连翘脂素通过抑制IL-17信号改善2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠克罗恩病样结肠炎

目的:探究连翘脂素(PHI)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的克罗恩病(CD)样结肠炎的治疗效果及潜在的分子机制。方法:选取18只6~8周龄的野生型小鼠(C57BL/6J),并将其随机分为对照组(WT组)、模型组(TNBS组)和PHI干预组(PHI组),每组6只。其中TNBS组和PHI组小鼠均采用TNBS诱导CD样结肠炎模型,PHI组小鼠于造模成功后给予PHI干预(20 mg·kg^(-1)·d^(-1),灌胃),而WT组和TNBS组小鼠给予等量的0.9%氯化钠溶液。干预7 d后,采用疾病活动度指数(DAI)、体质量变化及结肠长度评估小鼠肠炎症状;采用HE染色和炎症评分观察小鼠结肠组织炎症程度;采用酶联免疫吸附实验检测小鼠结肠黏膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和干扰素-γ(IFN-γ)水平。使用网络药理学预测PHI作用于CD的可能机制,并进一步采用免疫印迹法进行验证。结果:PHI组小鼠DAI评分、结肠缩短程度均低于TNBS组(P<0.01),高于WT组(P<0.01);PHI小鼠体质量高于TMBS组(P<0.01),低于WT组(P<0.01);PHI组小鼠结肠组织学评分及肠黏膜炎症介质(TNF-α、IL-6和IFN-γ)水平均低于TNBS组(P<0.01),高于WT组(P<0.01)。网络药理学分析获得PHI作用于CD的潜在靶点共63个;生物信息学富集分析显示,PHI主要参与炎症反应的调控过程,且可能与白细胞介素-17(IL-17)信号通路有关。免疫印迹结果显示PHI组小鼠结肠黏膜组织中IL-17、白细胞介素-17受体A及核因子-κB激活剂1表达水平较TNBS组降低,但仍高于WT组(P<0.05~P<0.01)。结论:PHI可改善TNBS诱导的小鼠CD样结肠炎,这可能与其抑制IL-17信号通路有关。

龙胆泻肝汤加减对寻常型银屑病患者p38MAPK/IL-17信号通路的影响

目的:探讨龙胆泻肝汤加减治疗寻常型银屑病临床疗效及对p38MAPK/Th17信号通路的影响。方法:检测10例银屑病患者皮损与外科手术切除正常皮肤混合样本中p38MAPK基因的表达及该人群外周血中IL-17、IL-6细胞因子水平,并统计p38MAPK基因与2种细胞因子是否存在相关性,检测42例银屑病患者经龙胆泻肝汤加减治疗前后与30例健康对照者外周血5种细胞因子的表达水平及与患者PASI评分的相关性。结果:p38MAPK基因及IL-17、IL-6在银屑病患者皮损与外周血中表达高于健康对照组,且二者表达水平呈正相关;患者外周血中5种细胞因子的表达水平明显高于健康对照组,经龙胆泻肝汤加减治疗后患者外周血5种细胞因子的表达水平均明显下降,且与PASI评分呈正相关。结论:龙胆泻肝汤加减治疗寻常型银屑病临床疗效显著,可能与降低p38MAPK/IL-17信号通路相关细胞因子的表达有关。

miR-6819-3p及其IL-17信号通路中靶基因在斑秃病变部位的表达

目的研究miR-6819-3p及其IL-17信号通路中靶基因在斑秃病变部位的表达。方法收集2020年6-12月于山西省人民医院皮肤性病科诊疗的斑秃患者病变部位头皮和外科手术所获得的正常头皮组织,将其分为斑秃组和正常组。通过荧光定量PCR检测斑秃组和正常组的miR-6819-3p及其IL-17信号通路中靶基因(CSF3、CXCL8、FOS、FOSB、JUN和NFKBIA)的表达情况,并利用生物信息学分析miR-6819-3p与这些预测靶基因间的调控位点、以及它们在IL-17信号通路中的分布和相互作用关系。结果与正常组相比,斑秃组miR-6819-3p表达量降低(P<0.05),而CSF3、CXCL8、FOS、FOSB、JUN和NFKBIA基因表达量均呈现不同程度的增加(P<0.05)。生物信息学分析显示,CSF3、CXCL8、FOS、FOSB、JUN和NFKBIA是miR-6819-3p的潜在靶基因,且是IL-17发挥作用的下游关键基因。结论miR-6819-3p可以通过对靶基因以及IL-17信号通路的调控在斑秃的发病中发挥作用,提示这些基因可以成为斑秃诊断和治疗中的生物靶标。

