IL-1Ra基因多态性与无症状细菌性阴道病自然转归关系的研究

目的 研究白细胞介素1受体a(IL-1Ra)基因多态性与无症状细菌性阴道病(aBV)患者不同转归的关系,以期对aBV患者进行分组管理。方法 对aBV患者进行自然转归的研究,在入组时,所有患者均留取了一份静脉血标本和阴道灌洗液的标本单独冻存。4个月后,临床研究结束时,根据临床结局,将完成研究的患者分为3组:自愈、进展和无改变。再检测所有患者IL-1Ra基因多态性以及阴道微环境中IL-1β和IL-1Ra浓度,并比对上述指标在3组不同结局的患者间的差别。结果 共有1 014例中国汉族女性患者入组,984例完成临床随访并获得临床结局数据。其中13例患者的冻存标本在检测时无法使用,共有971分标本完成检测。所有患者均检测到IL-1Ra基因,有A_(1)/A_(1)、A_(1)/A_(2)和A_(2)/A_(2) 3种基因型,主流人群的基因型为A_(1)/A_(1),最少见的基因型为A_(2)/A_(2),未发现少见类型的基因型女性。病情进展组的A_(2)等位基因的频率明显高于自愈组(P<0.05)。在所有患者的阴道灌洗液标本中均能检测到IL-1β和IL-1Ra存在。与进展组比较,自愈组的IL-1β水平明显偏低(P<0.05)。当携带A_(2)等位基因时,进展组IL-1β水平相对偏低,而IL-1Ra水平相对升高,无变化组的数值介于进展组和自愈组之间。结论 aBV患者中的IL-1Ra基因多态性特征与阴道分泌物中的IL-1Ra含量有关。携带等位基因A_(2)与IL-1Ra含量升高、IL-1β含量降低有密切相关性。携带等位基因A_(2)可能通过与IL-1Ra和IL-1β有关的机制影响了aBV的临床转归。

电针对佐剂性关节炎大鼠病灶局部皮肤组织IL-1β、IL-1ra mRNA表达的影响

目的 :观察电针对单侧佐剂性关节炎大鼠的疼痛试验评分、炎症灶局部病理反应 ,以及病灶局部皮肤组织IL 1β、IL 1ramRNA表达的影响。方法 :通过将完全弗氏佐剂 50 μL注入SD大鼠左后肢外踝关节皮下制造单侧佐剂性关节炎疼痛模型 ,电针“环跳”穴、“阳陵泉”穴 (刺激参数为0 .5～ 1.5V ,4～ 16Hz,3 0min) ,应用跖、背屈关节评分连续观察大鼠 7d内的痛反应曲线 ,应用HE组织化学染色方法观察病灶局部皮肤组织炎性病理反应 ,应用RT PCR技术检测IL 1β、IL 1ramRNA表达情况。结果 :电针可明显减少炎症痛大鼠的疼痛评分 ,抑制佐剂性关节炎大鼠病灶局部炎性病理反应 ,并抑制病灶局部皮肤组织IL 1βmRNA表达 ,促进IL 1ramRNA表达 ,使IL 1ra/IL 1β比值上升 (P <0 .0 1)。结论 :电针可能通过调节炎症灶局部致炎细胞因子及抗炎细胞因子之间的平衡 ,从根本上解除局部病灶免疫细胞的激活状态 ,达到扶正祛邪、平衡阴阳的调控作用 ,从外周途径缓解疼痛。

电针对局灶性脑缺血/再灌注大鼠IL-1Ra mRNA表达的调节

目的 :观察电针 (EA)对局灶性脑缺血 /再灌注大鼠IL 1RamRNA表达的调节作用。方法 :采用线栓法制备SD大鼠局灶性大脑中动脉阻塞缺血 /再灌注 (MCAo)模型 ,并应用RT PCR的方法进行观察。结果 :MCAo大鼠缺血侧大脑皮层在再灌注后 1 2hr和 2 4hrIL 1RamRNA表达增加 ;在缺血侧纹状体缺血再灌注后 1 2hrIL 1RamRNA表达明显增加 ,但再灌注后 2 4hr表达明显降低 ,电针可使IL 1RamRNA的表达明显增加。结论 :EA可使内源性IL 1RamRNA表达增加 ,从而使IL 1Ra表达增加 ,对脑缺血起保护作用 ,这也可能是EA抗脑缺血损伤的机制之一。

