白介素-13受体α2抗原肽致敏的DC-CIK细胞对人胶质瘤U_(251)细胞的杀伤效应

目的:观察人脑胶质母细胞瘤特异性抗原(IL-13Rα2)致敏的同源细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)在体外对U251的细胞毒效应。方法:用密度梯度分离法获取HLA-A*0201+健康志愿者的人外周血树突状细胞(dendritic cells,DC)的前体细胞与淋巴细胞,并在体外诱导而获得成熟的DC细胞和CIK细胞。收获IL-13Rα2抗原负载的DC与CIK细胞共培养,使DC递呈肿瘤抗原予CIK细胞,并激活CIK细胞。激活的CIK细胞与U251细胞在96孔板内混合培养24 h后,以CCK-8试剂间接检测其对U251细胞杀伤率。结果:IL-13Rα2抗原肽成功负载DC,CIK细胞被负载抗原的DC激活并增殖;特异性抗原肽激活的CIK细胞对人胶质瘤U251细胞有杀伤效应(P<0.01)。结论:IL-13Rα2抗原肽激活的CIK细胞对人胶质瘤U251细胞有杀伤效应。

Tricellulin与IL-13Rα2在结直肠癌中的表达及相关性分析

目的探讨Tricellulin与IL-13Rα2在早期与晚期结直肠癌组织中的表达及Tricellulin与IL-13Rα2的表达相关性。方法选取滨州医学院附属医院2020年1—7月的收治的42例结直肠癌患者术后的石蜡组织标本。采用免疫组化法检测Tricellulin与IL-13Rα2表达,分析其与临床病理特征的关系,观察肿瘤不同分化程度中Tricellulin核表达的情况,分析Tricellulin与IL-13Rα2的表达相关性。结果与TNM分期较早(Ⅰ/Ⅱ期)的患者比较,结直肠癌TNM分期较晚(Ⅲ/Ⅳ期)的患者中Tricellulin与IL-13Rα2的H-Score评分较高(P<0.05)。低分化结直肠癌组织中存在Tricellulin异常的核表达(P<0.05)。Pearson相关性分析显示IL-13Rα2与Tricellulin的表达呈正相关(P<0.05)。结论Tricellulin与IL-13Rα2在晚期结直肠癌组织中表达明显增加。低分化结直肠癌组织中存在Tricellulin异常的核表达。IL-13Rα2与Tricellulin的表达存在正相关。

哮喘患儿血清中sIL-2R、IL-2、IL-4、IL-13的水平变化与临床意义

目的探讨哮喘患儿血清中可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)的水平变化及其与哮喘发病机制的关系。方法每例样本均取空腹静脉血并即时分离血清1ml,用ELISA法检测血清中sIL-2R、IL-2、IL-4、IL-13的水平并对结果进行统计学分析。结果哮喘急性发作组、缓解组的血清中sIL-2R、IL-2、IL-4、IL-13的结果与正常对照组比较差异均有显著性(P<0.05)。其中哮喘急性发作组、缓解组血清中sIL-2R、IL-4、IL-13的结果要明显高于正常对照组,而IL-2则明显低于正常对照组。此外,哮喘急性发作组与缓解组血清中IL-2、IL-4、IL-13的结果相比较差异均有显著性(P均<0.05),而SIL-2R则无明显差异。结论哮喘患儿血清中sIL-2R、IL-2、IL-4、IL-13的水平伴随病情进展发生显著的变化,说明它们在哮喘的免疫病理过程中起着重要的作用。

IL-2Rα模拟肽抑制小鼠皮肤移植排斥反应的研究

目的:研究IL-2Rα模拟肽CP对小鼠皮肤移植排斥反应的影响。方法:采用小鼠同种皮肤移植模型,通过淋巴细胞增殖试验、单向混合淋巴细胞反应、脾脏T淋巴细胞亚群分析和细胞因子分泌水平测定、皮肤移植物组织学改变、记录皮肤移植物平均存活时间(MST)研究环七肽CP的免疫抑制效应。结果:环七肽CP可降低小鼠脾细胞增殖反应的强度、减少受鼠脾脏T淋巴细胞中CD4+T淋巴细胞的数目并降低CD4+/CD8+的比值、下调受鼠脾脏T淋巴细胞诱导上清中IL-2和IFN的水平,并可延长皮肤移植物平均存活时间(MST);环七肽CP与免疫抑制剂CsA联用,显示二者具有协同效应。结论:环肽CP以IL-2Rα模拟肽的方式发挥生物学效应,可有效抑制小鼠皮肤移植排斥反应。