IL-17信号通路在回归热神经性疏螺旋体病中的作用

目的研究白细胞介素(IL)-17信号通路在回归热神经性疏螺旋体病中的作用。方法将14只C57BL/6野生型小鼠分为两组,S组为6只,E组为8只;8只IL-17信号通路缺陷(IL-17-/-)小鼠为IL-17-/-组。三组小鼠通过腹腔注射感染回归热疏螺旋体DAH菌株后,观察小鼠体内菌血症、神经系统发病情况及特异性抗体的发生情况。比较E组和IL-17-/-组小鼠脊髓的病理变化。结果S组小鼠体内有效地复制扩增并引起菌血症,产生螺旋体特异性IgG和IgM,中枢神经系统疾病症状发病率达到100%。E组和IL-17-/-组小鼠体内的菌血症变化水平基本一致,且均能诱导E组和IL-17-/-组小鼠螺旋体特异性IgG和IgM产生。感染9~14 d IL-17-/-组感染回归热疏螺旋体后的中枢神经系统疾病评分低于E组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。IL-17-/-组小鼠脊髓组织中小胶质细胞的数量少于E组小鼠。结论IL-17信号通路在回归热疏螺旋体感染诱导的中枢神经系统疾病中起重要作用。

IL-17信号通路在高原低氧诱导小鼠脾脏炎症反应的作用机制

目的探究高原低氧环境诱导小鼠脾脏组织炎症反应发生的作用机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为平原常氧组和高原低氧组,每组5只。其中,平原常氧组饲养于海拔400 m(氧浓度19.88%)常氧浓度环境,高原低氧组小鼠置于海拔4200 m(氧浓度14.23%)高原环境,构建高原低氧动物模型。第30天取脾脏组织检测脾脏指数,HE染色观察小鼠脾脏组织病理学改变,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测小鼠脾脏组织白细胞介素(IL)-6、IL-12、IL-1β的mRNA和蛋白表达量;使用RNA测序(RNA-sequencing,RNA-seq)技术进行高通量转录组学测序,将差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进行KEGG富集分析,对关键通路中的DEGs进行RT-qPCR验证。结果与平原常氧组相比,高原低氧环境下,小鼠脾脏指数降低(P<0.05),并出现白髓减少,生发中心扩大,边缘模糊,静脉充血等病理学改变;高原低氧组小鼠脾脏组织IL-6、IL-12、IL-1β的mRNA和蛋白表达量均上调(P<0.05)。经转录组测序,KEGG通路富集分析示,4218个DEGs共富集到178个富集通路(P<0.05),DEGs在T细胞受体信号通路、TNF信号通路和IL-17信号通路等多个与免疫、炎症相关通路中显著富集(P<0.05);其中,IL-17信号通路和下游炎症因子高度上调表达(P<0.05);与平原常氧组相比,高原低氧组小鼠脾脏组织IL-17信号通路中关键基因IL-17、IL-17R、MAPKs(mitogen-activated protein kinase genes)等和下游炎症因子MMP9(matrix metallopeptidase 9)、S100A8(S100 calcium binding protein A8 gene)、S100A9(S100 calcium binding protein A9 gene)、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factorα,TNF-α)等基因的mRNA表达量均出现上调或下调差异表达(P<0.05)。经RT-qPCR验证,DEGs的mRNA表达量与RNA-seq结果一致。结论高原低氧环境可通过激活IL-17信号通路,促进下游炎症因子释放,诱导小鼠脾脏组织炎症反应发生。

基于IL-17/NF-κB信号通路探讨敦煌医方大补脾汤联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠炎症免疫的影响

