外周血单个核细胞端粒酶活性及IL-2、IL-12水平与老年性肺炎关系的研究

目的:探讨外周血单个核细胞(PBMC)端粒酶活性及其分泌IL-2、IL-12水平与老年性肺炎的关系。方法:利用ELISA法和PCR-ELISA法,分别检测对照组与成年肺炎组、老年肺炎组治疗前与恢复期外周血单个核细胞端粒酶的活性及其培养液上清中IL-2和IL-12水平。结果:肺炎组治疗前、后IL-2与IL-12水平均高于对照组(P<0.05);肺炎组治疗后IL-2与IL-12水平较治疗前下降(P<0.05);恢复期IL-12水平老年肺炎组高于成年肺炎组(P<0.05);成年肺炎组治疗前端粒酶活性高于对照组(P<0.01),老年肺炎组端粒酶活性治疗前、后均低于对照组(P<0.05)。结论:外周血单个核细胞端粒酶活性及培养分泌的IL-2、IL-12参与老年性肺炎患者保护性免疫应答。

IL-12增强结核病患者中性粒细胞吞噬和杀伤结核杆菌的活性

目的:观察IL-12对结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)对结核分枝杆菌(M.tb)吞噬和杀伤功能的影响。方法:结核病患者和正常人外周血与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的M.tb共同孵育不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测PMN对M.tb的吞噬率;结核病患者和正常人外周血均加入2'7'二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用,同时加或者不加M.tb共同孵育不同时间后,用FCM检测PMN的活化率并计算活性氧(ROS)产生量;不同浓度IL-12预先作用外周血后,再用上述方法检测PMN对M.tb吞噬率,活化率及产生ROS的变化。结果:结核病患者和正常人PMN对M.tb吞噬率,PMN活化率和ROS产生均随时间延长而增加,但结核病患者5 min吞噬率(51.82±6.93)%高于正常人(47.20±4.26)%(P<0.05);IL-12预先作用后,结核病患者和正常人PMN吞噬率、PMN活化率和ROS的产生均随浓度增大而显著增加,两者之间无显著性差异。结论:结核病患者外周血PMN对M.tb的吞噬功能以及ROS产生与正常人无显著性差异,仅早期吞噬率较高。IL-12略增强PMN吞噬和产生ROS的反应能力。

五加皮抗肿瘤活性物质Age对单核细胞产生TNF-α和IL-12的影响

目的 :研究五加皮抗肿瘤成分Age对单核细胞功能的影响 ,揭示Age抗肿瘤机制。方法 :使用对TNF敏感的L92 9细胞采用生物法测定了TNF含量 ,用ELISA法测定了IL 12的含量。用RT PCR法分析了单核细胞的细胞因子mRNA表达。用同位素法分析了Age对单核细胞吞噬功能的作用。结果 :Age与单核细胞共同培养后 ,单核细胞TNF α、IL 12等细胞因子的产生明显增加 (P <0 0 1) ,而且有较好的量效关系。在单核细胞与LPS的培养液中加入不同浓度的Age ,经培养后与单独加入LPS相比TNF α分泌的量显著增加 ,显示了Age对LPS的单核细胞刺激有相加作用。经Age处理后 ,单核细胞的TNF α、IL 12等细胞因子的mRNA表达也明显增强。体内实验结果也显示 ,Age对单核细胞的细胞因子产生有一定的影响。荷瘤小鼠经口连续投入Age后 ,血清中和脾脏分离的单核细胞体外培养上清中TNF α和IL 12含量明显提高 ,单核细胞TNF α、IL 12mR NA表达也明显增强 (P <0 0 1) ,从蛋白水平和分子水平证明了Age对单核细胞的细胞因子产生有促进作用。结论 :中药五加皮抗肿瘤有效成分Age对单核细胞有较强的刺激作用。通过促进其细胞因子的分泌和吞噬功能的增强杀伤肿瘤或抵抗肿瘤发生 ,所分泌的细胞因子还可通过调节免疫功能达到治疗肿瘤作用。该结果对五加皮?

康莱特对系膜细胞增殖及端粒酶活性影响的研究

目的:探讨康莱特注射液(KLT)对大鼠系膜细胞(MC)增殖及端粒酶活性的影响。方法:采用活细胞计数法检测不同浓度KLT对MC增殖的影响,采用MTT法检测MC在KLT,IL1(白细胞介素1)分别及共同刺激下的增殖情况,采用端粒重复序列扩增酶联免疫吸附法及聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法进行端粒酶活性定量及定性检测并作相关统计学检验。结果:KLT抑制MC增殖,伴随端粒酶活性降低。IL1刺激MC增殖,伴随端粒酶活性升高;两者先后共同作用,抑制MC增殖,抑制端粒酶活性。结论:康莱特对系膜细胞的增殖和端粒酶表达均有抑制作用,并可干预IL1的刺激效应,对防治MC增殖相关的肾小球肾炎可能有应用价值。

