IL-12重组载体转染肿瘤细胞的构建

目的探讨空白质粒与pcDNA6-P70转染对小鼠s-180肉瘤细胞的保护效果。方法pcDNA6-P70组:采用构建好的人IL-12单链双亚基共表达真核表达质粒(pcDNA6-P70)来转染小鼠s-180肉瘤细胞;对照组A采用空白质粒转染小鼠s-180肉瘤细胞;对照组B为未行转染的小鼠s-180肉瘤细胞。各组均分别选用浓度3、5、7、10μg/ml的杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选,筛选成功后继续保持一段时间的筛选压力。比较杀稻瘟菌素对各组小鼠s-180肉瘤细胞的杀伤率。结果3、5、7、10μg/ml杀稻瘟菌素对对照组B的杀伤率分别为(57±2)%(、68±2)%、(79±2)%(、93±2)%,而对pcDNA6-P70组及对照组A的杀伤率为0。结论10μg/ml的杀稻瘟菌素对小鼠s-180肉瘤细胞的杀伤效果最好,空白质粒与pcDNA6-P70转染对小鼠s-180肉瘤细胞的保护效果相同。

小鼠骨髓间充质干细胞联合IL-12重组质粒对小鼠乳腺癌的治疗作用

目的探讨小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)对小鼠乳腺癌EMT6细胞在体内外的抑制作用以及BMSC与IL-12真核表达质粒(pcDNA6/IL-12)联合应用对荷瘤小鼠的治疗作用。方法全骨髓贴壁法培养BMSC并鉴定;CCK-8法检测BMSC条件培养基对EMT6细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/7-AAD双染色结合流式细胞术检测BMSC条件培养基对EMT6细胞凋亡的影响。建立小鼠乳腺癌荷瘤模型,分别为对照组(瘤内注射PBS)、BMSC组(瘤内注射BMSC)、IL-12组(瘤内注射pcDNA6/IL-12质粒)、BMSC联合IL-12组(瘤内注射BMSC和pcDNA6/IL-12质粒)。于致瘤后第17天处死小鼠,取出肿瘤和脾脏并称其质量,计算脾指数;MTT法检测脾淋巴细胞增殖活性,LDH法检测脾淋巴细胞杀伤活性,HE染色观察肿瘤组织的病理学改变。结果 BMSC条件培养基在体外可显著抑制EMT6的增殖并促进其凋亡(P<0.05﹚。BMSC单独及其与pcDNA6/IL-12联合应用可导致荷瘤小鼠肿瘤的体积缩小(P<0.01﹚,脾淋巴细胞增生反应及杀伤活性增强(P<0.05﹚,肿瘤组织坏死区扩大、炎性细胞浸润增多。结论 BMSC在体内外均具有良好的抗肿瘤作用,与pcDNA6/IL-12在荷瘤小鼠体内联合应用可获得更强的抗肿瘤活性。