NF-κB及IL-1ra在胃癌中的表达及其意义

【目的】探讨NF-κB及IL-1ra在胃癌中的表达及其意义。【方法】通过组织芯片,采用免疫组织化学方法(LSAB法)检测核因子-κB(NF-κB)和抗炎因子白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)在359例胃癌组织中的表达情况。【结果】NF-κB在伴发淋巴结转移、处于TNMⅢ+Ⅳ期、组织学分化较低的胃癌患者中的表达水平分别为80.2%、80.0%、79.2%;IL-1ra在原发灶癌直径≤3cm、早期癌、无淋巴结转移和处于TNMⅠ+Ⅱ期的胃癌患者中表达水平分别为61.7%、75.0%、66.4%、61.9%;NF-κB表达阴性的胃癌患者5年生存率高于阳性患者(P=0.036);伴IL-1ra阳性表达的NF-κB阴性表达患者生存率高于其它组别患者(P=0.021)。【结论】NF-κB的表达水平可以作为胃癌预后不良的指标;IL-1ra可能是延缓胃癌恶性发展的保护因素,但尚需进一步的研究证实。

抽动秽语综合征儿童的IL-1Ra基因多态性与执行功能

目的:探讨白介素1受体拮抗剂第2内含子86bp可重复多态性(IL-1Ra86bp VNTR)与汉族抽动秽语综合征儿童(TS)及执行功能的关系。方法:选取符合美国精神疾病诊断统计手册第4版TS诊断标准的儿童112例,健康对照71例。采用聚合酶链反应(PCR)等位基因分型技术对所有对象的IL-1Ra86bp多态位点进行测定,分析该位点与TS疾病的关联,同时采用Stroop色词测验(Stroop test)测定研究对象的执行功能。结果:全部112例TS组和54例单纯TS组的IL-1Ra86bp位点基因型频率(54.0%,56.0%vs.55.1%)和等位基因频率(77.0%,78.0%vs.77.0%)与对照组相比差异无统计学意义(均P>0.05)。48例TS共病注意缺陷多动障碍(ADHD)组的IL-1Ra86bp长(L)位点基因型频率(79.0%vs.55.1%)和等位基因频率(90.0%vs.77.0%)明显高于对照组(均P<0.05)。TS共病ADHD组L/L基因型的儿童C错误数多于对照组[(5.8±14.8)vs.(2.8±12.4),P<0.05]。结论:IL-1Ra86bp基因多态性与共病ADHD的抽动秽语综合征可能存在关联,携带L/L基因型的抽动秽语综合征儿童执行功能可能较差。

冠心病患者血清IL-1ra和IL-6水平与冠脉病变程度及预后的相关性研究

目的：探讨冠心病患者血清IL-1ra和IL-6水平与冠脉病变程度及预后的相关性。方法选择2009年2月至2012年11月疑为冠心病而入院行冠状动脉造影患者198例，根据冠脉病变程度分为冠心病组（n=168）及正常对照组（n=30），检测两组血脂及血清IL-1ra和IL-6水平，分析其与冠脉病变支数、Gensini评分的关系。分析冠心病组不同IL-1ra和IL-6等级发生主要心血管事件的风险。结果冠心病组患者血清IL-1ra和IL-6水平显著高于对照组患者（P〈0.05）。不同病变冠脉支数患者血清IL-1ra和IL-6水平差异均具有统计学意义（P〈0.05），支数越多的患者血清IL-1ra和IL-6水平越高。冠心病组患者血清IL-1ra和IL-6水平与Gensini积分之间均存在正相关（r=0.79，P〈0.05；r=0.75，P〈0.05）。IL-1ra和IL-6为3级的患者1年内发生主要心血管事件的风险均较对照组显著增加，其OD值分别为5.40（95%CI 1.46～20.01）和5.82（95%CI 1.58～21.54）（P〈0.05）。结论 IL-1ra和IL-6参与了冠心病患者冠状动脉粥样硬化的发生与发展，其水平与冠状动脉病变程度及1年内主要心血管事件发生有关。

pIRES2-EGFP-IL-1ra-Fcε真核表达载体的构建及鉴定

采用RT-PCR方法从哮喘大鼠脾细胞中克隆IgE恒定区cDNA,同时从载体pBV220-IL-1ra中克隆IL-1ra基因,利用重叠延伸PCR技术构建IL-1ra-Fcε融合基因。将其克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP,以脂质体法转染293T细胞,同时采用气管滴注方式滴注大鼠肺部。经Western blot、RT-PCR及荧光显微镜观察此融合基因在293T细胞及大鼠肺组织中实现了表达,为过敏性哮喘基因治疗奠定了基础。

