活血化瘀药物通脉灵及其有效单体IH764—3抗肺纤维化作用的实验研究

本文主要介绍丹参提取的有效单体(IH764-3)抗肺纤维化的实验研究。结果表明IH764-3治疗组动物的肺系数,羟脯氨酸,表面活性物质含量,FGF活性均明显低于模型对照组。电镜观察证实治疗组肺胶原形成细胞数量,炎性细胞渗出,胶原纤维和弹力纤维都较模型组明显减少,肺泡毛细血管和肺泡膈内小血管形态较正常,Ⅱ型肺泡上皮细胞的数量和形态较正常。以上结果证明IH764-3对博莱霉素诱致的肺炎、肺纤维化具有明显的预防和治疗作用。

IH764—3对胶原生物合成中脯氨酰羟化的作用

从13天龄鸡胚胎提取原胶原脯氨酰羟化酶,在FeSO_4、2-酮戊二酸、抗坏血酸、过氧化氢酶等辅助因子存在下,将底物(Pro-Pro-Gly)10·9H_2O中的Pro羟化成羟脯氨酰(HOPro)的羟化反应体系,观察IH764-3对胶原生物合成中脯氨酰羟化作用的影响。结果表明,脯氨酰羟化酶催化的原胶原脯氨酰底物(Pro-Pro-Gly)10·9H_2O的羟基化作用可被IH764-3所抑制。在酶促反应标准条件下,IH764-3为0.24mmol/L时,对脯氨酰羟化的抑制率为50.78±16.03％。本实验还证明,IH764-3不能与脯氨酰羟化酶结合,提示IH764-3对酶促脯氨酰羟化的抑制是由于其同酶反应所需的Fe^(2+)形成络合物所致。平衡移动法表明,IH764-3与Fe^(2+)形成的稳定络合物的Fe(2+):IH764-3摩尔比为1:3,表现稳定常数Ks=1.04×10^(12)。

丹参单体IH764-3通过下调H_2O_2刺激的肝星状细胞FAK水平影响MMP-13和TIMP-1的表达

目的:研究丹参单体IH764-3对H2O2刺激的肝星状细胞(HSC)基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响以及此过程中粘着斑激酶(FAK)的变化。方法:应用RT-PCR方法检测MMP-13及FAK mRNA表达,原位杂交方法检测TIMP-1mRNA水平,Western blotting技术检测FAK及TIMP-1蛋白表达。结果:IH764-3干预组的MMP-13mRNA在2h的表达强度明显上调,而TIMP-1mRNA表达明显受抑,FAK mRNA表达强度明显下调;IH764-3干预24h组FAK及TIMP-1蛋白表达受抑制。结论:丹参单体IH764-3可以诱导MMP-13表达,抑制TIMP-1表达,下调FAK表达是其中的机制之一。

