兔IL-10基因外显子4突变对蛋白结构和功能的影响

本研究针对兔IL-10基因外显子4中的碱基突变,运用生物信息学比较分析野生型和突变型蛋白的理化性质和结构。结果表明,外显子4中碱基T的插入并未改变IL-10蛋白的理化性质、二硫键、跨膜结构、信号肽、糖基化位点以及二级结构,但是导致磷酸化位点减少、三级结构改变,从而影响IL-10蛋白的功能并可能对机体疾病的抗病性产生影响。

IL-10基因-1082A/G多态性与糖尿病肾病易感性的Meta分析

目的系统评价白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)基因-1082A/G多态性与糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)易感性之间的关系。方法检索建库以来至2019年6月间与IL-10基因1082A/G及DN发病风险相关的病例对照研究,使用纽卡斯尔渥太华(Newcastle-Ottawa Scale,NOS)标准对纳入文献进行质量评价。采用STATA12.0软件进行统计分析,选择发病风险比值比(odds ratio,OR)及95%置信区间(confidence interval,CI)为效应指标。结果本研究共纳入10项研究,包含DN患者1759例,单纯糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者1525例,健康对照(healty control,HC)者2209例。DN组与单纯DM组比较,IL-10基因-1082A/G多态性在各遗传模型上差异均无统计学意义(P>0.05)。DN组与健康人群比较,IL-10基因-1082A/G多态性在纯合子模型下与DN呈明显相关性(GG vs AA:OR=0.577,P<0.05)。将地区进行亚组分析发现,亚洲人群中IL-10基因-1082A/G多态性在除杂合子模型外的其他遗传模型中差异均有统计学意义(G vs A:OR=0.589,P=0.031;GG vs AA:OR=0.349,P=0.000;GG vs GA+AA:OR=0.588,P=0.015;GG+GA vs AA:OR=0.629,P=0.000)。结论IL-10基因-1082A/G多态性与DN发病相关,亚洲人群中G等位基因、GG基因型是DN发病的保护因素。

浙南地区汉族IL-10基因启动子区G-1082A、C-592A多态性分布调查

目的观察IL-10基因启动子区G-1082A、C-592A多态性在中国浙南地区汉族人群分布特征。方法采用引物序列特异性-多聚酶链反应(SSP-PCR)方法,检测163名浙南地区正常人群IL-10基因启动子区G-1082A、C-592A多态性分布特点,并与国外研究比较。结果浙南地区正常人群IL-10基因启动子区G-1082A、C-592A存在多态性,分别有GG、GA、AA和CC、CA、AA基因型;中国浙南地区人群IL-10基因启动子区G-1082A的G等位基因频率与韩国人相似(6.4%vs9%,P>0.05),较白种人显著降低(6.4%vs51.0%,P<0.05);C-592A的A等位基因频率与韩国人相似(67.5%vs62.0%,P>0.05),较白种人显著降低(67.5%vs79.0%,P<0.05)。结论IL-10基因启动子区域G-1082A、C-592A基因型的分布在不同种族间存在显著差异,这种差异可能与某些疾病在不同种族、地域间发病率和临床表现不同有关。

兔IL-10基因的克隆及生物信息学分析

本研究对兔IL-10基因序列进行克隆并进行生物信息学分析,旨在为该基因的深入研究提供依据。结果表明,兔与其他哺乳动物的IL-10基因在CDS和氨基酸序列上相似性都较高;与鸡和斑马鱼的CDS序列没有同源性,且氨基酸序列同源性很低。对兔IL-10蛋白的软件预测分析表明,该蛋白是一种不稳定的疏水性分泌蛋白,富含磷酸化位点,有8个优势B细胞抗原表位。本研究为该基因的深入研究以及探明IL-10的合成分泌机制和网络调控机理提供了理论依据。