逆转录病毒载体PLXRN介导的人IL-1Ra在关节滑膜细胞中的表达

目的:建立逆转录病毒介导的人IL-1Ra体外表达体系。方法:应用DNA重组技术,将人IL-1RacDNA片段重组到逆转录病毒质粒pLXRN中,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染原代关节滑膜细胞,用ELISA检测IL-1Ra表达。结果:重组pLXRN-IL-1Ra质粒,经酶切鉴定正确。重组逆转录病毒pLXRN-IL-1Ra滴度可达5.5×104CFU/ml,感染原代关节滑膜细胞后能稳定表达。结论:逆转录病毒能介导人IL-1Ra在关节滑膜细胞中的稳定表达,为下一步开展基因治疗运动创伤性骨关节炎奠定了基础。

惊厥大鼠海马神经细胞IL-1β和IL-1ra表达及细胞凋亡的研究

目的 探讨癫痫发作所致的神经细胞凋亡与白细胞介素 - 1β(IL - 1β)和白细胞介素 - 1受体拮抗剂(IL - 1ra)表达的关系。方法 建立毛果云香碱癫痫动物模型 ,应用原位末端标记法 (TU NEL )和免疫组织化学法 ,检测海马神经细胞凋亡与 IL - 1β和 IL - 1ra表达。结果 癫痫发作后 2 4、4 8h,在大鼠海马 CA1 区 ,TUNEL阳性细胞数、IL - 1β表达和 IL - 1ra表达较对照组显著增高 (P<0 .0 0 1)。 IL - 1β表达与细胞凋亡成正相关 (r=1.0 ,P<0 .0 1)。结论 内源性 IL - 1β和 IL -

IL-1ra基因修饰角膜内皮细胞及其表达

目的构建真核细胞内表达的重组质粒PEGFPhIL1ra,对角膜内皮细胞进行基因修饰,为构建白细胞介素1受体拮抗剂(interleukin1receptorantagonist,IL1ra)基因化角膜内皮细胞移植膜奠定基础。方法以人cDNA文库为模板进行PCR扩增,获得人IL1racDNA片断,插入PEGFPC2载体,构建真核表达质粒PEGFPhIL1ra。以阳离子聚合物为介导,对饲细胞培养下的角膜内皮细胞(cornealendothelialcells,CECs)进行体外转染。通过绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)示踪检测转染效率,蛋白免疫印迹检测外源性IL1ra基因在角膜内皮细胞内表达强度。结果以cDNA文库为模板扩增出hIL1racDNA,通过酶切、DNA测序证实PEGFPhIL1ra构建正确。20%～25%的转染角膜内皮细胞中有绿色荧光。Westernblotting检测可见转染角膜内皮细胞内有相对分子量为44000的hIL1raGFP融合蛋白表达,3d时蛋白表达水平达到峰值,并且持续至5d,7d时表达水平开始回落,9d时表达处于较低水平,对照组在观察期内均未见蛋白表达。结论阳离子聚合物介导下重组质粒PEGFPhIL1ra可对角膜内皮细胞实现有效转染并且持续表达IL1ra蛋白。

IL-1ra-Fcε融合基因的克隆、表达及鉴定

白细胞介素-1与免疫球蛋白E在过敏性哮喘发病中发挥着重要作用。本试验克隆了白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)及IgE分子恒定区cDNA片段,构建了融合基因原核表达载体IL-1ra-Fcε/pBV220。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),实现了融合蛋白的高效表达,Western blotting结果表明表达蛋白为目的融合蛋白,主要以包涵体形式存在;利用分子筛和阳离子交换层析对表达产物经进行了纯化,纯化的包涵体复性后经体外功能试验表明,融合蛋白的活性与IL-1ra没有显著性差异;初步药代动力学分析显示IL-1ra-Fcε半衰期比IL-1ra延长了4.78倍。

IL-1ra及地塞米松对IL-1β诱导的人RPE增生的抑制

目的:观察IL-1ra及地塞米松对IL-1β诱导的RPE增生的抑制作用。方法:通过MTT比色实验观察IL-1ra及地塞米松对IL-1β促RPE增生的抑制作用。结果:IL-1ra(20～200μg/L)对加入IL-1β(2μg/L)培养的人RPE增生有明显的抑制作用,抑制率为9.4%～24.5%P<0.05);地塞米松在低浓度(10mg/L)时刺激RPE增生,而在高浓度(35～70mg/L)则表现为对IL-1β诱导RPE增生的抑制作用,抑制率为31.2%～43.9%(P<0.05);IL-1ra100μg/L)联合地塞米松(35mg/L)对IL-1β诱导RPE增生的抑制率40.6%,较两者单独使用的抑制率均高(P<0.05)。结论:IL-1β能促进培养的人RPE的增生,而IL-1ra及地塞米松可以抑制这种促增生作用。