目的:研究敦煌医方大补脾汤对胃癌荷瘤小鼠的抑瘤作用以及基于IL-17/NF-κB信号通路探讨大补脾汤联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠炎症免疫的影响。方法:建立MFC胃癌皮下荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、奥沙利铂组、大补脾汤高、中、低剂量联合奥沙利铂组[21.58、10.79、5.40 g/(kg·d)],每组10只,雌雄分笼饲养,接种8 d后开始给药,连续给药14 d;末次给药后次日眼球取血,处死小鼠,摘取肿瘤组织称重,计算抑瘤率;ELISA检测小鼠血清IL-17和IL-6含量,免疫组化(IHC)、RT-qPCR和Western blot分别检测小鼠肿瘤组织IL-17、IL-6、NF-κB和pNF-κB mRNA和蛋白表达。结果:奥沙利铂组、大补脾汤高、中、低剂量联合奥沙利铂组抑瘤率分别为33.02%、52.92%、46.33%和39.52%,各给药组肿瘤质量均较模型组显著降低(P<0.01),大补脾汤高、中、低剂量联合奥沙利铂组显著高于奥沙利铂组(P<0.01);与模型组相比,各给药组血清IL-17和IL-6含量、肿瘤组织IL-17、IL-6、NF-κB p65和pNF-κB p65 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05);与奥沙利铂组相比,大补脾汤高、中剂量联合奥沙利铂组血清IL-17和IL-6含量、肿瘤组织IL-17、IL-6、NF-κB p65和pNF-κB p65 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论:敦煌医方大补脾汤对MFC胃癌荷瘤小鼠具有一定抑瘤作用,并可通过抑制IL-17/NF-κB信号通路调控炎症免疫,抑制胃癌发生发展。

IL-17和Th17细胞信号通路参与高原低氧环境小鼠肾脏组织炎症发生的作用机制

目的基于转录组学测序技术研究高原低氧条件下IL-17与Th17细胞信号通路诱导小鼠肾脏组织炎症发生机制。方法C57BL/6小鼠分别饲养于海拔4200 m(高原组)和海拔400 m(平原组)的环境下30 d,无菌取小鼠肾脏组织采用转录组测序技术(RNA-Seq)测序,对差异表达基因(DEGs)进行KEGG通路富集分析与GO注释分析;采用HE染色法观察小鼠肾脏组织病理学改变;分析AmiGO数据库获得炎症反应基因;RT-qPCR法验证通路中炎症因子的mRNA表达量。结果转录组学测序结果显示,高原低氧环境共鉴定出3007个DEGs,相比于平原组,高原组中1349个DEGs上调(P<0.05),1658个DEGs下调(P<0.05)。HE染色结果显示,与平原组小鼠相比,高原组小鼠肾间质中炎细胞浸润,肾小管上皮细胞不规则排列,部分肾小管上皮细胞肿胀。KEGG富集分析显示,DEGs主要富集于IL-17信号通路、Th17细胞信号通路、B细胞受体信号通路、T细胞受体信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路、麻疹信号通路等多个炎症相关通路,其中IL-17信号通路和Th17细胞信号通路显著富集。RT-qPCR结果显示,高原组IL-17信号通路和Th17细胞信号通路中TGFβ-R、RoRyt、TRAF6、MAPK9、mTOR、CHUK等关键基因均出现上调或下调差异表达(P<0.05),下游炎症因子S100A8、S100A9和MMP9发生显著上调(P<0.01)。结论高原低氧条件通过促进IL-17信号通路和Th17细胞信号通路下游炎症因子的表达从而诱导小鼠肾脏组织炎症反应发生。

苗药金乌健骨胶囊对胶原诱导关节炎模型大鼠肠道、滑膜炎症及IL-17α/TRAF6/NF-κB信号通路的影响

目的探讨苗药金乌健骨胶囊对胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型大鼠肠道、滑膜炎症及参与NF-κB信号通路基因IL-17受体信号分子ACT1(nuclear factor kappa B activator 1,ACT1)、泛素化TRAF6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)、转化生长因子β激活激酶1(transforming growth factor-β-activated kinase 1,TAK1)、核因子-κB上游激酶(IκB kinaseα,IKKα)、核因子κB/p65、核因子κB/p50表达的影响。方法将70只SPF级6~8周龄雌性Wistar大鼠随机分为7组,分别为空白对照组、模型组、金乌健骨胶囊低剂量组、金乌健骨胶囊中剂量组、金乌健骨胶囊高剂量组、甲氨蝶呤组及益生菌组,每组10只。适应性喂养后除空白对照组外,其余6组构建CIA模型,两次免疫造模成功后分别进行药物金乌健骨胶囊、甲氨蝶呤、益生菌灌胃治疗,治疗4周后静脉取血,处死大鼠,分离大鼠滑膜组织及肠道组织。利用HE染色法检测大鼠滑膜及大肠组织病理情况;ELISA法检测大鼠血清TGF-β1、IL-1α、IL-17α、IL-21、IL-23的含量;Western blot法检测大鼠肠道组织ACT1、TRAF6、TAK1、IKKα、P65、P50蛋白的表达水平;RT-qPCR法检测大鼠肠道ACT1、TRAF6、TAK1、IKKα、P65、P50基因的表达情况。结果滑膜病理结果显示,与模型组相比,金乌健骨胶囊中、高剂量组和甲氨蝶呤组炎性浸润、增生、血管新生组织有明显改善;肠道病理结果显示,与模型组相比,金乌健骨胶囊低、中、高剂量组及甲氨蝶呤组、益生菌组肠道组织细胞可见少量炎性细胞浸润,肠道组织细胞病变情况较模型组有不同程度的改善;ELISA结果显示,与模型组相比,各给药组血清含量显著降低(P<0.05或P<0.01);Western blot结果显示,各给药组大鼠肠道组织ACT1、TRAF6、TAK1、IKKα、P65、P50的蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01);RT-qPCR结果显示,各给药组ACT1、TRAF6、TAK1、IKKα、P65、P50基因的表达显著降低(P<0.05或P<0.01);金乌健骨胶囊高剂量组的作用最佳。结论苗药金乌健骨胶囊能够减轻CIA大鼠肠道、滑膜炎症,同时能够影响肠道IL-17α/TRAF6/NF-κB信号途径相关基因的表达情况。

