黄芩苷通过抑制IL1R2表达对A549肺癌细胞增殖、迁移及凋亡的作用及机制研究

目的探究黄芩苷通过抑制IL1R2在A549肺癌细胞增殖、迁移及凋亡中的作用,并探究可能作用机制。方法体外培养A549肺癌细胞,转染si-IL1R2质粒分为对照组、低表达IL1R2组、黄芩苷+低表达IL1R2组、过表达IL1R2组、黄芩苷+过表达IL1R2组,对照组正常培养细胞,含有黄芩苷的实验组采用200mol/L的黄芩苷处理24h。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定IL1R2表达;采用CCK-8法、Transwell、流式细胞法分别观察细胞增殖、迁移能力及凋亡情况;采用Western Blotting法观察各组白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)表达。结果IL1R2低表达组干扰后A549细胞的增殖受到抑制,IL1R2过表达组则明显促进细胞增殖;低表达IL1R2组较对照组细胞迁移个数降低,过表达IL1R2组细胞迁移个数较对照组升高,与低表达IL1R2组细胞迁移个数相比,黄芩苷+低表达IL1R2组细胞迁移个数降低明显;与过表达IL1R2组迁移个数相比,黄芩苷+过表达IL1R2组细胞迁移个数降低;与对照组相比,过表达IL1R2组、黄芩苷+过表达IL1R2组细胞凋亡率均降低;黄芩苷+过表达IL1R2组较过表达IL1R2组细胞凋亡率升高;低表达IL1R2组IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子表达明显下降,过表达IL1R2组各组细胞因子表达明显升高,黄芩苷+过表达IL1R2组各组细胞因子表达较过表达IL1R2组降低。结论黄芩苷通过抑制IL1R2表达抑制肺癌细胞的A549肺癌细胞增殖、迁移,促进肺癌细胞凋亡。

人肝细胞毛细胆管表达IL-2R_α的初步研究

目的了解人肝细胞毛细胆管是否表达IL-2Rα。方法对正常人肝组织、慢性乙型肝炎等不同病种人肝组织进行IL-2Rα标记,通过免疫组织化学染色、免疫荧光化学染色及免疫电镜三种方法观察其表达。结果免疫组化染色法和免疫荧光染色法显示IL-2Rα标记人肝细胞膜毛细胆管面定位正确,无非特异性染色,而肝细胞膜的血窦面、细胞浆、细胞核不被IL-2Rα标记。酶标记免疫电镜显示人肝细胞膜毛细胆管面有明显电子致密物沉积。结论人肝组织毛细胆管确实表达IL-2Rα,并且有很强的特异性和灵敏度。

人急性B淋巴细胞白血病-NOD/SCID/IL2rγnull新生小鼠异种移植模型的建立

本研究旨在应用NOD/SCID/IL2rγnull新生小鼠建立人急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的异种移植模型。NOD/SCID/IL2rγnull新生期(出生48 h之内)小鼠经亚致死剂量(100 cGy)137Cs全身照射后,由面静脉输注FACSAria流式细胞仪分选纯化的B-ALL患者骨髓CD3-CD4-CD8-CD34+CD19+细胞,于移植后8-12周用流式细胞术检测受鼠外周血、骨髓和脾脏中人源细胞的植入水平及其免疫表型,并通过HE染色评价人源B-ALL细胞在受鼠各组织器官中的迁移浸润能力。结果表明,在接受B-ALL患者CD34+CD19+细胞移植的受鼠外周血、骨髓和脾脏细胞中,不仅检测到了不同程度的人源B-ALL(huCD45+CD19+)细胞的植入〔(83.36±10.05)%,(93.88±5.05)%,(88.31±5.01)%〕,而且植入细胞具有与B-ALL患者相似的细胞形态和免疫表型特征。此外,人源B-ALL细胞广泛迁移浸润到受鼠的肝脏、肺脏、肾脏和脑等组织器官中。结论:NOD/SCID/IL2rγnull新生小鼠模型能够支持B-ALL患者CD34+CD19+细胞的高水平植入,是对人B-ALL进行体内功能性研究的新型异种移植模型。