IL-1ra调节人牙周膜成纤维细胞ALP活性的实验研究

目的：观察人重组ＩＬ－１β对人牙周膜成纤维细胞（ＨｕｍａｎＰｅｒｉｏｄｏｎｔａｌＬｉｇａｍｅｎｔａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＨＰＬＦ）的碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）活性的影响以及ＩＬ－１ｒａ（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔａｇｏ－ｎｉｓｔ，ＩＬ－１ｒａ）对ＩＬ－１β这一生物活性的阻断作用。方法：用碱性磷酸酶测定法。结果：经ＩＬ－１β作用后，ＨＰＬＦ的ＡＬＰ活性降低，经一定浓度的ＩＬ－１ｒａ作用后，ＩＬ－１β的这一作用相对减弱，ＡＬＰ活性增高。结论：ＩＬ－１ｒａ能够有效地阻断ＩＬ－１β对降低ＨＰＬＦ的ＡＬＰ活性的作用。

IL-1Ra对阿霉素肾病大鼠血清IL-6、IL-10、IL-13、IL-1的影响

目的:探讨IL-1Ra对阿霉素肾病大鼠血清IL-6、IL-10、IL-13、IL-1的影响。方法:将大鼠随机分为正常对照组(A组,n=10)、阿霉素肾病组(B组,n=10)、阿霉素肾病IL-1Ra治疗组(C组,n=10)、阿霉素肾病生理盐水治疗组(D组,n=10),2周后检测尿24hUP、血清IL-6、IL-10、IL-13、IL-1、Al、T-ch、BUN、Scr。结果:B、C、D组血清IL-6、IL-10、IL-13水平明显高于A组(P<0.01),IL-1Ra治疗后,24hUP、T-ch较B、D组及C组IL-1Ra治疗前明显降低(P<0.01),Al、IL-6、IL-10、IL-13水平均较B、D组及C组IL-1Ra治疗前增高(P<0.05),IL-1血清水平较B组、D组、C组IL-1Ra治疗前明显降低(均P<0.01),接近A组水平(P>0.05)。结论:IL-1Ra对阿霉素肾病大鼠有明显治疗作用的同时能提高抗炎细胞因子IL-6、IL-10、IL-13的血清水平。

IL-1Ra和IL-10真核表达质粒载体的构建及其表达检测

目的:构建人IL-1Ra和人IL-10真核表达质粒载体并检测其表达。方法:用双酶切方法切取PCDI-IL-1Ra和PCDI-IL-10质粒中包含人IL-1Ra和人IL-10 CDS全长序列的cD-NA片段,并分别连接到真核表达质粒pcDNA3.1上,然后用壳聚糖转染上述质粒到原代软骨细胞,RT-PCR检测其mRNA水平的表达。结果:成功将人IL-1Ra和IL-10 CDS全长序列的cDNA片段克隆到真核表达载体,mRNA水平检测到目的基因的表达明显提高。结论:真核表达质粒可以用于外源基因的原代软骨细胞导入和表达,为进一步的基因治疗研究提供依据。

基于IL-1Ra/IL-1β平衡理论探讨中药熏蒸Ⅰ号方联合来氟米特及塞来昔布治疗活动期类风湿关节炎的机制

目的:观察自拟中药熏蒸Ⅰ号方联合来氟米特及塞来昔布治疗活动期类风湿关节炎的临床疗效,并探讨其改善类风湿关节炎的作用机制。方法:将91例类风湿关节炎患者按照随机数字表法分为对照组30例、治疗组30例、联合组31例。对照组给予来氟米特片联合塞来昔布胶囊口服,治疗组给予中药熏蒸Ⅰ号方熏蒸,联合组采用西药口服联合中药熏蒸Ⅰ号方熏蒸,3组疗程均为4周。观察3组临床疗效,以及治疗前后肿胀关节数、晨僵时间、握力、DAS28评分,检测红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-1Ra、IL-1β含量。结果:联合组显效5例,有效25例,无效1例,总有效率为96.77%;治疗组显效0例,有效18例,无效12例,总有效率为60.00%;对照组显效1例,有效18例,无效11例,总有效率为63.33%。联合组总有效率优于治疗组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,3组肿胀关节数、晨僵时间、DAS28评分、ESR、CRP明显降低,握力增加,IL-1Ra含量、IL-1Ra/IL-1β比值升高,IL-1β含量下降(P<0.05),且联合组优于治疗组和对照组(P<0.05)。结论:自拟中药熏蒸Ⅰ号方联合来氟米特及塞来昔布能明显改善活动期类风湿关节炎的症状、体征及炎症指标,无明显不良反应,这种疗效可能是通过升高IL-1Ra含量、IL-1Ra/IL-1β比值,抑制IL-1β含量实现的。