慢性乙型肝炎患者炎症因子表达水平及IL-23/IL-17信号通路的活性变化

目的探讨慢性乙型肝炎患者炎症因子表达及白介素-23(IL-23)/白介素-17(IL-17)信号通路的活性变化。方法选择2017年3月-2019年3月华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院收治的慢性乙型肝炎患者196例,按照病情不同程度分为轻度组41例、中度组87例、重度组68例,随机选择100名健康体检者作为对照组。采用放射免疫法测定肝纤维化指标透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(P-Ⅲ)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)含量;采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定炎症因子高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)、白介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用qRT-PCR法检测外周血RORγt mRNA表达,ELISA法检测IL-17和IL-23表达。结果各组肝纤维化指标比较差异有统计学意义(P<0.05),轻度组、中度组和重度组HA、LN、P-Ⅲ和Ⅳ-C水平均高于对照组,且中度组和重度组高于轻度组,重度组高于中度组(P<0.05);各组炎症因子HMGB-1、IL-10和TNF-α水平比较差异有统计学意义(P<0.05),轻度组、中度组和重度组均高于对照组,中度组和重度组高于轻度组,重度组高于中度组(P<0.05);各组RORγt mRNA表达、IL-17和IL-23水平比较差异有统计学意义(P<0.05),轻度组、中度组和重度组高于对照组,中度组和重度组高于轻度组,重度组高于中度组(P<0.05)。结论慢性乙型肝炎患者炎症因子HMGB-1、IL-10和TNF-α高表达,且Th17表达、RORγt mRNA表达及IL-17和IL-23表达升高,推测炎症因子和IL-23/IL-17信号通路的活性可能是维持乙型肝炎病毒持续性感染的一个机制。

盐酸氨溴索经纤维支气管镜肺灌洗术治疗重型颅脑外伤合并肺部感染对Toll样受体7/白细胞介素-23/白细胞介素-17信号通路的影响

目的探究盐酸氨溴索经纤维支气管镜肺灌洗术治疗对重型颅脑外伤(SCT)合并肺部感染(PI)患者Toll样受体(TLR)7/白细胞介素-23(IL-23)/IL-17信号通路的影响。方法选取2019年5月至2020年7月于本院诊治的重型颅脑外伤并肺部感染患者74例,按照治疗方案的不同分为研究组(37例)与对照组(37例)。对照组实施常规抗感染及原发病治疗,在此基础上,研究组加用盐酸氨溴索经纤维支气管镜肺灌洗术治疗,2组均连续治疗2周。分别于治疗前后检测并对比2组肺功能指标、炎症反应指标、临床肺部感染评分(CPIS)、脑功能状态指数(CSI)、IL-17、IL-23以及TLR7 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果治疗后,2组用力呼气量占用力肺活量比值(FEV_(1)/FVC)、最大通气量(MMV)、最大呼气中期流量(MMEF)、功能残气量(FRC)均呈升高趋势,且研究组较对照组更高(P<0.01);2组CPIS评分均呈下降趋势,同时研究组较对照组更低(P<0.01);2组CSI评分均呈升高趋势,且研究组较对照组更高(P<0.01);2组IL-17、IL-23均呈下降趋势,且研究组较对照组更低(P<0.01);2组TLR7 mRNA和蛋白均呈升高趋势,同时研究组较对照组更高(P<0.01)。结论盐酸氨溴索经纤维支气管镜肺灌洗术治疗重型颅脑外伤合并肺部感染疗效确切,可明显改善患者肺功能、肺部感染症状及意识障碍,这可能与促进TLR7的表达活化IL-23/IL-17信号通路的活化有关。