表达鸡IL-12重组乳酸乳球菌的构建及其生物学活性检测

鸡白细胞介素12(ChIL-12)是由IL-12p40和IL-12p35两个亚基组成的一个异源二聚体,具有促进T淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK cell)成熟的作用,能够作为黏膜疫苗佐剂。本研究中采用公认的食品级乳酸乳球菌表达系统构建表达目的融合蛋白Ch IL-12p40-(G_4S)_3ChIL-12p35(rChIL-12),并经western blot检测。结果显示:目的融合蛋白呈可溶性状态表达。体外鸡淋巴细胞刺激试验显示,经rChIL-12处理的鸡脾淋巴细胞能够产生干扰素γ(IFN-γ),表明该融合蛋白具有诱导IFN-γ产生的生物学活性。本研究结果为进一步利用rChIL-12作为粘膜疫苗佐剂的研发奠定了基础。

编码膜结合IL-4或IL-12的质粒可明显增强癌胚抗原DNA疫苗的活性

DNA疫苗可诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和体液免疫应答,是抗肿瘤和预防传染病的一种行之有效的方法.已有实验证明,细胞因子具有增强DNA疫苗免疫应答的佐剂作用,但循环性细胞因子会引起一些不良生理反应,所以此项研究试图利用膜结合表达的方式将细胞因子固定在注射部位,达到既能产生免疫佐剂作用,又不引起明显的不良反应.

VIP对裸鼠荷MKN45移植瘤IL-10、IL-12的影响

目的研究VIP对荷MKN45裸鼠移植瘤IL-10、IL-12表达的影响,并探讨其机制。方法建立裸鼠皮下实体瘤模型,当接种了MKN45实体瘤的裸鼠的肿瘤体积大约为30mm^3时随机分为VIP组、VIP受体拮抗剂组、对照组3个组,每组6只。每天皮下注射VIP或VIP受体拮抗剂10μg/100μl/只,对照组PBS 100ul/只。4周后处死裸鼠,取出移植瘤,用免疫组织化学检测移植瘤组织中IL-10、IL-12蛋白表达的变化。结果 IL-10及IL-12蛋白的表达在各组间存在差异(P<0.05)。VIP组IL-10的表达显著高于对照组(P<0.05);VIP组IL-12蛋白的表达显著低于VIP拮抗剂组(P<0.05);而其它各组间两者的表达无显著性差异(P>0.05)。结论 IL-10在VIP处理组中蛋白表达增加,而IL-12在VIP处理组中蛋白表达下降,VIP可能通过促进IL-10、抑制IL-12的表达,进而抑制抗原呈递,从而降低机体的免疫监视功能。

IL-12和IL-18与Ⅰ型辅助T细胞应答

IL 12和IL 18具有许多类似的生物学活性 ,在诱导IFN γ和Th1反应的产生上两者相互协同。本文就IL 12和IL 18在诱生IFN γ和Th1反应中的作用作一综述。

Vitamin D_3对儿童桥本甲状腺炎IL-10、IL-12的调节作用

目的:分别以IL-12、IL-10作为Th1、Th2的代表,在1,α25(OH)2D3的干预下,在单核细胞水平分析人外周血单核细胞(PBMC)中IL-10、IL-12在儿童桥本甲状腺炎(HT)中的细微变化,并探讨1α,25(OH)2D3的免疫调节作用。方法:以27例HT患儿为研究对象,17名健康儿童作对照,采集外周静脉血,一部分用于分离并培养单核细胞,设1,α25(OH)2D3干预组和对照组,收集培养上清液,ELISA检测上清液中IL-10、IL-12水平。另一部分静脉血分离出血清,再提取25(OH)D3,用放射免疫法(RIA)测定25(OH)D3水平。结果:HT组25(OH)D3显著低于健康对照,分别为(21.85±5.73)ng/mL和(27.56±7.46)ng/mL(P<0.01),且HT组PBMC产生IL-12水平显著高于健康对照,分别为(119.18±28.65)pg/mL和(102.84±23.86)pg/mL(P<0.01),而IL-10的表达显著低于健康对照,分别为(132.99±12.04)pg/mL和(171.41±35.72)pg/mL(P<0.01)。1α,25(OH)2D3干预后HT患儿IL-12表达显著下调为(98.57±11.98)pg/mL(P<0.01),IL-10表达在HT组和健康对照组均上调,分别为(184.15±35.34)pg/mL(P<0.01)、(223.77±53.36)pg/mL(P<0.01),HT组ρ(IL-10)/ρ(IL-12)比值显著升高。结论:HT患儿的25(OH)D3水平不足。1α,25(OH)2D3参与单核细胞分泌细胞因子的调节过程,能抑制HT增强的Th1型细胞因子IL-12分泌,增加IL-10表达,纠正n(Th1)/n(Th2)细胞因子失衡。