丹参单体IH764—3对百草枯染毒大鼠肺组织基质金属蛋白酶表达的影响

目的观察急性百草枯（PQ）染毒大鼠肺组织基质金属蛋白酶2（MMP-2）、膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）的表达，以及丹参单体IH764—3对上述指标的影响。方法健康成年SD大鼠90只，随机分为正常对照组（A组，6只）、百草枯染毒组（B组，42只）及丹参单体IH764—3治疗组（C组，42只）。B组及C组按50mg／kg给予PQ灌胃染毒，A组给予相应容积的生理盐水灌胃；C组每日给予40mg／kg丹参单体IH764—3腹腔注射，B组每日给予等量生理盐水腹腔注射。分别于染毒后第1、3、7、14、21、28、35天RT．PCR法检测大鼠肺组织MMP-2、MT1。MMP的表达，以及丹参单体IH764—3对上述指标的影响。结果（1）MMP-2mRNA：与A组（0．305±0．045）相比，B组MMP-2mRNA表达从第1天明显增强（0．654±0．077），并达最高峰，从第3天逐渐下降（0．623±0．051），7天（0．637±0．024）、14天（0．533±0．043）和21天（0．552±0．050）一直处于较高水平，与A组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。C组大鼠MMP．2mRNA表达仅于第1天（0．523±0．074）、第3天（0．567±0．097）和第7天（0．514±0．058）与A组比较有轻度升高，但较B组为低，差异有统计学意义（P〈0．01），第3天达最高峰后逐渐下降；第1、7、14（0．359±0．018）、21天（0．374±0．020）均较B组同时段明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）MT1-MMP mRNA：与A组（0．391±0．058）相比，B组MT1-MMPmRNA表达从第1天明显增强（0．796±0．021），第3天（0．762±0．043）、第7天（0．590±0．010）和第14天达高峰（0．803±0．076），第21天（0．680±0．034）与A组比较有明显上升，差异有统计学意义（P〈0．01）。C组MT1-MMPmRNA表达从第1天有所增强（0．594±0．010），但较B组为低，第3天（0．653±0．044）达高峰，此后下降，第21天（0．564±0．009）仍高于A组，差异有统计学意义（P〈0．01），第7天（0．490±0．014）和第14天（0．504±0．040）与A组比较亦较之为高，差异有统计学意义（P〈0．05）；第1天和第14天C组均较B组明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01），第3、7、21天C组均较B组明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PQ灌胃染毒后，可使大鼠肺组织MMP-2和MT1-MMP表达发生改变，使ECM的合成和降解失衡，可能是诱导肺纤维化形成的原因之一；丹参单体IH764—3在一定程度和阶段影响了MMP-2和MT1-MMP的表达，从而使肺纤维化病变减轻。

丹参单体IH764-3对血管平滑肌细胞细胞间黏附分子-1和核因子-κB的影响

目的研究丹参单体IH764-3对肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的血管平滑肌细胞(SMC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达和核因子-κB(NF-κB)激活的影响,探讨丹参单体IH764-3对动脉粥样硬化(AS)的防治机制。方法体外培养大鼠血管SMC;用流式细胞仪检测血管SMC表面ICAM-1的表达量;免疫细胞化学方法检测血管SMC NF-κB p65的分布情况。结果TNF-α能使血管SMC ICAM-1表达显著增加,丹参单体IH764-3可使TNF-α的这种作用明显减弱。免疫细胞化学染色显示,TNF-α促使SMC NF-κB向细胞核内转移,丹参单体IH764-3能部分阻止TNF-α诱导的NF-κB核内转移。结论丹参单体IH764-3抗AS机制之一是通过抑制血管SMC ICAM-1表达,这种抑制作用是通过部分抑制NF-κB的核移位实现的。

细胞外信号调节激酶在丹参单体IH764-3诱导肝星状细胞凋亡中的作用

目的:探讨丹参单体IH764-3对H2O2刺激的肝星状细胞(HSCs)增殖、凋亡等细胞行为的影响及细胞外信号调节激酶1(ERK1)在其中的调节作用。方法:应用体外细胞培养技术,采用直接细胞计数法、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测定HSCs增殖;透射电镜、膜联蛋白(Annexin-V)/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术测定HSCs凋亡;分别应用Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定ERK1蛋白及其mRNA的表达。结果:①H2O2具有刺激HSCs增殖的作用;②丹参单体IH764-3剂量依赖性抑制H2O2刺激的HSCs增殖;③Annexin-V/PI检测显示,10 mg/L,20 mg/L,30 mg/L及40 mg/L IH764-3干预48 h后各组凋亡率分别为6.35%、9.28%、15.10%、19.69%,而H2O2组为2.30%;30 mg/L IH764-3干预HSCs不同时间(12 h、24 h、48 h)的凋亡率分别是6.73%、10.34%、15.10%,呈时间依赖性;④丹参单体IH764-3干预组,HSCs的ERK1蛋白及其mRNA表达下调。结论:丹参单体IH764-3可以抑制HSCs增殖并诱导其凋亡;这种作用与其抑制ERK1蛋白和ERK1mRNA表达有关。