针灸对帕金森病小鼠黑质白细胞介素-17受体A/核因子κB信号通路的影响

目的:观察针灸对帕金森病(PD)小鼠中脑黑质部白细胞介素-17受体A/核因子κB(IL-17RA/NF-κB)信号通路相关分子表达的影响,探讨针刺改善PD症状的可能机制。方法:无特定病原体(SPF)级8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、针刺艾灸组和雷沙吉兰组。1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射建立PD动物模型,模型组不治疗,仅作抓取固定;针刺组针刺百会、阳陵泉穴;针刺艾灸组在针刺组基础上艾灸关元穴;雷沙吉兰组给予雷沙吉兰溶液灌胃。观测各组小鼠总体转棒评分(ORP),采用免疫荧光染色技术检测各组小鼠中脑黑质部酪氨酸羟化酶(TH)和α-突触核蛋白表达,采用蛋白质免疫印迹法检测黑质致密部白细胞介素-17(IL-17)受体A及下游分子表达状况。结果:与空白组比较,模型组小鼠ORP评分和TH表达显著降低;与模型组比较,针刺组、针刺艾灸组ORP评分和TH表达量均显著升高(均P<0.05);与空白组比较,模型组小鼠黑质α-突触核蛋白荧光强度显著增高(P<0.05);模型组小鼠黑质p-核因子κB抑制剂α(IκBα)表达和p-IκBα/IκBα比值显著上升(P<0.05)。与模型组比较,针刺组、针刺艾灸组与雷沙吉兰组α-突触核蛋白免疫荧光强度明显降低(P<0.05);针刺艾灸组小鼠黑质IL-17受体A表达显著降低(P<0.05);针刺组、针刺艾灸组与雷沙吉兰组p-IκBα表达和p-IκBα/IκBα比值显著下调。结论:针刺组和针刺艾灸组均可改善PD模型小鼠转棒活动能力,可保护黑质TH阳性神经元,抑制α-突触核蛋白的表达,其机制可能与调节IL-17受体通路,尤其是IκBα的磷酸化有关。

基于IL-17/Notch轴土茯苓总黄酮对银屑病小鼠皮肤瘙痒缓解及炎症反应抑制的作用机制研究

[目的]探讨土茯苓总黄酮对银屑病小鼠皮肤瘙痒及炎症反应的影响,及对白细胞介素(IL)-17/Notch信号轴的调控作用。[方法]将50只小鼠按照随机数字表法随机分为正常组、模型组、土茯苓总黄酮低剂量组(简称低剂量组)、土茯苓总黄酮高剂量组(简称高剂量组)和甲氨蝶呤组,每组10只,除正常组外,其余组小鼠背部脱毛,每日涂抹5%咪喹莫特软膏62.5 mg,1次/日,连续7 d,正常组小鼠背部涂抹等量凡士林软膏,低、高剂量组小鼠每日分别用300和500 mg/kg土茯苓总黄酮灌胃,甲氨蝶呤组小鼠每日1 mg/kg甲氨蝶呤片水溶液灌胃,1次/日,连续7 d。评估小鼠皮肤瘙痒次数,进行皮损严重程度指数(PASI)评分,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清干扰素γ(IFN-γ)、IL-23和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,苏木精-伊红(HE)染色观察皮肤组织病理损伤,聚合酶链反应(PCR)检测水通道蛋白-3(AQP3)和神经酰胺(Cer)mRNA相对表达量,蛋白印迹法检测IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量。[结果]正常组小鼠表皮层菲薄,仅有少量炎性细胞;模型组小鼠表皮增厚,伴有角化过度或角化不全,真皮乳头出现水肿,伴血管扩张,棘层增厚,可见大量炎性细胞浸润;低、高剂量组和甲氨蝶呤组小鼠病理损伤不同程度减轻。与正常组比较,模型组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量升高,AQP3和Cer mRNA相对表达量降低(P<0.05);与模型组比较,低、高剂量组和甲氨蝶呤组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量降低,AQP3和Cer mRNA相对表达量升高(P<0.05);与低剂量组比较,高剂量组和甲氨蝶呤组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量降低,AQP3和Cer mRNA相对表达量升高(P<0.05);与高剂量组比较,甲氨蝶呤组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量降低,AQP3和Cer mRNA相对表达量升高(P<0.05)。[结论]土茯苓总黄酮可改善银屑病小鼠皮肤损伤,减轻皮肤瘙痒,抑制对炎症反应,其可能是通过抑制IL-17/Notch信号轴发挥调控作用。

