鸡抗人B7同源物4(B7-H4)IgY多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗人B7同源物4(B7-H4)IgY多克隆抗体,建立合适的双抗体夹心ELISA检测人血清中可溶性B7-H4(sB7-H4)蛋白。方法筛选人源B7-H4蛋白合适的B细胞表位肽免疫新海兰灰蛋鸡,收集鸡蛋纯化鸡抗人B7-H4 IgY抗体;检测抗体的纯度、浓度及效价,并用ELISA、Western blot、流式细胞术验证抗体的特异性和功能;建立双抗体夹心ELISA法并检测临床样本;同时采用商品化的ELISA试剂盒对相同样本进行对比检测。结果制备了鸡抗人B7-H4 IgY抗体并证明该抗体对人B7-H4蛋白有高特异性;采用该抗体检测临床样本发现卵巢癌和良性卵巢肿瘤患者血清中sB7-H4含量明显高于健康人,这与使用商品试剂盒获得的检测结果一致;采用IgY抗体建立的ELISA灵敏度高于商品试剂盒。结论成功制备了鸡抗人B7-H4 IgY多克隆抗体,并用其建立了一种适合检测人血清中sB7-H4蛋白的双抗体夹心ELISA。

IgY在抗病毒医学领域中的应用

免疫球蛋白Y(immunoglobulin Y,IgY)作为一种潜在的治疗性抗体,存在于许多物种内,从低等的两栖类、爬行类到高等动物鸟类等。疫苗的研发成为全球科学家与病毒“赛跑”的竞争主场。疫苗虽能有效预防病毒的感染,降低疾病的发生率和死亡率,但其开发耗时且成本高昂。IgY具有易生产、成本低、起效快的优点,近年来基于IgY的抗体治疗策略得到广泛认可。概述了IgY特性的最新研究和生产技术的进展,综述了IgY在病毒性疾病治疗方面的应用,从而为IgY在病毒感染性疾病治疗领域的应用提供一些启示。

免疫鸡产生IgY抗体的技术

IgY技术正在成为生物技术领域和医药研究中的新热点 ,并且越来越得到国内同仁的重视。因为卵黄抗体 (IgY)化学性质稳定 ,产量高、成本低 ,以及动物种系距离的优势 ,更适于生产特异性抗体 ,具有开发功能性食品和新药的潜能。作为系列介绍的第二部分 ,本文详细介绍和探讨免疫鸡产生IgY抗体技术的主要技术环节和实践应用方面的具体信息 ,包括动物饲养 ,对鸡的免疫 ,抗体特性 ,IgY提取技术 ,鸡单克隆抗体的制备等方面。

抗龋IgY和IgY牙膏对体外培养变形链球菌影响的电镜观察

目的 :观察抗龋IgY和IgY牙膏对变形链球菌超微结构的影响 ,为探讨IgY的防龋机制提供形态学资料。方法 :体外厌氧培养变形链球菌 ,用不同浓度抗龋IgY和IgY牙膏处理菌细胞 ,并对培养出的菌细胞做透射电镜和扫描电镜观察。结果 :①透射电镜。经抗龋IgY处理的变形链球菌 ,细胞壁不完整 ,细胞壁最外层荚膜溶解消失 ;经IgY牙膏处理的变形链球菌除上述变化外 ,部分菌细胞结构破坏 ,菌体溶解。②扫描电镜。经抗龋IgY处理的变形链球菌 ,其长链菌减少 ,菌体表面光滑。结论 :抗龋IgY可导致变形链球菌细胞壁损伤。由于细胞壁具有的黏附作用丧失 ,导致菌体黏附牙面的能力下降和菌斑形成减少 ,从而达到抗龋作用 ;IgY牙膏膏体中的成分可能对菌细胞有破坏作用。