丹参单体IH764-3对糖尿病肾病大鼠水通道蛋白表达的影响

目的观察丹参单体IH764-3对糖尿病肾病大鼠肾脏水通道蛋白(AQP)2、AQP4及肺脏AQP1表达的影响,探讨丹参单体IH764-3对糖尿病肾病大鼠水液代谢异常的调节机制。方法从60只SD大鼠中随机选择10只作为正常组,剩余50只采用高糖高脂饲料刺激加小剂量STZ诱导糖尿病肾病大鼠模型,将成模大鼠30只随机分为模型组、对照组、研究组各10只。对照组给予卡托普利灌胃,研究组给予卡托普利灌胃同时腹腔注射丹参单体IH764-3,正常组和模型组灌胃等量蒸馏水。灌胃16周末处死大鼠,留取肾、肺组织行病理观察,采用免疫组化法、Western blot印记法、RT-PCR法检测肾组织中AQP2、AQP4及肺组织中AQP1蛋白及mRNA表达情况。结果肾组织中AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达量模型组均明显高于正常组(P均<0.05),对照组、研究组均明显低于模型组(P均<0.05),研究组均低于对照组(P均<0.05)。肺组织中AQP1蛋白及mRNA表达量模型组均明显低于正常组(P均<0.05),研究组与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05),对照组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 AQP2、AQP4在肾脏组织表达的增多及AQP1在肺脏组织表达的减少可能是导致糖尿病水液代谢异常的重要机制之一。丹参单体IH764-3对水通道蛋白的表达有调节作用,这可能是其调节水液代谢作用的机制,也是其防治糖尿病肾病的基础。

丹参单体IH764-3对胆总管结扎大鼠胶原降解的作用及其机制

目的 研究丹参单体IH764-3抗胆总管结扎大鼠肝纤维化作用,观察其对胶原降解的影响。方法 40只大鼠随机分为对照组、模型组及IH764-3预防组。预防组腹腔注射IH764-3 40mg·kg^(-1)·d^(-1),另两组注射等剂量生理盐水,共14天。应用免疫组织化学方法检测TIMP-1、TGF-β_1。结果 胆总管结扎大鼠14天后有明显肝纤维化形成,IH764-3可使肝组织内羟脯氨酸减少40.6％,同时TIMP-1、TGF-β_1蛋白质表达分别下降36.2％和32.5％。结论 丹参单体IH764-3可以减轻胆总管结扎大鼠肝纤维化程度,其抗肝纤维化作用机制之一是抑制TIMP-1和TGF-β_1蛋白的表达。

丹参单体IH764-3促进H_2O_2刺激的鼠肝星状细胞胶原降解

目的观察丹参单体IH764-3对鼠肝星状细胞株(HSCs)基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及其组织抑制因子(TIMP-1)表达的影响。方法应用体外细胞培养技术,用RT-PCR检测HSCsMMP-13mRNA水平;原位杂交和Westernblotting技术分别检测上述细胞TIMP-1mRNA和蛋白水平。结果IH764-3干预2h组MMP-13mRNA的表达强度明显上调,同时TIMP-1mRNA表达受抑制;IH764-3干预24h组TIMP-1蛋白表达受抑制。结论丹参单体IH764-3诱导HSCsMMP-13表达,抑制其TIMP-1表达是其抗肝纤维化的作用机制之一。

丹参单体IH764-3对马兜铃酸致人肾小管上皮细胞损害的保护机制研究

目的探讨丹参单体IH764-3在马兜铃酸(aristolochic acid,AA)导致人肾小管上皮细胞系(HK-C)损害中的保护作用及机制。方法以含体积分数0.10胎牛血清的DMEM培养液培养HK-C细胞72 h。实验分为3大组(8小组),AA组在培养液中加入浓度为20 mg/L的AA;观察组在培养液中加入浓度为20 mg/L的AA和不同浓度丹参单体IH764-3;对照组培养液中不加AA。培养24、48、72 h后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各细胞培养液中转化生长因子β1(TGF-β1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、金属蛋白酶2(MMP-2);采用MTT法观察HK-C细胞活性,实时荧光定量PCR技术检测凋亡蛋白Caspase-3mRNA的表达情况。结果 AA刺激后,诱导TGF-β1、TIMP-1、PAI-1表达增加,MMP-2表达减少(P<0.05)。经丹参单体IH764-3干预后,TGF-β1、TIMP-1、PAI-1表达减少,MMP-2表达增加,其中以IH764-3 80 mg/L效果最佳(P<0.05)。AA组及观察组较对照组HK-C细胞的活性均受到抑制,细胞的凋亡率增加,Caspase-3mRNA表达增高(P<0.05)。观察组较AA组细胞活性明显增高,细胞的凋亡率明显下降,Caspase-3mRNA表达降低,观察组中以丹参单体IH764-3 80 mg/L效果最佳(P<0.05)。结论丹参单体IH764-3可明显提高HK-C细胞抵抗AA导致细胞损伤的能力,保护HK-C细胞,其具体途径可能与抑制TGF-β1、TIMP-1、PAI-1、Caspase-3mRNA,升高MMP-2的表达而发挥作用。