基于网络药理学探讨右归丸干预强直性脊柱炎作用机制

目的基于网络药理学的研究方法探讨右归丸干预强直性脊柱炎的作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索并筛选出右归丸中药组成的有效化学成分及作用靶点信息,利用GeneCards及OMIM数据库获得强直性脊柱炎的靶点基因,通过VENNY 2.1.0获得右归丸组成中药与强直性脊柱炎的交集基因,借助String在线平台与Cytoscape 3.7.2软件获得PPI网络,在DAVID数据库完成GO及KEGG通路富集分析。结果共获得药物有效成分79个,有效基因靶点500个,疾病靶点基因767个,交集基因98个,PPI网络分析得到关键靶点基因是IL1B、IL6和TNF等。GO功能富集分析得到GOBP条目535条、GOMF条目88条和GOCC条目53条。KEGG富集分析得到121条通路,主要信号通路为IL-17、HIF-1和TNF等。结论该研究基于网络药理学理论,系统地分析了右归丸的中药组成可以通过多成分、多靶点、多通路等干预强直性脊柱炎的作用机制,进而起到调节免疫反应、调控炎症因子、保护软骨、延缓骨破坏等治疗作用。

IL-17Rc基因敲除对小鼠椎体松质骨结构的影响

目的利用转基因小鼠探讨IL-17Rc基因敲除是否导致椎体松质骨结构的变化。方法利用免疫组化技术micro-CT对比分析3月龄健康雌性野生型C57BL/6小鼠(对照组)与同龄同性别IL-17Rc基因敲除型C57BL/6小鼠(实验组)椎体松质骨的骨状态特征。结果野生型C57BL/6小鼠较mut-IL-17Rc基因型小鼠T13-L6相应椎体的松质骨内单位体积内骨密度更大(0.52±0.12vs.0.47±0.05,P=0.028)(g/cm^(3))、骨小梁连接数更多(8.97±1.46vs.5.59±3.15,P=0.017)(1/mm)、骨小梁厚度更厚(0.16±0.08vs.0.10±0.04,P=0.029)(μm)、骨小梁数量更多(5.01±0.33vs.3.16±0.37,P=0.038)(1/mm);此外,micro-CT的检测结果还提示:IL-17Rc基因敲除型C57BL/6小鼠骨质疏松主要表现在T13(P=0.039)、L1(P=0.035)、L3(P=0.018)、L5(P=0.021)、L6(P=0.036)椎体,L2(P=0.317)、L4(P=0.242)椎体的平均骨密度在两组小鼠间无明显统计学差异。结论IL-17/IL-17Rs信号轴广泛分布于动物的骨骼系统,且是调节骨代谢的重要信号通路之一;敲除IL-17Rc基因可导致模型动物骨质疏松的发生。

归芪白术方含药血清对胃癌MKN-45细胞增殖和IL-17、NF-κB表达的影响

目的:探讨归芪白术方含药血清通过IL-17/NF-κB信号通路对胃癌MKN-45细胞增殖的影响。方法:制备生药质量浓度6.12 g/ml的归芪白术方药液,将SD大鼠随机分为空白组(蒸馏水),阳性药组(奥沙利铂),归芪白术方高、中、低剂量组(6.12 g/ml、3.06 g/ml、1.53 g/ml),灌胃后制备归芪白术方含药血清,用10%含药血清干预MKN-45细胞,通过细胞增殖及细胞毒性实验(CCK-8)检测归芪白术方含药血清对MKN-45细胞增殖的影响;通过Western blot检测IL-17、NF-κBp65、p-NF-κBp65、IKK-β和IL-6蛋白的表达情况;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测IL-17、NF-κBp65、IKK-β和IL-6 mRNA表达的情况。结果:CCK-8实验显示,与空白组比较,归芪白术方含药血清抑制MKN-45细胞增殖,且呈时间与剂量依赖性(P<0.05)。Western blot结果显示,与空白组比较,阳性药组和归芪白术方高、中、低剂量含药血清组IL-17、NF-κBp65、p-NF-κBp65、IKK-β和IL-6蛋白表达下降(P<0.05);Real-time PCR实验表明,与空白组比较,阳性药组和归芪白术方高、中、低剂量含药血清组IL-17、NF-κBp65、IKK-β和IL-6 mRNA表达减少(P<0.05)。结论:归芪白术方含药血清可以抑制胃癌MKN-45细胞的增殖,可能与IL-17/NF-κB信号通路有关。

