IL-17D调控CD93^(+)CTL在肺脏肿瘤微环境中的杀伤功能及桔梗的促进作用

目的:探讨IL-17D调控CD93^(+)CTL在肺脏肿瘤微环境(TME)中的杀伤功能及桔梗(PG)的促进作用。方法:采用PG或IL-17D处理小鼠肺脏B16黑色素瘤模型和对照小鼠,观察肺脏肿瘤克隆形成;应用单细胞测序、免疫荧光染色、流式细胞术等方法检测肿瘤小鼠肺脏IL-17D表达变化;采用单细胞测序、流式细胞术等方法分别检测各组小鼠肺脏CD93^(+)CTL含量、细胞表型和功能因子改变(包括CD107a、穿孔素、颗粒酶B、趋化因子CCL2、CXCL9及趋化因子受体CCR2、CXCR3等);利用EL4细胞系,采用Western blot、RT-PCR检测桔梗皂苷D对IL-17D及其转录调控因子NRF2表达的作用。结果:小鼠肺脏CD93^(+)CTL较CD93−CTL高表达穿孔素、CD107a等细胞毒性效应因子和趋化因子受体CXCR3、CCR2等,而颗粒酶B分泌能力无显著差异;小鼠肺脏肿瘤模型中,肺脏IL-17D表达及其CD93^(+)CTL含量明显下降(P<0.001);肿瘤小鼠经IL-17D回补实验,或经PG处理10 d后,肺脏IL-17D和CD93^(+)CTL比例和数量明显增多(P<0.05),肿瘤克隆明显减少。同时,肿瘤局部CD93^(+)CTL募集和功能相关细胞因子CCL2、CXCL9、IL-17D等表达明显上调。PG对IL-17D的上调作用在EL4细胞系体外实验中也得到了验证,桔梗皂苷D可显著上调EL4细胞IL-17D及其转录调控因子NRF2表达。结论:中药PG及其提取物可上调肺脏IL-17D表达,增强肺脏CD93^(+)CTL浸润和杀伤功能,拮抗肿瘤在肺脏的恶性进展,是PG改善肺脏TME的重要药理机制。

重组人IL-17D对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及VEGF-C表达的影响

目的:研究重组人IL-17D(r-hIL-17D)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及VEGF-C表达的影响。方法:复苏传代培养人卵巢癌SKOV3细胞,用含不同浓度r-hIL-17D(0、10、50ng/mL和100ng/mL)的培养基培养。MTS法检测细胞增殖情况,RT-qPCR法检测细胞中VEGF-C mRNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测上清VEGF-C浓度。结果:10、50、100ng/mL r-hIL-17促进SKOV3细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。作用48h后,10、50、100ng/mL组SKOV3细胞的VEGF-C mRNA表达高于0ng/mL组,差异有统计学意义(P<0.05);SKOV3细胞上清中VEGF-C浓度高于0ng/mL组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:R-hIL-17D可促进卵巢癌SKOV3细胞的增殖,增加VEGF-C的表达。

IL-17D调控肺脏NK细胞募集及黄芪的促进作用

目的:探讨IL-17D调控肺脏NK细胞的募集机制及中药黄芪的促进作用。方法:采用尾静脉注射B16黑色素瘤细胞建立小鼠肺肿瘤转移模型,分别经IL-17D或黄芪处理后,应用流式细胞术和RT-PCR法检测各组小鼠肺脏IL-17D表达状态及其NK细胞含量的变化。结果:小鼠肺转移瘤模型中IL-17D表达水平及其肺脏NK细胞含量急剧下降,经IL-17D处理后可明显上调肺脏NK细胞含量、降低肺脏肿瘤克隆形成。同时,CXCL9、IL-15等与NK募集和功能相关的细胞因子表达明显上调。中药黄芪可促进肺脏IL-17D表达水平,同时上调肺脏NK细胞含量,抑制肺脏肿瘤克隆的形成。结论:IL-17D可调控NK细胞的肺脏募集;中药黄芪可通过上调IL-17D的表达,从而增强NK的肺脏募集能力,促进肺脏抗肿瘤免疫效应。

IL-17D、CD163在卵巢上皮性癌中的表达及意义

目的:通过检测IL-17D、CD163在卵巢上皮性癌组织中的表达,探讨IL-17D、M2肿瘤相关巨噬细胞(M2-TAM)在卵巢上皮性癌发生、发展过程中的意义。方法:应用免疫组化(S-P)方法检测IL-17D、CD163在正常卵巢组、卵巢上皮性良性肿瘤组和卵巢上皮性癌组中的表达情况。结果:卵巢上皮性癌组IL-17D、CD163的阳性表达率(74.0%,80.0%)高于卵巢上皮性良性肿瘤组(40.0%,30.0%)和正常卵巢组织组(0,10.0%)(P<0.01);IL-17D、CD163在晚期(Ⅲ、Ⅳ期)卵巢上皮性癌中的阳性表达率(83.3%,88.9%)高于早期(Ⅰ、Ⅱ期)卵巢上皮性癌(50.0%,57.1%)(P<0.05);IL-17D、CD163在低分化卵巢上皮性癌中的阳性表达率(90.9%,95.5%)高于中-高分化(60.7%,67.9%)卵巢上皮性癌(P<0.05);IL-17D与CD163在卵巢上皮性癌中的阳性表达具有正相关性(r=0.388,P<0.01)。结论:IL-17D、M2-TAM在卵巢上皮性癌发生、发展过程中可能有一定作用,且两者可能具有协同促进作用。