利用噬菌体肽库筛选IL-2Rα模拟表位肽的研究

目的筛选IL-2Rα模拟表位肽,为研制高效、特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法应用离子交换层析法从小鼠腹水中纯化抗人IL-2Rα单克隆抗体5G1,细胞ELISA方法检测其特异性。用5G1单抗筛选噬菌体环七肽库,并对噬菌体克隆进行抗原性鉴定。根据阳性克隆的DNA序列合成环肽并鉴定其生物活性。结果经5轮筛选、鉴定,获得5个与5G1有较强结合特性的噬菌体阳性克隆。DNA测序并推导氨基酸序列,得到Lys-X-{X}-Lys-Gly保守序列。依此序列合成环七肽CP,小鼠淋巴细胞增殖试验证实其有免疫抑制活性。结论环肽CP为IL-2Rα模拟表位肽,可作为IL-2Rα的拮抗剂发挥免疫抑制效应。

IL-13对A549细胞IL-13Rα2表达及增殖和迁移的影响

目的探讨IL-13对人肺腺癌细胞(A549)IL-13受体α2(IL-13Rα2)表达及增殖、迁移的影响。方法采用定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)、Western blot法检测IL-13刺激A549细胞后,检测IL-13Rα2的转录和蛋白质表达水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中的可溶型IL-13受体α2(sIL-13Rα2)含量;流式细胞术(FCM)检测胞膜型IL-13受体α2(memIL-13Rα2)、胞内型IL-13受体Rα2(iIL-13Rα2)的细胞数。MTT法、Transwell实验和细胞划痕实验观察IL-13对A549细胞增殖及迁移作用的影响。结果 A549细胞可表达IL-13Rα2,并且IL-13在较低质量浓度(10、20 ng·mL^(-1))时能上调A549细胞IL-13Rα2的表达水平,而对增殖和迁移无显著影响;在较高质量浓度(50、100 ng·mL^(-1))时对IL-13Rα2的上调作用不明显,但能促进细胞增殖和迁移。另外低质量浓度IL-13(10、20 ng·mL^(-1))对IL-13Rα2整体水平、sIL-13Rα2、memIL-13Rα2以及iIL-13Rα2的表达均有不同程度的上调(P<0.05);高质量浓度IL-13(50、100 ng·mL^(-1))刺激条件下IL-13Rα2整体水平的上调不明显且不再有剂量依赖性,sIL-13Rα2水平无明显改变、memIL-13Rα2表达略有增加、iIL-13Rα2水平明显下调(P<0.05)。结论IL-13对人肺腺癌A549细胞IL-13Rα2表达水平及增殖、迁移的影响具有双相性和差异性;IL-13Rα2在肺腺癌A549中发挥抑制IL-13促细胞增殖和迁移的作用。

sIL-13Rα2抑制IL-13介导的NIH-3T3胶原I的合成及血吸虫病肝组织中sIL-13Rα2/IL-13的表达(英文)

目的研究在成纤维细胞NIH-3T3中IL-13可溶性受体sIL-13Rα2对IL-13的抑制作用,为进一步研究sIL-13Rα2对日本血吸虫感染小鼠体内肝纤维化的治疗作用奠定基础。方法用ELISA和RT-PCR检测感染日本血吸虫的BALB/c小鼠0、6、8、10和12w不同感染时期肝脏组织IL-13和sIL-13Rα2表达和转录水平。构建sIL-13Rα2表达质粒转染成纤维细胞NIH-3T3,用IL-13(50ng/mL)刺激转染后成纤维细胞NIH-3T3,用RT-PCR和Western blotting分别检测该细胞分泌的Ⅰ型胶原。结果感染后小鼠肝脏肉芽肿组织中IL-13和sIL-13Rα2的蛋白表达水平随感染时间的延长而逐渐增高,第8wIL-13水平达到高峰(16.1586pg/mL),随后逐渐降低但仍高于正常水平(3.4146pg/mLP=0.017);第10wsIL-13Rα2的分泌达到高峰(4827.426pg/mL),以后逐渐减低,但仍高于正常水平(4057.112pg/mLP=0.021)。IL-13和sIL-13Rα2的mRNA转录趋势和ELISA检测结果相符合,均随感染时间的延长而增高,分别在第8w和第10w达到最高峰,随后逐渐降低但仍高于正常组小鼠(P=0.033;P=0.025)。实验组(sIL-13Rα2=2mg/mL)Ⅰ型胶原mRNA转录水平较正常对照组减低8.83%(P=0.012);蛋白水平较对照组减低7.41%(P=0.031)。结论sIL-13Rα2在NIH-3T3细胞中对IL-13有抑制作用,提示sIL-13Rα2在治疗血吸虫病肝纤维化中具有潜在价值。