IgY牙膏对远缘链球菌体外黏附及超微结构的影响

实验证实抗龋IgY能抑制变形链球菌与远缘链球菌的黏附，因此最近一些技术研发中心致力于IgY牙膏的开发研制，试图开辟生物抗体预防龋病的新途径，一些实验已经表明IgY牙膏能抑制变形链球菌的生长与黏附，但对远缘链球菌（血清g型）的影响还未见文献报道。本实验旨在通过体外黏附试验及对细菌形态学改变的描述来证明把特异性IgY抗体加入到牙膏中并不影响其对远缘链球菌的作用。

IgY联合乳酸杆菌防治阴道白色念珠菌感染的实验研究

目的:观察特异性抗白色念珠菌IgY和乳酸杆菌的体内外生物学效应,探讨将二者复合应用的可能性。方法:分离人阴道上皮细胞,用抗白色念珠菌IgY和乳酸杆菌对阴道上皮细胞预处理后进行白色念珠菌黏附抑制试验;建立小鼠白色念珠菌性阴道炎模型,通过阴道局部给抗白色念珠菌IgY和乳酸杆菌来观察其疗效。结果:抗白色念珠菌IgY和乳酸杆菌均能抑制白色念珠菌黏附阴道上皮细胞,并能减少白色念珠菌在小鼠阴道内的定植和减轻小鼠阴道局部的炎症反应。结论:特异性抗白色念珠菌IgY具有良好的体内外生物学效应且优于单独使用乳酸杆菌,二者复合应用效果最佳。

基因专一性鸡卵黄抗体(IgY)的研究及应用

用抗原免疫鸡 ,从鸡卵黄中获取特异多克隆IgY抗体 ,是一条高产量、低成本的简便快速途径。IgY与哺乳动物抗体IgG相比具有许多突出的优点 ,使IgY在现代免疫学中已得到广泛应用。采用基因免疫方法制备的基因专一性IgY抗体 ,在免疫分析、寻找药靶和生物标记物、制备新抗体等方面 ,必有进一步的应用。

IgY抗体的特性及其在诊断试剂中的应用

早在19世纪人们就认识到鸡母体内的抗体可传递到鸡卵的卵黄中．然而长期以来，这一发现并没有得到广泛应用。随着动物权益问题逐渐得到重视，它才被人们所关注。从卵黄中提取的抗体称为IgY（egg yolk immunoglobulin），1996年IgY抗体的生产和应用被定义为IgY技术。IgY相对于哺乳动物抗体IgG而言，具有抗原用量少、制备周期短、成功率高、动物创伤小、产量大等制备优势。因此，IgY作为诊断试剂的研究具有重要意义。本文述及鸡抗体的分子结构、理化性质及IgY在人类疾病诊断中的应用。

抗龋IgY和IgY牙膏对体外培养细胞影响的形态学观察

目的 :了解抗龋IgY和IgY牙膏对体外培养细胞的影响。方法 :体外培养人成纤维细胞 (hu manskinfibrobasts,HSF)和中国仓鼠卵巢癌细胞 (chinesehamsterovary ,CHO) ,分别经不同浓度的抗龋IgY和IgY牙膏处理后常规培养 ,通过倒置显微镜和电子显微镜观察细胞生长情况和细胞超微结构。结果 :经抗龋IgY处理的HSF和CHO细胞生长旺盛 ,超微结构无变化 ;经抗龋IgY牙膏处理的HSF和CHO细胞加药后部分细胞出现变圆或脱落、细胞生长缓慢和细胞器变性等变化 ,第 2天恢复良好生长状态。结论 :抗龋IgY对体外培养细胞生长、形态无影响 ;抗龋IgY牙膏中的某些成分可能对培养细胞有短暂的不良影响。

IgY技术及其医药应用:理论基础

卵黄抗体技术 (IgY技术 )正在成为生物技术领域和医药研究中的新热点 ,并且越来越得到国内同仁的重视。因为卵黄抗体 (IgY)化学性质稳定 ,产量高、成本低 ,以及动物种系发生学距离的优势 ,更适于生产特异性抗体 ,具有开发功能性食品和新药的潜能。该文述及该技术发展的背景和理论基础 ,详细综述了禽类的免疫学系统、IgY技术的生物学基础。