小鼠IL-10基因的克隆及其原核表达

从ConA活化的昆明小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到小鼠的IL-10基因。编码序列经测序验证后,将其克隆入表达载体pET-28a,构建IL-10基因的重组原核表达载体,在大肠杆菌(DE3)中诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE结果表明,该表达产物的分子量与预期值相符,Western blot结果说明小鼠IL-10基因得到了表达。

鼠IL-10基因腺病毒载体的构建及在骨髓间充质干细胞中的表达

目的构建携带鼠IL-10(rIL-10)基因重组腺病毒载体,并探讨其能否在鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中稳定表达.方法 rIL-10引物经PCR扩增rIL-10 cDNA序列,将回收到的656 bp rIL-10 DNA片段克隆入pcDNA3.1载体中,构建pcDNA3.1-IL-10,将其与腺病毒载体共转染HEK293细胞,进行细胞内同源重组,经测序及聚合酶链反应(PCR)鉴定重组是否成功;反复冻融裂解HEK293细胞,将获得的含rIL-10基因的病毒液感染MSCs,Western blot法检测rIL-10在MSCs中的表达.结果经测序及PCR验证,rIL-10基因腺病毒载体构建成功,病毒滴度达4×10^9 PFU/mL.含rIL-10基因的病毒液体外感染MSCs后,可检测到IL-10的表达.结论构建重组腺病毒能够介导rIL-10基因在MSCs中的稳定表达,为下一步基因移植治疗炎症性肠病提供基础.

IL-10基因载体对大鼠血管平滑肌细胞增殖和球囊损伤后新生内膜形成的影响

目的探讨白细胞介素-10(IL-10)基因载体对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHRVSMC)增殖和球囊损伤后新生内膜形成的影响。方法成功构建慢病毒IL-10基因载体。自发性高血压大鼠(SHR)随机分为4组:正常对照组、模型组、损伤+空载体组(空载体组)、损伤+慢病毒IL-10基因治疗组(IL-10基因治疗组)。大鼠颈动脉球囊损伤模型建立后,取出颈总动脉下段1/3行HE染色,计算机图像分析仪测量血管壁(中膜)/腔面积比(wall area/lumen area,W/L)。颈总动脉段上1/3检测金属基质蛋白酶-12(matrix metalloproteinase,MMP-12)的信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)表达。结果慢病毒IL-10基因治疗组W/L比值比模型组和空载体组明显减小;IL-10基因治疗组MMP-12的mRNA相对表达量比模型组和空载体组明显减小。结论 IL-10基因治疗能抑制大鼠体内血管平滑肌细胞增殖和球囊损伤后新生内膜形成,是有效的再狭窄治疗手段。

IL-10基因启动子多态性与皖南地区汉族人群支气管哮喘的相关性研究

目的:探讨IL-10基因启动子-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)、-592C/A(rs1800872)位点多态性与安徽皖南地区汉族人群支气管哮喘的相关性。方法:采用病例-对照方法,用聚合酶链反应及直接基因测序法比较183例支气管哮喘组与151例正常人对照组之间基因型、等位基因频率的差异。结果:哮喘组IL-10基因启动子-1082G/A、-592C/A位点基因型与对照组相比有差异(P<0.05),其等位基因型频率在哮喘组和对照组间亦有差异(P<0.05)。而-819C/T位点基因型及等位基因型频率在哮喘组和对照组间均无差异(P>0.05)。结论:IL-10基因启动子rs1800896(-1082G/A)位点和rs1800872(-592C/A)位点的多态性可能与安徽皖南地区汉族哮喘相关;而rs1800871(-819C/T)位点的多态性可能与安徽皖南地区汉族哮喘无相关。