微波对TIL及其IL－2Rα表达影响的实验研究

应用２４５０ＭＨｚＣＷ微波，以不同剂量、不同时段辐照荷瘤鼠，观察微波对ＴＩＬ细胞及其亚群和ＩＬ－２Ｒα作用。结果发现：不同的微波辐照剂量，其对抗肿瘤免疫作用不尽相同。０．２ｍｗ·ｃｍ－２微波辐照，属非热效应的剂量，对抗肿瘤免疫无明显作用；２ｍｗ·ｃｍ－２微波辐照，可使抗肿瘤免疫滞后增强；２０ｍｗ·ｃｍ－２微波辐照，对肿瘤细胞具杀伤作用，但连续辐照８ｄ以上时，则出现抗肿瘤免疫的抑制，提示微波应用于肿瘤治疗时，采用２０ｍｗ·ｃｍ－２微波定量辐照应少于８ｄ。

中华大蟾蜍卵母细胞系统IL-2受体mRNA体外翻译的研究

本文采用中华大蟾蜍卵母细胞(BBO)体外翻译系统研究了不同来源细胞IL—2RαmRNA的翻译活性。显微注射mRNA的BBO用Barths液经20℃培养可获得最高翻译效率。与非州爪蟾卵母细胞的比较表明,两系统的体外翻译效率相近。对PHA刺激的人、脾淋巴细胞IL—2RαmRNA的合成动力学的观察表明,IL—2RαmRNA刺激后6小时即出现,9小时高达高峰,随后逐渐下降。放射受体分析显示,注射IL—2RαmRNA后,IL—2Rα也可表达于BBO膜表面。

重组CHO细胞高效表达人IL-2Rα链的研究

将人IL-2Ra cDNA导入CHOdhfr^-细胞,经ELISA对180个重组克隆的鉴定,筛选出13株高产克隆,其OD值均大于0.80。再经MTX扩增基因试验,获得了3株更高表达水平的克隆,其OD值分别为1.95、1.86及1.66。稳定性试验表明:MTX诱导前的高效表达水平在30代次时未见改变,MTX的扩增基因效果可维持15—20代次,rIL-2Ra的分子量为50—55kd,具有Tac抗原性和结合IL-2的能力。Southern分析证实:MTX是通过扩增外源基因的份额来提高重组产物的表达水平。本试验为发酵培养重组CHO细胞、大量制备IL-2Ra蛋白奠定了坚实基础。

Poly(A)信号及3’非转译区对IL-2Rα表达调控的影响

将IL-2Ra cDNA3’端系列缺失克隆的重组质粒导入CHO细胞,经DNA、RNA及蛋白质印迹分析表明:缺3’非转译区(3’UTR)及Poly(A)信号序列的缺失子DNA,可以整合到受体细胞染色体上,但不能形成稳定的mRNA及表达rIL-2Ra;IL-2Ra cDNA上1297bp处的ATTAAA序列独立地显示出Poly(A)信号功能,相应的缺失子DNA能转录形成稳定的mRNA和表达rIL-2Ra。结果表明:poly(A)尾是位于3’端的转译调控因子,3’UTR与IL-2Ra cDNA的表达调控密切相关。

IL-2Rα链cDNA3’端系列缺失克隆的构建

运用Bal 31末端缺失技术将人IL-2Rα cDNA进行3’—5’的单向缺失,获得了IL-2RαcDNA3’端的系列缺失子。经DNA顺序分析表明:这些缺失克隆分别含有不同位置上的Poly(A)信号序列,将它们克隆到穿梭质粒P^(91023)上,得到了系列缺失子的表达性质粒P^(91-IL2R),为进一步分析Poly(A)及3’非转译区(3’UTR)对IL-2Rα基因转译调控的影响创造了必要条件。

