赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)MHC IIB基因的克隆与表达多态性分析

主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex，MHC）是脊椎动物体内重要的非特异性免疫基因之一。为了研究赤点石斑鱼的MHC基因的结构与表达特性，本研究运用RACE，Realtime PCR及SSCP等技术，首次成功克隆获得赤点石斑鱼（Epinephelus akaara）非特异性免疫因子MHC IIB基因的4个cDNA全序列，序列全长为1195～1355bp，含有3’UTR、启动子、多肽结合区（β1）、IGC区（β2）、跨膜区、胞质区和5’UTR区，编码区大小为750bp。氨基酸序列分析发现赤点石斑鱼MHC IIB分子具有经典MHC蛋白分子的空间结构，在多肽结合区存在极其丰富的变异，β1区由1个α螺旋与4个反向平行的β折叠构成多肽结合区，β2区由多个β折叠构成2个反向平行的三明治结构。利用SSCP技术研究了赤点石斑鱼MHC IIB的表达多态性，发现其在头肾、心、肝等12个组织器官中均能有效表达，表达多态性也异常丰富。此外，根据MHC IIB分子中相对保守的IGC区氨基酸序列构建了脊椎动物的系统进化树，也表明了该分子的IGC区氨基酸序列可以作为研究鱼类物种间进化关系的良好标记。

绵羊激活素受体IIB(ActRIIB)基因的克隆、序列分析及原核表达

[目的]旨在克隆绵羊激活素受体IIB(ActRIIB)基因,并构建原核表达载体进行体外表达,为进一步验证功能奠定基础。[方法]以绵羊肝脏组织为材料,以提取总RNA反转录得到的cDNA为模板,利用同源序列克隆技术,对绵羊ActRIIB基因的cDNA全长进行克隆,并对其进行生物信息学分析。再根据克隆序列设计引物,将其与原核表达载体pET41a连接,构建重组表达质粒pET41a-ActRIIB,经IPTG诱导后进行表达鉴定。[结果]扩增获得绵羊ActRIIB基因cDNA全长1 564 bp(Genbank登陆号为:JX422071.1),最大开放阅读框为1 539 bp,共编码512个氨基酸;其氨基酸序列与牛的同源性最高(99.6%),ActRIIB的C末端区域高度同源且属于TGFβ家族。原核诱导表达获得符合预期大小(约92 kD)并带有组氨酸标签序列的ActRIIB重组蛋白。[结论]绵羊ActRIIB基因的克隆和表达为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

鲤浮肿病毒IIb基因亚型的鉴定

2018年6月,河南某鲤养殖场部分池塘暴发"鲤急性烂鳃病"疫情,发病水温25℃,死亡率为50%。从该养殖场分别采集发病鲤和无症状鲤共4个样品进行鱼体解剖、细菌和寄生虫检测、病理组织观察、PCR检测和系统进化分析。结果显示,发病鲤鱼体出血、头萎缩变形、吻端与鼻之间凹陷、头部骨骼不平整、体色发黑、鳃边发白坏死,肾脏肿大至鳔间隔;组织病理学检查可见鳃小片间隙及鳃小片顶端大量细胞增生,鳃丝呈棒状;病鱼体表和鳃中并未见任何寄生虫,细菌学检测也未分离到任何与鲤烂鳃病相关的病原菌;Real-time PCR和nested PCR方法从发病鲤和无症状鲤中检出鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)核酸阳性;基于CEV P4a的357 bp基因片段的遗传进化分析结果表明,本次试验检测到两种基因亚型CEV,从发病鲤中检出IIa基因亚型CEV,从无症状鲤中检出IIb基因亚型CEV,这是中国首次报道检出IIb基因亚型CEV。