IL-10基因-592A/C单核苷酸多态性对替西罗莫司干预的膀胱癌患者预后的影响

在我国的泌尿生殖系肿瘤中,膀胱癌发病率占第一位[1]。膀胱癌具有多发病灶和术后高复发率的特征,而术后灌注化疗可有效降低术后复发率,改善患者预后和提高生存率[2]。膀胱癌患者的复发与膀胱癌治疗过程中出现的耐药性有相关性[3]。替西罗莫司（CCI-779）作为雷帕霉素抗癌衍生物,对癌症有显著的疗效[4]。因此,通过检测膀胱癌IL-10单核苷酸基因多肽性,对不同基因型的患者的生存率进行分析及其对预后的影响。

IL-10基因-592(C→A)位点单核苷酸多态性与儿童异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病的相关性研究

目的:研究IL-10基因-592(C→A)位点(rs1800872)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)供者和受者基因型对儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后移植物抗宿主病(graft versus host disease, GVHD)的影响。方法:对2011年1月至2017年7月在首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心进行异基因造血干细胞移植的97例儿童患者及与之配对的71例供者进行基因型检测。提取外周血基因组DNA,采用TaqMan SNP Genotyping Assays探针法检测该位点SNP基因型,并结合临床资料分析与移植物抗宿主病及移植相关死亡率的相关性。结果:AA基因型恶性疾病患者中Ⅱ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病(aGVHD)的发生率(9.1%),较AC+CC基因型恶性疾病患者(43.5%)显著降低(P <0.01),且胃肠道受累的概率也显著降低(9.1%vs 39.1%)(P <0.05)。在全部患者及非恶性疾病患者中,不同基因型患者在Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的发生率方面差异无统计学意义。患者基因型对慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的发生率以及移植后1年移植相关死亡率(transplantation-related mortality, TRM)影响差异无统计学意义。在非恶性疾病中,供者AA基因型,发生肝脏aGVHD的概率(23.1%)较AC+CC基因型明显增高(0.0%)(P <0.05)。不同供者基因型对患者移植后Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的发生率、cGVHD的发生率、移植后1年TRM的分析均无明显差异。结论:在儿童异基因造血干细胞移植中,患者IL-10基因-592(C→A)位点AA基因型是儿童恶性疾病移植后Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的发生率降低以及胃肠道受累减少的有利因素;供者AA基因型,是非恶性疾病移植后肝脏aGVHD的不利因素。

CD52单抗通过清除活化T细胞对IL-10基因敲除小鼠结肠炎的干预作用

目的:观察CD52单抗对IL-10基因敲除小鼠结肠炎的干预作用并探究其干预作用的可能机制。方法:给予CD52单抗治疗后,计算疾病活动度指数,检测结肠病理学评分,外周血、脾脏及结肠固有层单个核细胞中T淋巴细胞的清除情况,结肠组织炎性因子水平及相关细胞因子的m RNA转录水平的变化。结果:CD52单抗能有效降低疾病活动度评分、结肠病理学评分,能显著地清除模型小鼠外周血、脾脏及结肠固有层单个核细胞中CD3+T细胞,明显降低结肠组织中IFN-γ、IL-17的表达水平,同时增加了IL-5和IL-13的表达,并相应下调TNF-α、IFN-γ、IL-17和IL-6及炎症调控因子IL-12和IL-23的m RNA表达水平。结论:抗CD52单抗能有效地治疗IL-10基因敲除小鼠的结肠炎,其干预效果与活化T细胞的直接清除相关,此外,其对IL-12/23通路的下调及Th2反应的诱导作用亦可能与干预作用相关。

