DOCK8转基因番茄疫苗防龋的实验研究

目的:观察转基因番茄防龋疫苗经灌胃免疫SD大鼠后的防龋效果,初步探索其免疫机制。方法:采用SD大鼠建立实验性龋齿模型,培育并鉴定转基因防龋番茄,将表达目的蛋白的转基因番茄防龋疫苗分次灌胃免疫SD大鼠,Elisa法检测SD大鼠唾液及血液样品中特异性抗PAcA的SIgA和IgG含量,取上下颌骨进行Keyes龋齿计分,取脾脏进行RNA-seq测序分析。采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:转基因番茄防龋疫苗中目的蛋白浓度为36.28μg/mL,免疫SD大鼠后,D组(8 mL/kg)在第6周产生的特异性SIgA和IgG抗体水平最高,且与其他组存在显著差异(P<0.05),龋齿计分也较其他组差异显著(P<0.05)。提取该组SD大鼠脾脏mRNA经RNA-seq测序,得到40个mRNA表达差异显著基因(P-adjust<0.05&|Fold Change|≥1.5)。26个基因显著上调,包括IGFBP6、COL15A1等,GO富集到体液免疫反应、B细胞活化、免疫球蛋白受体结合等;KEGG富集到56条信号通路,包括PI3K-AKT、NF-κB等信号通路,且F<0.001。14个基因显著下调,但下调基因GO和KEGG富集分析无统计学意义(F>0.1)。结论:转基因番茄防龋疫苗可能通过上调SD大鼠IGFBP6基因,介导PI3K-AKT信号通路的激活而减少龋齿发生。

SEMA3B对人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞Akt磷酸化调控作用的实验研究

目的:研究SEMA3B作为潜在的肺癌治疗药物诱导细胞凋亡作用的机制。方法:将pc DNA3.1/pc DNA3.1-SEMA3B质粒转染至Cos7细胞,400μg/ml G418筛选后建立稳定表达SEMA3B的Cos7细胞系。利用含有SEMA3B-Cos7细胞的培养上清液、特异性siRNA、实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法,检测SEMA3B蛋白对Akt磷酸化及下游基因表达的影响及分子机制。结果:在细胞培养上清及细胞裂解液中稳定表达SEMA3B的Cos7细胞模型建立;利用含有SEMA3B蛋白的Cos7培养上清液及对照组培养上清液处理NCIH1299细胞24小时后,含有SEMA3B蛋白组可显著降低H1299细胞内p Akt-ser^(473)的蛋白表达及下游基因MDM2 mRNA表达,增加Caspase3 mRNA表达;特异性siRNA阻断IGFBP6表达,可部分消除SEMA3B抑制Akt磷酸化的作用,并影响其对MDM2和Caspase3的作用。结论:SEMA3B是通过IGFBP6介导其抑制Akt磷酸化作用及其下游基因表达,而发挥诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的作用,进一步提示在非小细胞肺癌中SEMA3B的抑癌作用及其潜在的治疗药物价值。

草原红牛胰岛素样生长因子结合蛋白6基因外显子2的遗传多态性及遗传效应分析

本试验旨在研究草原红牛不同基因型与屠宰肉用性状的关联性。选用草原红牛作为试验群体,采用PCR-SSCP方法检测胰岛素样生长因子结合蛋白6(insulin-like growth factors binding proteins 6,IGFBP6)基因外显子2的多态性,采用最小二乘法拟合线性模型将突变位点的不同基因型与牛屠宰肉用性状进行关联分析。结果表明,在IGFBP6基因外显子2上发现1个多态性位点A180G,具有3种基因型:AA、AB和BB。SPSS 13.0统计分析结果表明,IGFBP6基因外显子2AB和BB基因型净肉重极显著高于AA基因型(P<0.01);眼肌面积和骨重显著高于AA基因型(P<0.05),而在宰前活重、胴体重、肾脂重和肋脂重方面3种基因型个体之间差异不显著(P>0.05)。结果显示,IGFBP6基因的多态性与屠宰肉用性状具有一定的关联性,可为今后草原红牛的育种保种工作提供理论依据,并对草原红牛肉用性状的改善提供参考。