丹参单体IH764-3通过抑制白细胞激活产物减轻人脑微血管内皮细胞的缺氧-复氧损伤

目的探讨丹参单体IH764-3在白细胞介导的脑内皮细胞缺氧-复氧损伤中的作用及机制。方法通过MTT法检测人脑微血管内皮细胞(HBMVEC)的存活;明胶酶谱法检测白细胞MMP-9的释放;荧光定量法检测白细胞内活性氧水平;ELISA法检测白细胞释放细胞因子的水平。结果缺氧-复氧使HBMVEC存活下降,当复氧时加入白细胞激活产物使损伤加重,同时加入IH764-3则具有保护作用。缺氧-复氧使白细胞释放MMP-9增加;细胞内活性氧水平升高;释放的TNF-α、IL-1α、IL-2、IFN-γ增加。IH764-3可呈剂量依赖性减少由缺氧-复氧所致的白细胞分泌MMP-9、ROS和细胞因子增加。结论IH764-3能够减轻白细胞介导的HBMVEC的缺氧-复氧损伤,在脑缺血前及缺血后干预中具有潜在应用价值。

通脉灵有效单体IH764-3对成纤维细胞增殖和功能的影响

通过观察IH764-3对培养成纤维细胞的生长曲线、3H-TdR参入、钙调素水平、生长周期DNA含量、3H-脯氨酸参入、纤维连结蛋白、血小板凝血酶敏感蛋白含量及超微结构的影响,证明IH764-3对成纤维细胞增殖及其胶原等基质合成与分泌功能有直接的抑制作用,探讨了IH764-3抗纤维化的部份作用机理。

丹参单体IH764-3抗肝纤维化作用研究

目的:研究丹参单体IH764-3在大鼠体内、外的抗肝纤维化作用,重点观察对胶原降解的影响。方法:40只SD大鼠随机分为3组,对照组10只,模型组及IH764-3组各15只。以胆总管结扎法(BDL)建立肝纤维化模型,用免疫组化法检测大鼠组织血细胞金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)和肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量。结果:BDL结扎14d后有明显肝纤维化形成。IH764-3使肝组织Hyp减少40.6％,同时TIMP-1、TGF-β_1蛋白质表达分别下降36.2％和32.5％;在体外使TIMP-1、TGF-β_1阳性肝星状细胞数目减少。结论:丹参单体IH764-3具有抗肝纤维化作用,其机制之一是抑制TIMP-1和TGF-β_1蛋白的表达。

丹参单体、三氟拉嗪对视网膜色素上皮细胞增殖抑制的研究

目的研究丹参单体(IH764-3)和三氟拉嗪对体外培养的兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞增殖的抑制作用。方法将传代培养的RPE细胞分别加药培养24h、48h、72h、96h、120h,应用二甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同剂量丹参单体和三氟拉嗪对RPE细胞的抑制作用,进一步检测两药半数抑制剂量(IC50)联合应用对RPE细胞的抑制作用。结果丹参单体和三氟拉嗪对RPE细胞的增殖均有抑制作用,呈时间及剂量依赖性,各剂量及各时间点相比差异均有显著统计学意义(均为P<0.01),丹参单体的IC50为15.22μmol·L-1(2.4mg·L-1),三氟拉嗪的IC50为18.09μmol·L-1。联合用药120h对RPE的抑制率达87.23%,联合用药后各时间点与单独应用丹参单体及三氟拉嗪的抑制率比较,差异也均有显著统计学意义(均为P<0.01)。结论丹参单体和三氟拉嗪对RPE细胞的增殖均有抑制作用,两药联合后可产生协同作用,为以后两种药物的联合体内试验提供了一定的实验基础。