UC患者IL-10基因rs1800871、rs1800872、rs1800896位点基因多态性分析

目的分析溃疡性结肠炎(UC)患者白细胞介素-10(IL-10)基因rs1800871、rs1800872、rs1800896位点基因多态性。方法选择2014年1月—2018年12月本院收治的80例UC患者作为研究对象,均纳入UC组。另按1∶1比例筛选同期于本院行健康体检的非UC健康人群80名纳入对照组。聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法(PCR-RFLP)检测其IL-10基因多态性,比较两组IL-10基因-819T/C(rs1800871)位点、-592A/C(rs1800872)位点、-1082G/A(rs1800896)位点的基因多态性分布情况。结果两组IL-10基因-819T/C(rs1800871)位点CC、CT、TT型基因分布、-592A/C(rs1800872)位点AA、AG、CC基因型分布情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05);但-1082G/A(rs1800896)位点GG分布比重显著高于对照组,AA型基因比重显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-10基因-1082G/A(rs1800896)位点或与UC密切相关,GG基因型或为UC的易感基因,AA型基因或为保护型基因,值得临床重视。

IL-10基因型——肠易激综合征中炎症存在的证据?

近来有研究者发现,在肠易激综合征(IBS)患者的回肠未端肥大细胞的数目明显增多,此外,还发现部分溃疡性结肠炎患者,当炎症消失后,IBS样症状仍然持续存在,因此,有人提出炎症在IBS的发病机制中起作用。

IL-10基因多态性与脓毒血症患者AKI发生率及患者预后的关系

目的探讨白细胞介素-10基因多态性与脓毒血症患者急性肾损伤(AKI)发生率及患者预后的关系。方法选取重庆市第六人民医院2016年月8月至2019年4月160例就诊并确诊为脓毒血症患者作为研究对象,根据患者住院期间是否发生急性肾功能损伤分为发生AKI的观察组(40例)与未发生AKI的对照组(120例),所有患者抽取外周血检测机体IL-10-592A/A基因多态性,采用Logistics探讨患者IL-10基因-592A/A多态性与患者AKI发生及脓毒血症患者临预后的关系。结果观察组患者IL-10基因-1082G/A基因型A/A占47.5%,明显高于对照组患者的14.2%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者各基因型IL-10和TNF-a水平明显高于对照组各基因型,观察组患者基因型A/A患者IL-10和TNF-a水平分为(32.5±8.4)ng/L、(17.8±6.2)ng/L明显高于其他基因型和对照组各基因型,IL-10基因-1082A/A、IL-10、AKI是患者脓毒血症死亡的独立危险因素。结论IL-10基因型为A/A是脓毒血症患者发生AKI的独立风险因素,是患者预后不良的独立危险因素。

IL-10-819位点基因多态性与汉族人群重度慢性牙周炎易感性相关性的研究

目的 探讨IL 10启动子区基因多态性与重度慢性牙周炎易感性的关系。方法 收集 14 2名重度慢性牙周炎患者和 81名健康对照者的颊粘膜拭子 ,提取DNA ,采用ASO PCR方法检测IL 10 819位点基因多态性 ,比较重度慢性牙周炎患者和健康对照组中等位基因频率和基因型分布。结果 IL 10 819C/T等位基因频率和基因型分布在患者和对照组之间差异无显著性 (OR =1.377,P =0 .12 2 >0 .0 5 )。结论 IL 10 819位点基因多态性与汉族人群重度慢性牙周炎遗传易感性无相关关系。

维持性血液透析患者机体营养状况及IL-10基因多态性与肺部感染的相关性

目的分析维持性血液透析患者机体营养状况及IL-10基因多态性与肺部感染的相关性,为维持性血液透析患者肺部感染的早期干预与治疗提供依据。方法选择2018年3月-2019年3月贵州中医药大学第一附属医院收治的终末期肾病维持性血液透析患者146例为研究对象,根据患者是否发生肺部感染,分为肺部感染组患者54例、未感染组患者92例。分析两组患者营养状况评分及血清白蛋白水平,并检测患者白细胞介素-10(IL-10)的基因多态性。结果两组患者年龄、病程以及平均透析时间比较差异有统计学意义(P<0.05)。肺部感染组患者营养状况评分(18.94±3.42)分高于未感染组,血清白蛋白水平(23.47±4.29)g/L低于未感染组(均P<0.05)。两组患者IL-10 rs1554286位点基因型比较差异有统计学意义(P<0.05),肺部感染组患者IL-10 rs1554286位点G等位基因频率高于未感染组(P<0.05)。肺部感染组患者IL-10 rs1518111位点基因型与未感染组患者比较差异有统计学意义(P<0.05),肺部感染患者IL-10 rs1518111位点C等位基因频率高于未感染组(P<0.05)。结论维持性血液透析肺部感染患者营养状况差、血清白蛋白水平低,此外肺部感染的发生与患者IL-10基因多态性有关。