日本血吸虫感染鼠巨噬细胞IL-13Rα2的表达

目的检测IL-13的诱骗受体IL-13Rα2在血吸虫病巨噬细胞的表达,为从细胞水平探讨Th2型免疫性疾病分子病理机制奠定基础。方法建立日本血吸虫病鼠模型,采用免疫荧光标记法分别检测肝肉芽肿和原代巨噬细胞IL-13Rα2蛋白的表达情况。结果荧光显微镜下观察:肝肉芽肿内可见似"咖啡豆样"散在分布的IL-13Rα2免疫阳性信号,巨噬细胞膜内缘呈异常增强的环状荧光。结论巨噬细胞是IL-13Rα2阳性表达细胞,IL-13Rα2是血吸虫病重要的免疫病理调节分子。

人脑胶质瘤特异抗原肽白介素13α2受体的原核表达

目的:构建白介素13 α2受体(Interleukin-13α2 Receptor,IL-13Rα2)基因的表达质粒,并检测其在体外原核表达情况,为脑胶质瘤的免疫治疗奠定基础。方法:用RT-PCR技术从U251胶质瘤细胞株扩增IL-13Rα2基因,并与克隆质粒pMDl9 Simple T载体连接转入DH5α菌克隆,筛选重组阳性菌落,用Xhol和HindⅢ将目的基因从克隆质粒上切下并与同样双酶切后的表达质粒pET-28a连接,转入BL21(DE3)菌,提取重组质粒进行酶切及测序鉴定正确后,在IPTG诱导下原核表达IL-13R α2抗原肽,并利用镍柱进行纯化回收,SDS-PACE检测表达蛋白。结果:成功扩增出IL-13Rα2基因序列,大小为1142 bp,并表达纯化出IL-13Rα2抗原肽,大小为60 kD,于诱导第3 h表达量最高,以包涵体形式表达。结论:IL-13Rα2基因表达质粒能在体外成功构建,并能在IPTG诱导下成功表达及纯化得到IL-13Rα2抗原肽。

可结合细胞表面IL-2Rα的短肽分子的筛选

目的利用噬菌体肽库技术筛选可特异性结合IL-2Rα的短肽序列,探索获得IL-2Rα小分子拮抗剂的可能性。方法以高表达IL-2Rα的MT-2细胞为钓饵,筛选噬菌体线性12肽库,用抗IL-2Rα单克隆抗体竞争洗脱结合的噬菌体,细胞ELISA、免疫组化鉴定阳性噬菌体克隆,并测序。结果随机挑选的17个克隆中有7个可与MT-2细胞结合。免疫组化显示阳性噬菌体克隆M15可与MT-2细胞及PHA刺激的PBMC结合。根据阳性克隆DNA序列,推导出氨基酸序列,共有6种序列,富含亲水氨基酸并包含Tyr、Phe、Leu保守残基。结论得到含Tyr、Phe保守残基的序列,阳性序列可结合细胞表面的IL-2Rα。

利用噬菌体肽库确定IL-2Rα表位序列

目的：确定ＩＬ－2Ｒα表位，为研制高效特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法：用抗ＩＬ－２Ｒα单克隆抗体５Ｇ１对噬菌体六肽库进行筛选，选择出与５Ｇ１结合较强的克隆，经ＤＮＡ序列分析，获得保守序列。对合保守序列的克隆进行生物学活性鉴定。结果：选择出３１个与５Ｇ１结合较强的克隆。获得Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ和Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ两种保守序列。生物学活性鉴定表明：含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ序列克隆较含Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｐｈｅ被抑制效果好。结论：Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ是ＩＬ－２Ｒα表位的关键序列。以此表位序列合成的小分子肽可作为ＩＬ－２Ｒα的拮抗剂而成为免疫抑制剂。

抗IL-13Rα2单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定

目的:在成功制备小鼠抗人IL-13Rα2高亲和力单克隆抗体(mAb)的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人IL-13Rα2 mAb杂交瘤细胞LX147-7中提取总RNA,以此为模板反转录获得cDNA,用针对小鼠mAb重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应。将PCR产物连入克隆载体,经筛选阳性克隆,PCR和酶切鉴定正确后送测序,测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因。结论:获得了抗人IL-13Rα2 mAb LX147-7重链和轻链的可变区基因序列,为构建相关基因工程抗体打下了良好基础。