鸡卵抗体(IgY)理化特性的研究

本文研究了抗脊髓灰质炎病毒Ⅲ型鸡卵抗体（IgY）的理化特性，实验证明IgY在室温条件下能保持活性6个月，经巴氏消毒后抗体活性不丧失，并且具有很好的耐酸性，研究结果提示特异性IgY可作为良好的婴幼儿食品添加剂。

抗轮状病毒IgY的研制

目的用鸡卵黄制备抗轮状病毒（ＲＶ）免疫球蛋白，预防和治疗婴幼儿ＲＶ感染。方法制备ＲＶ 抗原，通过不同途径免疫母鸡，几种纯化方法联合应用从鸡卵中提取特异性鸡卵黄抗体（ＩｇＹ），进行理化学检定及动 物效力实验。结果免疫母鸡均可产生特异性ＩｇＹ，纯度可达９１％以上，产量为４４ｍｇ／蛋；可保护乳鼠兔受ＲＶ攻击； ＩｇＹ耐热、耐酸，室温保存半年、４℃两年效价不变。结论已成功地应用ＲＶ免疫母鸡制备出高效价特异性抗ＲＶ－ＩｇＹ。

鸡卵黄抗体IgY的分离纯化及鉴定

采用水溶稀释法结合硫酸钠二次盐析沉淀法分离纯化鸡卵黄中蛋白IgY,实验中比较了不同pH值的水溶稀释液对卵黄除脂效果的影响;并采用SDS-PAGE及western blotting对提取产物进行鉴定。结果显示,pH值5.2水溶稀释液除脂效果最好,IgY得率最高。实验优化了鸡卵黄抗体IgY分离纯化技术,得到的IgY产量高、纯度高,特异性强;此外,水溶稀释法制备IgY具有利用小体积样品获得大量蛋白及纯化效率高的优点。

抗大肠杆菌的IgY的分离制备及功能性测定

以大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）为抗原，对蛋鸡进行免疫，其ＩｇＹ的活性提高３２倍，并能有效地抑制Ｅ．ｃｏｌｉ的生长。功能性实验表明，６０℃以下，ｐＨ４以上免疫球蛋白活性基本没有损失，在低浓度胃蛋白酶存在下，仍具有较高的活性。

鸡蛋黄抗体IgY的急、慢性毒性实验

目的 :通过观察实验动物使用鸡蛋黄抗体IgY后的急、慢性毒性反应 ,评估鸡蛋黄抗体IgY的安全性。方法 :昆明小鼠 ,雌雄各 10只 ,鸡蛋黄抗体IgY喷漱液经口灌胃连续 1周 ,并记录动物中毒症状及死亡情况。Wistar大鼠 80只 ,分为受试物低、中、高剂量组 ,经口灌胃 30d后 ,观察大鼠血液生化指标及脏器变化。结果 :1周内小鼠未见明显中毒症状和死亡发生。 30d后大鼠临床检查、血液、生化、脏器组织病理学等项目测定均无异常。结论 :按急性毒性分级 ,IgY属无毒级类物质 ,且无慢性毒性表现。

卵黄抗体IgY检测血吸虫病人循环抗原的初步研究

目的探讨抗可溶性虫卵抗原(SEA)卵黄抗体(IgY)检测血吸虫循环抗原的应用价值。方法以纯化的鸡IgY作为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(S-ELISA)检测急、慢性血吸虫病人和健康人血清,并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验法(SEA-ELISA)作比较。结果S-ELISA测得SEA浓度(y)与吸光度(A450)值(x)呈明显的正相关(y=459.22x-108.14,r=0.9481)。急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100.00%(9/9),慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84.44%(38/45),健康人的特异性为96.00%(48/50)。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论S-ELISA具有较好的敏感性和特异性,可用于血吸虫病免疫诊断。