3例极早发炎症性肠病患儿及其父母IL-10RA基因序列分析

目的分析3例极早发炎症性肠病患儿及其父母IL-10RA基因序列,探讨早发炎症性肠病患儿家系遗传学特点。方法采用桑格尔测序方法对3例极早发炎症性肠病患儿及其父母进行IL-10RA基因序列分析,利用NCBI蛋白数据库和Bioedit软件进行人类和不同物种IL-10RA蛋白同源性比较,并运用Polyphen-2及MutaitonTaster软件进行检出突变的致病性预测。结合既往文献及本研究中的患儿基因突变位点制作我国IL-10RA基因突变谱。结果3个家庭IL-10RA基因分析发现,c.299T>G(p.V100G)、c.301C>T(p.R101W)及c.326C>A(p.S109Y)突变,患儿父母均为上述3种突变基因的携带者。IL-10RA基因突变谱显示,共有23个突变在我国患者中检出,其中,p.R101W为最热点突变(119/256等位基因),p.T179T为次热点突变(67/256等位基因);另外,p.V100G、p.R117H、p.R165X在中国人群中也较为常见(分别占16/256、11/256及11/256等位基因)。结论3例极早发炎症性肠病患儿IL-10RA基因中突变位点为p.V100G、p.R101W及p.S109Y,患儿父母均为上述突变基因携带者。p.R101W为IL-10RA基因最热点突变。

安徽汉族人群IL-1F10-3基因rs3811058位点单核甘酸多态性与强直性脊柱炎患者遗传易感性研究

目的了解IL-1F10-3基因rs3811058位点的单核苷酸多态性与强直性脊柱炎遗传易感性的关系。方法采用病例对照研究设计,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对基因型筛查并进行基因组测序验证,检测151例强直性脊柱炎患者和155例正常对照基因型,并分析基因型及等位基因频率在两组中的分布。结果 IL-1F10-3基因rs3811058位点的等位基因频率和基因型频率在病例组和对照组中的分布差异均无统计学意义。结论安徽地区汉族人群强直性脊柱炎患者遗传易感性可能与IL-1F10-3基因rs3811058位点单核苷酸多态性无关。

慢性HBV感染者IL-10启动子592位点基因多态性与血清IL-10的表达分析

目的探讨慢性乙型肝炎患者IL-10-592各基因型与血清中IL-10表达水平的关系。方法以117例HBV感染者作为疾病组,81例体检健康者(仅抗HBc为阳性的既往感染者)作为对照组。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCRRFLP)技术检测两组IL-10-592基因型,ELISA法检测两组血清IL-10的浓度。结果疾病组血清IL-10水平为348.28(231.9,411.76)pg/mL,与对照组的228.74(160.59,364.18)pg/mL比较,差异有统计学意义(H=14.49,P<0.05)。患者IL-10-592 CC基因型血清IL-10水平为448.64(402.51,584.78)pg/mL,与AA基因型294.78(190.49,354.36)pg/mL和AC基因型297.01(205.99,385.33)pg/mL比较,差异均有统计学意义(H分别为37.87和30.92,P均<0.05)。而AA基因型与AC基因型比较,差异无统计学意义(H=0.10,P>0.05)。结论慢性乙肝患者IL-10启动子592位点的多态性影响血清IL-10的水平,CC基因型促进IL-10高表达,AA基因型引起IL-10低表达。