IL-13Rα2在肿瘤研究中的进展

近年来对肿瘤的治疗,越来越倾向于靶向治疗。所谓靶向治疗,即是在细胞分子水平上,针对已经明确的致癌位点（该位点可以是肿瘤细胞内部的一个蛋白分子,也可以是一个基因片段）来设计相应的治疗药物,药物进入体内会特异地选择致癌位点来结合发生作用,使肿瘤细胞特异性死亡,而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞,所以分子靶向治疗又被称为＂生物导弹＂。

IL-13Rα2及IL-13在胶质瘤发生发展及治疗中的研究进展

IL-13为活化Th2细胞分泌的多功能细胞因子,在炎症性疾病中具有重要作用.其高亲和力受体IL-13Rα2,作为诱导受体在恶性胶质瘤中高表达,与肿瘤不良预后相关.胶质瘤细胞中,IL-13Rα2与IL-13结合通过其胞内尾端与IL-4Rα相互作用,抑制IL-4R介导的STAT6信号通路,进而促进肿瘤细胞的侵袭转移与增殖,抑制肿瘤细胞凋亡.由于IL-13Rα2在胶质瘤中特异性高表达,使其成为胶质瘤靶向治疗和免疫治疗的理想位点,且已取得了突破性进展.IL-13Rα2与IL-13在胶质瘤中作用及机制的进一步明确,有利于为胶质瘤治疗提供充分的依据.

原发性肝胆管结石患者外周静脉血及肝动脉血T细胞亚群和T细胞HLA-DR抗原、IL-2R表达的研究

该研究测定了 2 0例原发性肝胆管结石患者外周静脉血及肝动脉血和 19例正常人外周静脉血的T淋巴细胞亚群及T淋巴细胞HLA -DR抗原 +和IL -2R+细胞百分率 ,结果显示 :原发性肝胆管结石组外周静脉血T淋巴细胞OKT+4 细胞百分率 (5 2 5 2± 8.0 1) %较正常对照组 (47 32± 6 1.10 ) %显著增高 (P <0 .0 5 ) ;T淋巴细胞HLA -DR抗原 +表达率 (10 .5 2± 5 .35 ) %较正常对照组 (4 80± 1.5 5 ) %显著增高 (P <0 .0 1) ;IL -2R+细胞百分率 (3 2 7± 1 90 ) %较正常对照组 (1 47± 0 .73) %显著增高 (P <0 .0 5 ) ;原发性肝胆管结石组外周静脉血与肝动脉血各相应指标间比较无显著差异 (P >0 .1)。结果提示 :原发性肝胆管结石患者细胞免疫功能有显著变化 ,可能与胆管系统局部病理改变有关 ;采取外周静脉血与采取肝动脉血检测T淋巴细胞亚群及T细胞HLA -DR抗原和IL2

益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎疗效及对血清NT-proBNP、NK活性、sIL-2R和IL-8水平的影响

目的:探讨益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎的疗效,以及其对脑钠肽(NT-pro BNP)、自然杀伤细胞(NK)活性、可溶性白细胞介素-2受体(s IL-2R)、白细胞介素-8 (IL-8)水平的影响。方法:选择我院2013年7月~2017年1月收治的CVB3病毒性心肌炎患者94例,按照随机数字表法分为对照组(n=47)和观察组(n=47),对照组给予抗病毒、抗感染、液体补充等治疗,观察组在对照组治疗基础上给予益气活血中药复方治疗,比较两组治疗效果,治疗前后证候积分,NT-pro BNP、NK活性、s IL-2R和IL-8水平变化,心肌酶谱[谷草转氨酶(AST)、肌酸磷酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)],不良反应。结果:治疗后,观察组发热、咽痛、心悸和胸痛积分均显著低于对照组(P<0. 05);治疗后,观察组NT-pro BNP、NK活性水平均显著高于对照组(P<0. 05),s IL-2R、IL-8水平均显著低于对照组(P<0. 05);观察组治疗显效率93. 62%显著高于对照组的78. 72%(P<0. 05);两组不良反应发生率无显著差异(P>0. 05)。结论:益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎疗效显著,可有效升高NT-proB NP、NK活性水平,降低sI L-2R、IL-8水平。

益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎疗效及对血清NT-proBNP、NK活性、s IL-2R和IL-8水平的影响