B淋巴瘤中纯化TIL-T的IL-2Rα基因突变及蛋白表达检测

目的 :探讨B淋巴瘤 (B NHL)中肿瘤浸润T细胞 (TIL T)的活化标记IL 2Rα(CD2 5 )的基因突变 ,肿瘤组织中CD2 5蛋白表达及TIL T的增殖特点。方法 :19例B NHL提纯TIL T ,RT PCR和SSCP检测其IL 2Rα的基因突变与否 ;MTT法检测 17例TIL T在低浓度rIL 2刺激下的增殖情况 ;冰冻切片免疫组化检测 2 9例B NHL中IL 2Rα蛋白的表达。结果 :SSCP显示19例TIL T的IL 2Rα未发现异常泳动条带 ;rIL 2刺激下 ,13 17例 (76 5 % )TIL T增殖表现下调 ;免疫组化显示B NHL中 2 5 2 9例 (86 2 % )CD2 5表达为 (+ - )和 (+) ,4 2 9例 (13 8% )CD2 5表达为 (++～ +++)。结论 :TIL T的IL 2Rα未发现基因异常 ,但TIL T表达CD2 5蛋白数量异常 ,提示B T接触活化异常可能是B

B细胞淋巴瘤TIL-T的IL-2Rα基因突变及蛋白表达检测

目的 :检测B细胞淋巴瘤 (B NHL)中肿瘤浸润T细胞 (TIL T)的活化标记IL 2Rα(CD2 5 )的基因及蛋白表达 ,寻找TIL T在B NHL肿瘤微环境中存在意义的实验依据。方法 :将 19例B NHL提取RNA ,采用RT PCR和SSCP检测其IL 2Rα的Ⅳ Ⅷ外显子基因突变与否 ;19例B NHL采用细胞免疫化学染色进行CD3、CD4、CD8、CD2 0、CD2 5细胞免疫表型的分析 ;2 9例B NHL和 2 0例良性淋巴组织 ,采用冰冻切片免疫组化方法进行IL 2Rα(CD2 5 )蛋白表达的检测。结果 :SSCP显示 19例TIL -T的IL 2Rα未发现异常泳动条带。细胞免疫化学染色示B NHL中 5 2 .6 3% (10 /19例 )的CD2 5 +细胞少于 10 % ,TIL T(CD3+)与CD4相关 (r =0 .5 7,P <0 .0 1)并与CD2 5相关 (r =0 .5 0 ,P <0 .0 5 )。免疫组化示 86 .2 % (2 5 /2 9例 )的B NHL中CD2 5表达 (+/- )和 (+) ,且主要表达在TIL T细胞上 ,呈散在分布 ,阳性细胞少于T标记细胞。结论 :19例TIL T的IL 2Rα在RNA水平未发现基因异常 ;CD2 5蛋白在B NHL中呈弱表达趋势。提示部分TIL T不表达CD2 5 ,推测TIL T的IL 2Rα的表达在转录后机制中可能出现异常或TIL T存在活化障碍。

乳杆菌Lb．casei Zhang诱生小鼠脾细胞IL-2和IL-2Rα的作用

目的：研究乳杆菌Lb．casel Zhang对小鼠脾细胞IL-2和其受体IL-2R仪的诱生作用，从基因转录水平探讨其免疫调节的特点。方法：利用分离自酸马奶，并经过耐酸性实验、人工胃肠消化液中存活能力筛选的Lb．caseiZhang，制备活菌制剂分高、中、低三个剂量组灌服小鼠，分别于第3、7、11、15d，摘取脾脏，计算脾指数，RT—PCR法测定睥脏中IL-2和IL-2R仪mRNA的转录水平。结果：脾指数在连续灌服7d后开始明显增加，至11d时仍保持较高水平，并具有一定的剂量依赖效应；IL-2和IL-2R仪mRNA的转录水平与脾指数相适应在连续灌服7d后开始明显增加，至11d时达到高峰，且具有一定的剂量依赖效应。结论：乳杆菌Lb．caseiZhang能够诱导脾脏淋巴细胞自分泌生长因子IL-2及其活化受体IL-2R仅的转录及分泌，进而激活Till细胞，从而发挥免疫调节作用。

