重组白细胞介素10-pEGFP-N2质粒构建及表达

目的 将IL 10基因定向克隆入pEGFP N2质粒 ,探讨采用构建的质粒转染支气管上皮细胞H2 92株 ,稳定表达IL 10和荧光蛋白可行性。方法 采用定向克隆技术 ,将IL 10基因克隆入pEGFP N2质粒 ,用构建成功的IL 10 pEGFP N2质粒在Fuge 6介导下转染培养的支气管上皮细胞株 (H2 92 ) ,利用免疫组化、RT PCR检测细胞中IL 10蛋白和mRNA的表达 ,并在荧光显微镜下观察荧光蛋白表达。结果 ①重组后的pEGFP N2质粒已成功载入IL 10基因。②IL 10 pEGFP N2质粒转染支气管上皮细胞H2 92株后 ,可在H2 92株内表达IL 10mRNA、IL 10蛋白和荧光蛋白。结论 重组的IL 10 pEGFP N2质粒可在上皮细胞内表达IL 10和荧光蛋白。由于两者共用一个启动子 ,荧光蛋白表达可报告IL 10表达 ,适用于动物实验气道内的IL 10转基因研究。