目的:观察益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎的疗效,以及其对脑钠肽(NT-pro BNP)、自然杀伤细胞(NK)活性、可溶性白细胞介素-2受体(s IL-2R)、白细胞介素-8 (IL-8)水平的影响。方法:选择我院2013年7月～2017年1月收治的CVB3病毒性心肌炎患者94例,按照随机数字表法分为对照组(n=47)和观察组(n=47),对照组给予抗病毒、抗感染、液体补充等治疗,观察组在对照组治疗基础上给予益气活血中药复方治疗,比较两组治疗效果,治疗前后证候积分,NT-pro BNP、NK活性、s IL-2R和IL-8水平变化,心肌酶谱[谷草转氨酶(AST)、肌酸磷酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)],不良反应。结果:治疗后,观察组发热、咽痛、心悸和胸痛积分均显著低于对照组(P<0. 05);治疗后,观察组NT-pro BNP、NK活性水平均显著高于对照组(P<0. 05),s IL-2R、IL-8水平均显著低于对照组(P<0. 05);观察组治疗显效率93. 62%显著高于对照组的78. 72%(P<0. 05);两组不良反应发生率无显著差异(P>0. 05)。结论:益气活血中药复方治疗CVB3病毒性心肌炎疗效显著,可有效升高NT-pro BNP、NK活性水平,降低s IL-2R、IL-8水平。

IL-13和乙醇促进人肺成纤维细胞胶原的表达

目的:研究乙醇和/或白细胞介素13(IL-13)对人肺成纤维细胞(HFL-1)Ⅰ、Ⅲ型胶原α1链基因(COL1A1、COL3A1)以及Ⅰ型胶原蛋白(CoⅠ)表达的影响,探讨肺纤维化的机制。方法:培养HFL-1,通过实时定量荧光RT-PCR检测乙醇和/或IL-13对HFL-1细胞IL-13受体(IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-4Rα)mRNA、COL1A1 mRNA和COL3A1 mRNA表达的影响,ELISA的方法检测乙醇和/或IL-13对HFL-1分泌CoⅠ的影响。结果:单独低浓度乙醇(25、50、100、200mmol/L)作用HFL-1后,与对照组相比IL-13Rα1 mRNA与IL-4Rα mRNA水平比对照组显著增高(P<0.05),而IL-13Rα2 mRNA水平比对照组显著降低(P<0.05)。单独低浓度乙醇(25、50、100、200 mmol/L)对HFL-1的COL1A1 mR-NA和COL3A1 mRNA表达无影响(P>0.05)。IL-13(10、20、50μg/L)可以促进HFL-1的COL1A1 mRNA和COL3A1 mR-NA的表达(P<0.05),且存在浓度依赖性。乙醇(200 mmol/L)与IL-13(10、20、50μg/L)共同作用刺激HFL-1促进COL1A1 mRNA和COL3A1 mRNA的表达比IL-13(10、20、50μg/L)单独作用强(P<0.05)。IL-13组(10、20、50μg/L)和乙醇(200 mmol/L)与IL-13(10、20、50μg/L)共同刺激组HFL-1均有CoⅠ的分泌,但共同刺激组HFL-1分泌CoⅠ量显著增加(P<0.05)。结论:单独低浓度乙醇(25、50、100、200mmol/L)不影响HFL-1细胞的COL1A1和COL3A1表达,但可以影响HFL-1细胞IL-4Rα、IL-13Rα1和IL-13Rα2的表达,而乙醇与IL-13共同刺激与单独IL-13刺激相比对HFL-1的COL1A1和COL3A1以及CoⅠ的表达有显著的促进作用。

热休克蛋白-抗原肽复合物疫苗对肝癌术后患者细胞免疫功能的影响

目的:探讨热休克蛋白(HSP)-抗原肽复合物疫苗对肝癌术后患者细胞免疫功能的影响方法:回顾性分析57例应用HSP疫苗的原发性肝癌患者,并检测治疗前后T细胞亚群、NK细胞活性和血清白介素(IL)-2受体水平的变化,并与对照组比较.结果:治疗组术后3moCD3+、CD8+、CD4+/CD8+水平分别为62.8±12.4,46.5±11.2,0.61±0.17与术前和对照组比较有显著性差异(P<0.05),NK细胞活性治疗后升高41.3±7.1,较治疗前明显升高(P<0.01).血清IL-2受体水平治疗后略升高7.8±1.0μg/L,与治疗前对比无显著性差异.结论:肝癌术后应用热休克蛋白-抗原肽复合物疫苗能明显提高患者免疫功能.