IL1R2在肿瘤发生发展中的作用

IL-1有IL-1α和IL-1β两种亚型,其受体家族包括I型和II型两种受体形式(IL1R1和IL1R2)以及一种受体辅助蛋白(IL1RAP)。在IL1RAP帮助下,IL-1α和IL-1β均可与ILR1形成IL-1/IL1R1/IL1RAP复合物,激活下游信号转导通路,发挥生物学作用;IL1R2由于缺少胞内TIR结构域无法介导IL-1信号通路,而能通过与IL1R1竞争性结合抑制IL-1的作用。IL1R2起初被认为是一种IL-1的诱捕受体,但在后续的研究中发现其在多种肿瘤中有异常表达,且多数呈现异常上调状态,仅在少数肿瘤中低表达,其表达与许多肿瘤的发生发展以及预后有着重要关联。本文针对IL1R2在肿瘤发生发展中的作用方面的相关研究进展进行综述。

人IL-2Rα链基因负调控元件结合蛋白的分离纯化

淋巴细胞表面高亲和力IL-2R的出现受IL－2Ra基因的诱导表达控制，而IL－2Ra链基因的表达受到严格的时空的调控。在IL-2Ra基因上游除存在正调控元件外还存在负调控元件（-391TCATCCCAGG-381，NRE）及其下游不完全反转重复序列（-153CCTGGTTTGA-143NIRS）。本组曾通过紫外交联实验发现Jurkat细胞有一种蛋白质与NIRS和NRE特异结合。本文利用肝素-亲和柱层析及序列特异DNA亲和层析认1010Jurkat细胞中获得了分子量约为75kD的NRE特异结合蛋白。EMSA实验表明，纯化后的蛋白与NRE所形成的结合物能被NIRS及HIVLTR的负调控元件所竞争，提示该NRE结合蛋白不仅可能参与IL-2Ra基因的转录调控，而且可能在HIV基因表达过程中起某种作用。

人IL-2Rα基因在CHO细胞中的稳定整合和表达及其应用

目的 应用本组制备的白细胞介素 2受体 (IL- 2 R) ,建立一种既安全又简便 ,并能定量检测白细胞介素2 (IL- 2 )生物活性的方法。方法 采用 Southern印迹杂交方法 ,检测重组分泌型 IL- 2 Rα亚基 (rs IL- 2 Rα)基因在高效表达的转染细胞基因组中的稳定整合 ;以 Western免疫印迹法测定 rs IL- 2 Rα的相对分子质量 ,建立定量检测人 IL- 2生物活性的受体与抗体夹心酶联免疫吸附测定 (r EL ISA)方法。结果 (1) Southern印迹分析表明 ,rs IL- 2 Rα基因已稳定整合到高表达的转染 CHO细胞基因组中 ;(2 ) rs IL- 2 Rα的相对分子质量为 40 0 0 0左右 ;(3)应用建立的r EL ISA方法测定人 IL- 2标准溶液结果表明 ,IL- 2的标准曲线范围为 31.2 5～ 5 0 0 .0 0 U (r=0 .9995 ) ;预先将山羊抗人 IL- 2 Ig G与 IL- 2保温后 ,所得标准曲线的斜率明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 与传统测定 IL- 2的方法相比 ,用rs IL- 2 Rα建立的受体 -抗体夹心 r EL ISA方法不仅具有准确、特异性强及操作简便的特点 ,而且 ,所得结果直接反映了被测样品中具有结合 IL- 2 R活性的 IL-