rhIL-1Ra抑制大鼠颞下颌关节骨关节炎软骨破坏的研究

目的:探讨关节腔内注射重组人IL-1Ra对实验性大鼠颞下颌关节炎软骨关节修复的影响。方法:取SD大鼠24只,用关节腔内注射Ⅱ型胶原酶法建立双侧颞下颌关节骨关节炎模型,1周后,右侧(实验侧)关节腔内一次性注射重组人IL-1Ra5μg(稀释于0.05 ml生理盐水),左侧(对照侧)注射等量生理盐水。建模后2周、4周各处死12只动物,取颞下颌关节标本进行HE染色、免疫组化染色及RT-PCR检测,用Mankin评分方法评估TMJ组织病理变化程度。另取1只SD大鼠用作空白对照,2周后处死。结果:2周时双侧颞下颌关节软骨均呈现不同程度的关节病损,实验侧和对照侧Mankin计分分别为1.33±0.52和2.00±6.63(P>0.05)。4周时,实验侧改良和对照侧Mankin评分分别为3.00±0.63和6.50±0.84(P<0.05),ADAMTS-4、5的蛋白及mRNA表达也低于对照侧(P<0.05)。结论:颞下颌关节腔内注射重组人IL-1Ra能缓解骨关节炎导致的软骨病损,其治疗机制可能是通过抑制ADAMTS-4、5的表达来实现的。

脂多糖刺激脐带间充质干细胞上调IL-1Ra分泌的研究

目的探讨脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）激活Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）对脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）分泌白介素1受体拮抗剂（interleukin-1receptor antagonist,IL-1Ra）的影响。方法采用组织块法从脐带华通胶组织中分离培养UC-MSCs;流式细胞术检测UC-MSCs表面标志物CD14、CD34、CD29和CD105的表达;TLR4配体LPS以不同剂量和时间刺激UC-MSCs,采用qPCR法和ELISA法检测IL-1Ra的mRNA和蛋白质表达水平。结果原代组织培养7~10d,组织周边有贴壁细胞爬出,呈长梭形;UC-MSCs表面标志物CD29和CD105呈阳性表达,而CD14和CD34呈阴性表达;LPS刺激UC-MSCs后,IL-1Ra在基因及蛋白质水平的表达均显著增加,差异有统计学意义（P〈0.05）,并呈剂量与时间依赖性。结论 LPS刺激UC-MSCs可上调IL-1Ra的分泌。

酸脂清胶囊对实验大鼠急性痛风性关节炎模型IL-10和IL-1Ra的影响

目的:通过观察酸脂清胶囊的不同提取物对实验大鼠痛风性关节炎模型IL-10和IL-1Ra的影响,研究酸脂清胶囊的抗炎机制和对痛风性关节炎软骨破坏的影响,进一步指导临床用药。方法:酸脂清胶囊不同提取物(水提物,醇提物)给大鼠灌胃7d后,以尿酸钠晶体造成大鼠急性痛风性关节炎模型,分别在造模后9 h和12 h随机抽取8只大鼠测量踝关节直径,下腔静脉取血Elisa检测IL-10和IL-1Ra的量。结果:三个药物组的IL-10和IL-1Ra较模型组均有不同程度的升高,但水提组升高最为明显(P<0.05)。结论:酸脂清胶囊通过提高IL-10和IL-1Ra的水平,达到抗炎、保护关节软骨的作用,尤以水提组为优。

hIL-1Ra基因的克隆及在原核细胞中的表达

目的 :克隆hIL 1Ra基因并在大肠杆菌中高效表达。方法 :从人外周血中分离白细胞并提取其总RNA。用RT PCR获得hIL 1RacDNA ,克隆入pBV2 2 0表达载体进行诱导表达。对表达产物进行复性和纯化。结果 :成功地构建了pBV2 2 0 IL 1Ra表达载体 ,并在大肠杆菌中获得高效表达 ,表达量占全菌的 4 0 %。对表达产物进行分离纯化及活性分析表明 ,获得纯度大于98%的样品。该样品具有明显抑制IL 1刺激EL 4细胞分泌IL 2的作用。结论 :在大肠杆菌中成功地表达有活性的hIL 1Ra基因 ,为进一步的开发利用奠定了实验基础。