人IL-1受体拮抗蛋白重组逆转录病毒载体的构建、鉴定及在骨关节炎软骨细胞中的表达

目的构建含人IL-1受体拮抗蛋白(IL-1 receptor antagonist,IL-1Ra)逆转录病毒表达载体(PLXRN-IL-1Ra),体外转染人骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞,研究其相关特性。方法利用细菌内同源重组技术快速构建PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒重组质粒,经测序及酶切鉴定正确后转染PT67细胞,包装成为重组PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒,并使用小鼠肾成纤维细胞系NIH/3T3对病毒进行滴度测定。实验分为3组:未转染组(A组)、PLXRN空质粒转染组(B组)、PLXRN-IL-1Ra转染组(C组),病毒感染人OA软骨细胞后,RT-PCR检测细胞内IL-1Ra基因的转录和表达;ELISA法检测细胞培养上清液中人IL-1Ra蛋白表达。结果酶切鉴定及基因测序证实重组逆转录病毒质粒中含有人IL-1Ra cDNA,测定包装的病毒滴度为3×104CFU/mL。原代软骨细胞体外培养呈多角形或梭形,甲苯胺蓝染色见细胞内有紫色异染颗粒。RT-PCR结果显示在C组出现311bp人IL-1Ra mRNA片段,A、B组未见人IL-1Ra mRNA的表达带,GAPDH在各组均有表达。ELISA检测发现C组细胞上清有一定量的人IL-1Ra表达,蛋白浓度为(60.47±15.13)ng/L,A组和B组均无人IL-1Ra表达。结论构建的IL-1Ra逆转录病毒表达载体成功地感染人OA软骨细胞,并在体外获得稳定表达,为将表达人IL-1Ra基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了实验依据。

IL-1ra、IL-1β在Graves眼病发病及治疗中的意义

目的研究IL-1ra、IL-1β与Graves眼病(GO)的发病机理及治疗效果的关系。方法分别用酶联免疫吸附法和放射免疫分析法测定了20例Graves病(GD)无眼病者、20例健康对照者及20例GO(NOSPACES≥4级)患者糖皮质激素治疗前后血中IL-1ra、IL-1β水平的变化,并分析IL-1ra、IL-1β水平、IL-1ra/IL-1β与治疗效果之间的关系。结果GO患者治疗前与GD、健康对照的IL-1ra水平差异无统计学意义,但糖皮质激素治疗后明显升高;而IL-1β在未治疗的GO患者明显升高,经糖皮质激素治疗后有降低趋势。IL-1ra与IL-1β的比值在GO患者明显低于健康对照,经糖皮质激素治疗后明显上升。结论GO患者存在内源性IL-1ra的相对不足,经糖皮质激素治疗,可促进IL-1ra的产生,抑制IL-1β产生。

IL-1家族与Graves眼病

白介素 (IL) 1可刺激人眼眶部成纤维细胞合成氨基多糖及抗原表达 ,在Graves眼病 (GO)的发病中有重要作用。白介素 1受体拮抗蛋白 (IL 1ra)能竞争性地与IL 1受体结合而无受体后效应。其可抑制氨基多糖合成。与正常人相比 ,GO患者眼眶部成纤维细胞不能合成足够的IL 1ra ,可能是GO的发病机制之一。