胆管癌相关淋巴管上皮细胞高表达因子对淋巴管生成的促进作用

目的淋巴管上皮细胞(LECs)是胆管癌微环境中参与淋巴转移的重要环节。文中检测胆管癌细胞刺激后LECs分泌炎症因子及趋化因子的调变情况,观察高表达因子对淋巴管生成的影响。方法制备胆管癌细胞(RBE、HCCC9810)、胆管癌细胞条件培养基(CCM)刺激后的LECs、正常LECs的条件培养基,通过蛋白芯片检测各样品中炎症因子与趋化因子的分泌情况。确定在CCM刺激后LECs培养上清中显著调高的因子,通过ELISA检测,确定目标因子含量与时间的关系。实验分空白对照组:由DMEM和ECM按浓度1∶1配置;CCM组:培养基由第48小时收集的CCM和ECM按浓度1∶1配置;CCM+Anti⁃ENA⁃78组:在CCM组培养基制备基础上加入1μg/mL上皮中性粒细胞活化肽⁃78(ENA⁃78)中和抗体;Anti⁃ENA⁃78组:在空白对照组的基础上加入1μg/mL ENA⁃78中和抗体;ENA⁃78组:在空白对照组培养基制备基础上加入20 ng/mL的ENA⁃78活性蛋白;ENA⁃78+SB225002组:在ENA⁃78组培养基制备基础上加入100 nmol/L SB225002;SB225002组:在空白对照组培养基制备基础上加入100 nmol/L SB225002。通过细胞增殖和淋巴管成管实验探索目标因子与淋巴管生成的关系。结果ENA⁃78、IP⁃10、GCP⁃2、MCP⁃2、MCP⁃3、MIP⁃3a、HCC⁃1、Lymphotactin在CCM刺激后的LECs上清中表达增高,其中ENA⁃78在CCM⁃LECs中调变程度最显著。I⁃TAC、MIP⁃1d、IL⁃10、MIG、PDGF⁃BB、CXCL16因子呈现表达下调。ENA⁃78蛋白在RBE⁃LECs、HCCC9810⁃LECs上清中浓度[(1190.94±120.64、1650.38±103.76)pg/mL]较正常LECs[(354.03±32.50)pg/mL]中富集(P<0.01)。CCM组和CCM+Anti⁃ENA⁃78组LECs增殖(1.19±0.14、0.59±0.07)较对照组(0.31±0.03)显著增强(P<0.05);CCM+Anti⁃ENA⁃78组较Anti⁃ENA⁃78组的增殖明显增强(P<0.05);但CCM+Anti⁃ENA⁃78组增殖较CCM组有明显减弱(P<0.01)。CCM组和CCM+Anti⁃ENA⁃78组LECs淋巴管成管数(27.67±5.73、7.67±1.25)较对照组(3.00±0.82)显著增强(P<0.05);CCM+Anti⁃ENA⁃78组较Anti⁃ENA⁃78组成管能力均有明显增强(P<0.05);但CCM+Anti⁃ENA⁃78组成管能力较CCM组有明显减弱(P<0.01)。ENA⁃78组的细胞增殖和成管能力均较空白对照组显著增加(P<0.05)。ENA⁃78+SB225002增殖和成管能力较ENA⁃78组有明显减弱(P<0.05)。结论胆管癌诱导淋巴管上皮细胞分泌增加的ENA⁃78可能通过IL⁃8B受体发挥促进淋巴管生成的作用。