人IL-12双亚基共表达载体的构建及其表达

目的构建人ＩＬ－１２的高效表达载体。方法采用ｐＣＤＮＡ３．１从已克隆的ｐ４０ｃＤＮＡ基因与国外提供的ｐ３５ｃＤＮＡ基因上获得相应的编码基因，分别构建表达载体进行转染。此后，又利用ｐＬＸＰＸＳＮ构建ＩＬ－１２双亚基共表达的逆转录病毒载体转导人肝癌细胞株，并经Ｇ４１８筛选。结果有功能活性的ＩＬ－１２的产生需要ｐ３５和ｐ４０基因的等量共转染。为此，人ＩＬ－１２双亚基共表达载体在转染肝癌细胞株并经选择后，上清液中查到了较共转染更高的具有刺激淋巴母细胞增殖活性的ＩＬ－１２。结论这种人ＩＬ－１２双亚基共表达载体是进行ＩＬ－１２基因转染的有效表达载体。

IL-18对NK细胞的调节

1 IL-18对NK细胞增殖和分化的影响及其机制 在免疫应答中NK细胞的增殖和分化受多种细胞因子的调节[1]。例如,IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白细胞调节素（Leukoregulin,LR）对NK细胞的活化和分化都有正调节作用,体外培养时加入上述细胞因子可明显提高NK细胞的杀伤活性。前列腺素（PG）E1、E2、D2和肾上腺皮质激素等则对NK细胞的活性有抑制作用。Jason等[1]最近的研究表明IL-18可促进NK细胞的成熟。

白介素-12及其与病毒性肝炎的关系

白介素 - 12 (IL- 12 )是一种异源二聚体细胞因子 ,被认为是细胞免疫应答过程中的初始因子 ,能激活NK细胞、T细胞 ,并诱使其分泌大量 IFN- T,对体内病原微生物感染有重要抵御作用 ,在病毒性疾病的治疗中显示了良好的应用前景。本文仅就 IL-

免疫功能受损宿主外周血单个核细胞端粒酶活性研究

目的 探讨免疫功能受损宿主外周血单个核细胞 (PBMC)端粒酶活性的表达情况。方法 采用PCR ELISA法测定了 17例健康者、14例慢性乙型肝炎、8例糖尿病和 8例慢性肾功能衰竭患者的PBMC经植物血凝素 (PHA)刺激前后端粒酶的活性水平 ,及重组人白细胞介素 12 (rhIL 12 )对端粒酶活性的影响。结果 (1) 4组静息PBMC有低水平的端粒酶活性表达 (A值分别为 0 5 2± 0 2 8、0 32± 0 2 7、0 41± 0 2 0及 0 43± 0 30 ) ,经PHA刺激后活性明显升高 (1 39± 0 0 9、1 2 1± 0 38、1 38±0 11及 1 36± 0 0 8) ;(2 )慢性乙型肝炎患者静息期PBMC端粒酶活性显著低于健康者 ,但PHA刺激后两者活性差异无显著性 ;(3)未能发现rhIL 12对端粒酶活性的影响。结论 PBMC能表达端粒酶活性 ,慢性乙型肝炎患者的免疫功能缺损可能与其PBMC端粒酶活性下降有关。

用细胞因子流式细胞计数术体外检测重组人IL-12的生物学活性

对重组IL-12生物学活性的鉴定目前国内外多采用淋巴细胞增生试验（MTT）、NK细胞杀伤试验（LDH）、IFN-γ产生等方法.细胞因子流式细胞（cytokine follow cytometry,CFC）是近年来体外细胞免疫功能研究中出现的新方法,不仅简单、快速,而且可以同时获得针对某种抗原特异性T细胞亚群数量及其功能的二维指标.本研究构建了人IL-12单链双亚基共表达载体,在HEK293细胞中表达重组IL-12.分别应用CFC、MTT、LDH等方法对其生物学活性进行鉴定.

电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞IL-12和NF-κB活性的影响

目的 观察电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞IL 12和NF κB活性的影响以及两者间相互作用的关系。方法 采用酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测IL 12蛋白水平变化 ,通过电泳凝胶移动变化分析 (EMSA)检测NF κB结合活性的变化。结果 ①ELISA检测结果显示 ,腹腔巨噬细胞分泌的IL 12在 0 0 75GyX射线全身照射后 4～ 8h升高 (P <0 0 5 ) ,2Gy照射后从 2h开始升高 ,一直持续至 4 8h仍高于假照组的水平 (P <0 0 5 ) ,而且 2Gy引起IL 12升高的幅度大于 0 0 75Gy ;②EMSA检测结果显示 ,NF κB呈现两条特异带分别代表P6 5 P5 0、P5 0 P5 0两种二聚体 ,0 0 75Gy照射后P6 5 P5 0明显增高 ,最高时超过假照组的 2 0 0 % (2～ 8h) ,而P5 0 P5 0则升高不明显 ;2Gy照射后则显示P6 5 P5 0、P5 0 P5 0均明显升高 ,二者在 2～ 8h也超过假照组的 2 0 0 %。结论 IL 12表达增强和NF κB活性升高的一致性提示NF κB可能参与辐射诱导IL 12变化的分子调控。