小鼠舌白斑的转录组学特征和信号通路改变及白介素17A单抗治疗的实验研究

目的:探索口腔白斑形成及进展过程中的转录组学特征和信号通路改变以及白介素17A(interleukin-17A,IL-17A)单抗对小鼠舌白斑的治疗作用。方法:分析舌白斑患者同时期正常黏膜组织(NM)、白斑伴上皮异常增生组织(OL)和小鼠正常舌黏膜组织(mNM)、4NQO诱导的小鼠舌白斑伴异常增生组织(mOL)的转录组学特征;4NQO诱导12周小鼠舌白斑形成后将小鼠分为实验组(腹腔注射IL-17A单克隆抗体)和对照组(腹腔注射IgG1同型对照抗体)两组,其中单抗的剂量为10 mg/kg/w。注射4周后取材并通过苏木精-伊红染色(HE染色)和Ki67免疫组织化学染色(IHC)的方法对小鼠舌进行组织病理学评价;体外IL-17A刺激人口腔白斑细胞系(DOK、Leuk1),并用流式细胞术分析其细胞周期。结果:综合分析人和小鼠的转录组测序结果,显示IL-17信号通路在白斑组织中显著上调。小鼠舌白斑用药4周后,实验组小鼠舌80%为轻到中度异常增生,20%为重度异常增生,而对照组中40%为轻到中度异常增生,40%为重度异常增生,20%为浸润癌。Ki67结果显示对照组小鼠舌上皮细胞中处于增殖时期的细胞比例显著多于对照组(P<0.05)。流式细胞术显示,相较对照组,IL-17A显著导致白斑细胞更多集中在S-G2-M期(P<0.05)。结论:人及小鼠舌白斑形成及进展过程中IL-17信号通路显著上调;IL-17A单抗对4NQO诱导的小鼠舌白斑有潜在的治疗作用;IL-17A会促进人白斑细胞的增殖。

基于网络药理学研究兖州卷柏对酒精性肝病小鼠的保护作用

目的利用网络药理学和动物实验研究兖州卷柏治疗酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)的分子机制。方法2022年2-10月通过查阅文献和中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)预测兖州卷柏有效成分及作用靶点,并通过靶点富集分析和分子对接预测兖州卷柏治疗ALD的作用机制。构建急性ALD小鼠模型,验证网络药理学预测结果。结果网络靶点分析结果显示,从兖州卷柏中共筛选出治疗ALD的有效成分20个,其中黄酮类化合物是治疗ALD的关键化合物。从兖州卷柏治疗ALD的65个靶点中筛选出6个核心靶点,核心靶点中除血管内皮生长因子A(VEGFA)外,均富集在白细胞介素-17(IL-17)信号通路。分子对接结果显示,黄酮类关键化合物与核心靶点均具有较好的结合活性。动物实验结果显示,模型组小鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)活性[(240.16±15.77)U/L,(168.01±8.26)U/L]显著高于正常组[(112.43±6.88)U/L,(85.02±5.77)U/L],差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,低、中、高浓度兖州卷柏总黄酮AST[(201.39±9.63)U/L,(165.86±12.00)U/L,(151.72±9.07)U/L]和ALT[(147.51±6.61)U/L,(133.09±5.88)U/L,(111.52±8.00)U/L]活性均显著下降(P<0.05)。此外,兖州卷柏总黄酮能改善酒精引起的肝组织损伤,抑制IL-17信号通路关键基因mRNA表达。结论黄酮类化合物是兖州卷柏治疗ALD的主要成分,可通过多靶点、多途径实现治疗ALD的作用,其治疗机制可能与抑制IL-17信号通路有关。