抗金黄色葡萄球菌IgY的酶解稳定性及活性研究

目的:考察抗金黄色葡萄球菌特异性IgY的酶解稳定性和酶解产物的活性。方法:以灭活的金黄色葡萄球菌免疫产蛋母鸡,抗体经水稀释及盐析分离纯化。抗体在不同条件下经胃蛋白酶或胰蛋白酶消化。抗体及酶解产物的特异性和活性分别用ELISA法和凝集法检测,酶解产物用SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。结果:免疫产生的抗体具有特异性,能与金黄色葡萄球菌凝集而抑制其生长。分离纯化后抗体纯度与标准IgY相近。IgY在pH<4时完全酶解;pH等于4时部分酶解生成Fab片断,具有特异性和凝集活性;pH>4时,抗体稳定,不发生酶解。结论:抗金黄色葡萄球菌特异性IgY及其酶解生成的Fab片断,具有特异性和抑菌活性,有望代替抗生素用于细菌感染性疾病的治疗。

抗IL-1β和TNF-αIgY抗体治疗豚鼠过敏性支气管哮喘的机制

目的：探讨抗IL-1β和TNF-αIgY抗体雾化吸入治疗豚鼠过敏性支气管哮喘的机制。方法：Hartly豚鼠随机分为雾化吸入生理盐水的正常对照组（C组），以及雾化吸入卵清白蛋白（OVA）建立过敏性哮喘模型的哮喘模型组（M组）、1.0％抗IL-1β和TNF-αIgY模型豚鼠治疗组（ Z1组）和布地奈德混悬液模型豚鼠治疗组（ Z2组）。各组豚鼠末次治疗结束后2、4、8、24 h心脏穿刺取血；收集支气管肺泡灌洗液（ BALF）。美蓝及伊红染色计数血液嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞、嗜碱性粒细胞。 ELISA法测定血浆和BALF中IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β1、IgE的含量。结果：Z1组嗜酸性粒细胞在2～8 h低于M组。 Z1组血浆IL-1β（4、24 h）、IL-16（2、4、24 h）、TGF-β1（4～24 h）、IgE（24 h）较M组显著降低（P＜0.05），而在BALF中IL-1β和TNF-α（2～8 h），IL-4、IL-6、IL-8和IL-13（4～24 h），IL-16（8 h）、TGF-β1和IgE （4～8 h）显著降低于M组，尤其是IL-1β和TNF-α在2 h就开始显著降低（ P＜0.05）。 IL-1β及TNF-α与IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TGF-β1、IgE等呈正相关（ P＜0.05）。结论：抗IL-1β和TNF-αIgY雾化吸入减轻OVA诱导的豚鼠过敏性哮喘炎症可能是通过降低多种过敏性炎症因子浓度而实现。

水稀释法分离卵黄IgY

用水稀释法分离蛋黄中的免疫球蛋白 Ig Y,研究稀释度、稀释液 p H和温浴时间对分离效果的影响 .结果表明 ,用 7倍无菌水稀释蛋黄 ,调节 p H=5.0 ,在 4℃下温浴 5h,可获得较好的分离效果 ,Ig Y的回收率为 92 % .分离的 Ig Y用硫酸铵和硫酸钠盐析纯化 ,Ig Y的纯度达到 97% ,回收率达到 94% .通过对 Ig Y稳定性的研究表明 ,Ig Y对热、酸和冻融有良好的稳定性 .

抗HPV16L1IgY抗体的制备及活性检测

目的制备出高特异性的抗HPV16L1IgY抗体,为HPV16L1蛋白的检测提供一种方法。方法用纯化HPV16L1蛋白免疫母鸡,分别收集鸡蛋,4℃下保存备用;经聚乙二醇法提取鸡蛋黄中IgY抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价的测定;采用免疫组织化学法通过对转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中L1蛋白的检测评价IgY抗体的特异性。结果3次免疫之后,IgY抗体效价达到1:10240,同时可特异性与转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中EGFP-HPV16L1结合。结论采用HPV16L1蛋白免疫母鸡,成功获得了较高效价的特异性IgY抗体,并可用于HPV16L1蛋白的细胞学检测,为IgY抗体在免疫组织化学检中的应用提供实验依据。