丹参活性成分的现代中药药理研究进展

对传统中药丹参中丹参酮、丹酚酸、丹参单体 IH76 4 - 3三种主要活性成分及其近年来的中药药理学研究进展进行综述 。

丹参单体、三氟拉嗪防治兔眼增生性玻璃体视网膜病变的实验研究

目的评价丹参单体和三氟拉嗪对实验性兔增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的防治作用。方法有色兔81只随机分为6组:A至C组为药物防治组,E至G组为药物毒性观察组;从A至C组、E至G组中兔另一非实验眼分别选对照组:D组和H组。A至D组眼内注入视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞后分别注入三氟拉嗪、丹参单体、三氟拉嗪加丹参单体混合液、磷酸盐缓冲液;E至H组注入磷酸盐缓冲液后分别注入三氟拉嗪、丹参单体、三氟拉嗪加丹参单体混合液、磷酸盐缓冲液。通过间接检眼镜观察A至D组玻璃体混浊、视网膜脱离情况,通过间接检眼镜、光学显微镜观察E至H组视网膜病理学改变。结果给药后1d,A组发生Ⅱ级玻璃体混浊8眼,B组Ⅱ级玻璃体混浊6眼,C组Ⅱ级玻璃体混浊7眼,D组Ⅱ、Ⅲ级玻璃体混浊各10眼,3个实验组与D组相比差异均有显著统计学意义(均为P=0.00)。给药后3d,A组Ⅱ级玻璃体混浊3眼,B组及C组未见发生Ⅱ级及以上玻璃体混浊,D组Ⅱ级玻璃体混浊10眼、Ⅲ级玻璃体混浊6眼,3个实验组与D组相比差异也均有统计学意义(均为P=0.00)。给药后5d,A组、B组及C组均未见发生Ⅱ级及以上玻璃体混浊,D组Ⅱ级玻璃体混浊8眼,3个实验组与D组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。给药后5d,D组Ⅱ级PVR8眼、Ⅲ级PVR2眼,3个实验组无PVR发生,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。给药后7d,D组Ⅱ级PVR14眼、Ⅲ级PVR6眼,各实验组无PVR发生,差异也均有统计学意义(均为P<0.05)。给药后14d,A组Ⅱ级PVR3眼,B及C组各有Ⅱ级PVR2眼,D组Ⅱ级PVR2眼、Ⅲ级PVR16眼、Ⅳ级PVR2眼;3个实验组与D组相比差异均有统计学意义(均为P=0.00)。给药后21d,D组Ⅲ级PVR12眼、Ⅳ级PVR8眼;3个实验组PVR发生情况无变化,3个实验组与D组比较差异均有统计学意义(均为P=0.00)。给药后28d,D组Ⅳ级PVR14眼、Ⅲ级PVR6眼,3个实验组PVR发生情况无变化,所有实验组与D组比较,差异也均有统计学意义(均为P=0.00)。E至H组在整个观察期内未见毒性病理学改变。结论三氟拉嗪、丹参单体、三氟拉嗪与丹参单体联合可有效预防实验性PVR。

丹参在兔眼小梁切除术后抗增生作用的研究

目的探讨丹参单体（IH764—3）在兔眼小梁切除术后的抗增生作用。方法将32只新西兰大耳白兔随机分为4组，每组8只：空白对照组、阳性对照组、实验I组、实验Ⅱ组，双眼均行标准小梁切除术，实验I组、Ⅱ组分别于术后结膜下注射2g·L。或5g·L。丹参单体0．2ml，术后第1周1次／d，第2周1次／2d，共10次。空白对照组和阳性对照组同样注射等量生理盐水和25g·L-1的5．氟脲嘧啶（5-FU）。术前及术后3d、7d、15d、30d各组观察眼压、滤过泡、滤过道开放情况及瘢痕形成的组织结构、增生细胞核抗原阳性细胞计数等。结果观察术后7d、15d、30d功能性滤过泡数、眼压控制情况、增生细胞核抗原（PCNA）阳性细胞等，实验Ⅱ组疗效均优于其他3组。且未发现结膜伤口漏或角膜上皮细胞损伤等副作用。结论丹参单体在小梁切除术中有抑制成纤维细胞增生的作用。丹参单体应用于小梁切除术中及术后，其抗增生能力较5-Fu强，而副作用小，并发症少。