基于网络药理学预测石榴皮抗甲型流感机制及初步药效学验证

目的:基于网络药理学预测石榴皮抗甲型流感的潜在有效靶点及作用机制,并通过动物实验进行验证。方法:通过TCMSP技术平台检索石榴皮的有效成分,筛选其作用的靶标。甲型流感的靶标通过TTD、DRUGBANK等数据库筛选。利用Cytoscape绘制石榴皮抗甲型流感网络图,通过STRING数据库构建蛋白互作网络,并对关键靶标的生物功能进行注释与通路分析。甲型流感病毒感染小鼠,使用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质印迹法(Western blot)检测白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)通路中关键蛋白、炎症因子的表达,观测小鼠体质量、肺指数变化。结果:石榴皮中有7个潜在有效成分抗流感病毒、96个有效靶点,其中RELA、MAPK1、JUN、HIF1A、ESR1、NFKBIA、TP53可能为核心靶点,其作用机制可能与IL-17信号通路、化学致癌-受体激活、磷脂酰肌醇3-激酶等通路有关。初步的动物实验显示,石榴皮提取物参与调控IL-17通路,抑制炎症因子白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、TRAF6(TNF receptor associated factor 6)及核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65蛋白表达(P<0.05)。结论:通过预测得出石榴皮中所含的6个成分与不同靶点、通路交互作用,抑制多个炎症因子相关蛋白的表达,进而防治甲型流感。

人脐带间充质干细胞连续静脉注射对大鼠的安全性及肝脏的影响

目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)多次注射对大鼠的安全性及肝脏的影响,为hUC-MSCs临床应用的安全性提供支持。方法 取SPF级健康SD大鼠50只,随机分成阴性对照组(生理盐水)、溶媒对照组(白蛋白)、hUC-MSCs高剂量(1.0×10^(7)cells/kg)、中剂量(5.0×10^(6)cells/kg)、低剂量组(2.5×10^(6) cells/kg),每组10只,尾静脉注射给药4次,1次/周。在末次给药后24 h,采集大鼠血样,检测血生化指标(TBIL、AST、ALT、GGT)、血清细胞因子(IFN-γ、IL-17、TNF-α)以及T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+));观察大鼠肝脏重量、脏体比指数及组织病理学变化;提取大鼠肝脏组织总RNA,qRT-PCR分析Act1、IL-17A、Hsp90aa1基因水平的表达情况。结果 hUC-MSCs高、中、低剂量组多次静脉注射后,大鼠血生化、血清细胞因子IFN-γ、IL-17、TNF-α以及T淋巴细胞亚群、肝脏重量、脏体指数及组织病理学变化与阴性对照组、溶媒对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。hUC-MSCs可明显降低肝组织中IL-17A mRNA表达水平,对Act1、Hsp90aa1 mRNA表达未见明显影响(P>0.05)。结论 hUC-MSCs在1.0×10^(7)、5.0×10^(6)、2.5×10^(6) cells/kg剂量下多次静脉注射大鼠安全性好,可下调IL-17A水平。

桐油联合阿维A酸对银屑病的疗效及其对IL-23/Th17信号通路的影响

目的观察桐油联合阿维A酸对轻、中度寻常型银屑病的疗效及其对IL-23/Th17信号通路的影响。方法将196例寻常型银屑病患者随机分为桐油组及对照组,每组98例,对照组患者均给予阿维A酸联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗,桐油组患者在对照组治疗基础上给予桐油外敷。以银屑病皮损面积和严重程度指数(psoriasis area and severity index,PASI)评价桐油组及对照组疗效。酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测治疗前后2组皮损组织中IL-17、IL-22、TNF-α和IL-23水平变化。免疫组织化学法分析治疗前后2组皮损组织中Th17细胞含量变化。结果桐油组的总有效率(94.90%)显著高于对照组(76.53%)(P<0.05)。与治疗前相比,治疗后2组PASI评分均显著降低(P<0.01),且治疗后桐油组显著低于对照组(P<0.05)。与治疗前相比,治疗后2组皮损中IL-23、IL-17、IL-22和TNF-α水平均显著降低(P<0.05),且治疗后桐油组显著低于对照组(P<0.05)。治疗后2组患者皮损组织中Th17细胞百分比显著低于治疗前,且桐油组显著低于对照组(P<0.05)。桐油组不良反应发生率(14.29%)略高低于对照组(10.20%),但差异不具有统计学意义。结论桐油外敷联合阿维A酸治疗轻、中度寻常型银屑病有较好的疗效,其机制可能与抑制患者皮损组织中IL-23/Th17信号通路的活性有关。