35例急性白血病细胞IL-2受体α基因表达的检测分析

为研究ＩＬ２受体α链（ＩＬ２Ｒα，Ｐ５５）基因在急性白血病（ＡＬ）细胞的表达，对１９例ＡＬＬ和１６例ＡＭＬ患者治前白血病细胞用逆转录—聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）及荧光素标记单抗ＩＬ２Ｒ１流式细胞分析，分别进行了ＩＬ２Ｒα基因ｍＲＮＡ和蛋白质水平表达的检测。３５例ＡＬ患者白血病细胞ＩＬ２ＲαｍＲＮＡ和Ｐ５５阳性表达者分别为２５例（２５／３５，７１４％）和１４例（１４／３５，４０％），前者阳性表达明显高于后者（ｐ＜００２５）。１４例ＡＬ患者白血病细胞ＩＬ２ＲαｍＲＮＡ表达阳性，而Ｐ５５水平无表达；３例ＡＭＬ细胞表面Ｐ５５阳性却无ｍＲＮＡ表达。本研究显示，ＡＬ患者白血病细胞ＩＬ２Ｒα基因阳性表达十分常见，ｍＲＮＡ和蛋白质水平表达并非一致，ｍＲＮＡ水平表达率明显高于蛋白质水平表达率。

白细胞介素2受体α亚基参与Jurkat细胞凋亡的调节

T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素 2受体 (IL 2R)由α ,β及γ三种亚基组成 ,其中只有IL 2Rα亚基具有特异结合IL 2的活性 ,目前对IL 2Rα亚基的确切的功能尚不清楚。我们将IL 2RαcDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后 ,经Western印迹 ECL分析发现 ,细胞内出现了细胞凋亡早期特异的多聚二磷酸腺核糖聚合酶 [Poly(ADP ribose)polymerase ,PARP]的 89kD断裂片段 ,此结果提示 ,IL

Searching for Peptide Ligands of Interleukin-2 Receptor α Chain in Phage-displayed Peptide Library

Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２（ＩＬ－２）ｉｓａ１３３－ａｍｉｎｏａｃｉｄｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｐｒｏｔｅｉｎｓｅｃｒｅｔｅｄｂｙａｃｔｉｖａｔｅｄＴ－ｃｅｌｓ．Ｉｔｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｅｃｔｓａｒｅｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｂｅｉｎｇｂｏｕｎｄｔｏｓｐｅ...

异丙酚对白细胞介素2受体α基因的表达调控

目的:探讨异丙酚对于白细胞介素2受体α(IL-2Rα)基因的表达调控,从分子水平探索麻醉药影响机体免疫的机制。方法:将IL-2Rα基因上游调控序列驱动的氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因质粒通过脂质体法稳定转染Jurkat细胞。转染48h后的细胞随机分为6组,对照组(Cgroup)及分别加入1μmol/L异丙酚(P1),10μmol/L异丙酚(P10),50μmol/L异丙酚(P50),100μmol/L异丙酚(P100)和200μmol/L异丙酚(P200)组。在异丙酚处理后1h(T1),5h(T5),10h(T10),24h(T24)使用荧光测定法检测CAT活性。结果:T5时,P10、P50、P100组及P200组CAT活性较T1时CAT活性出现显著变化。随着异丙酚处理时间继续延长,T10和T24时CAT活性改变并不明显。P1组CAT活性与C组无显著差异。P10组T5时CAT活性较C组升高17%(P<0.05)。P50、P100组及P200组T5时CAT活性仅为C组CAT活性的80.2%,49.3%和11.3%,呈显著降低(P<0.05)。结论:异丙酚浓度及作用时间均影响其对IL-2Rα基因的表达调控,临床使用浓度异丙酚对IL-2Rα基因的表达具有正调控作用,而高浓度异丙酚对IL-2Rα基因的表达具有负调控作用,提示异丙酚对机体免疫功能有一定的影响。