乳腺癌组织来源的γδ1 T细胞通过产生IL-17D诱导初始CD4+T细胞免疫衰老

目的探讨乳腺癌组织分离的γδ1 T细胞诱导免疫衰老发挥免疫抑制作用及其逆转的机制。方法乳腺癌组织分离出的γδ1 T细胞与健康人外周血分离的初始CD4^(+)T细胞共培养后,采用CCK-8法检测初始CD4^(+)T细胞的增殖能力,衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测初始CD4^(+)T细胞的衰老;诱导获得的衰老CD4^(+)T细胞与健康人外周血来源初始CD4^(+)T细胞共培养后,通过CCK-8法检测处理后CD4^(+)T细胞的增殖,以流式细胞仪检测处理后CD4^(+)T细胞的凋亡,SA-β-Gal染色检测处理后CD4^(+)T细胞的衰老,Western blot法检测处理后CD4^(+)T细胞周期相关蛋白P53、P21、P16的表达;γδ1 T细胞与初始CD4^(+)T细胞共培养后,利用细胞因子芯片法分析上清中抑制性细胞因子白细胞介素17D(IL-17D)、白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子α(TGF-α)等的表达差异;IL-17D单克隆抗体处理乳腺癌γδ1 T细胞与初始CD4^(+)T细胞共培养体系后,通过CCK-8法检测处理后CD4^(+)T细胞增殖能力的变化;通过ELISA检测Toll样受体8(TLR8)的配体单链RNA40(ssRNA40)及TLR8短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体对γδ1 T细胞分泌细胞因子IL-17D浓度的影响,通过SA-β-Gal染色、Western blot法分析验证ssRNA40对γδ1 T细胞诱导免疫衰老作用的影响。结果乳腺癌组织来源的γδ1 T细胞诱导初始CD4^(+)T细胞发生免疫衰老,且衰老CD4^(+)T细胞进一步发挥免疫抑制作用;细胞因子芯片检测结果表明γδ1 T细胞的分泌上清中的抑制性因子中IL-17D含量最高;IL-17D单克隆抗体可以降低γδ1 T细胞对初始CD4^(+)T细胞的增殖抑制作用;TLR8配体ssRNA40可以抑制γδ1 T细胞分泌IL-17D,进而可以部分逆转γδ1 T细胞对初始CD4^(+)T细胞的增殖抑制及免疫衰老诱导。结论乳腺癌组织来源的γδ1 T细胞通过产生IL-17D诱导初始CD4^(+)T细胞免疫衰老发挥免疫抑制作用;ssRNA40通过降低γδ1 T细胞分泌IL-17D,可以部分逆转γδ1 T细胞对初始CD4^(+)T细胞免疫衰老的诱导作用。

白细胞介素17D的研究进展

IL-17D是细胞因子IL-17家族成员,目前发现IL-17D在众多脊椎动物中有表达,IL-17D可诱导免疫细胞募集,调节一些细胞因子分泌,由于IL-17D优先表达在骨骼肌、大脑、脂肪组织、心脏、肺和胰腺中,在免疫细胞中仅在静息CD4+T细胞和CD19+B细胞中表达,因此除了在局部免疫反应中发挥作用外,近年来发现IL-17D在病毒感染、肿瘤等疾病的发展过程中起重要作用,因此本文对IL-17D的结构、表达、分布、功能、在疾病中的角色以及与其他因子之间的关系等进行综述。

非小细胞肺癌肿瘤白细胞介素的表达模式对免疫治疗疗效和预后的作用

【目的】为了明确对免疫检查点阻断(ICB)治疗应答反应较差的非小细胞肺癌(NSCLC)患者与肿瘤组织白细胞介素(ILs)表达水平之间的潜在关联,探讨其在NSCLC患者肿瘤中的表达差异及其对患者ICB疗效和预后的影响。【方法】从既往研究数据中回顾性收集确诊为NSCLC且经过ICB治疗的61例患者,取得其ICB治疗前的肿瘤组织转录组测序及生存相关的数据,通过生物信息学方法,筛选出显著影响患者ICB治疗疗效与预后的ILs,以无进展生存期(PFS)评价疗效和总生存期(OS)评价患者的预后,使用Kaplan-Meier生存曲线和ROC曲线分析ILs对NSCLC患者ICB疗效和预后的预测作用及效能。【结果】通过单因素Cox回归分析,筛选出9个与NSCLC患者OS相关的ILs(P<0.1),经过多因素Cox回归分析进一步筛选得到与NSCLC患者不良预后显著相关的ILs,结果提示IL-11、IL-17D和IL-36A高表达与NSCLC患者ICB治疗的不良预后相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线结果表明IL-17D高表达与NSCLC患者的PFS和OS显著负相关,高表达患者的中位PFS为3.1个月对比低表达患者6.5个月[95%CI为(1.178,3.655),P=0.009],中位OS高表达组对比低表达组为9.8个月对比21.8个月[95%CI(1.116,4.392),P=0.018],ROC曲线表明其预测性能较好[AUCPFS=0.702,95%CI(0.562,0.842),P=0.027;AUCOS=0.684,95%CI(0.550,0.818),P=0.014]。虽然IL-11和IL-36A不能很好地预测NSCLC患者的PFS和OS(P>0.05),但当两者与IL-17D的表达模式联合时,发现上述3种ILs均为高表达的NSCLC患者,中位PFS与OS分别缩短至2.2个月(P=0.003)和3.0个月(P<0.001),ROC曲线表明其预测效能得到提升[AUCPFS=0.748,95%CI(0.615,0.880),P=0.007;AUCOS=0.703,95%CI(0.573,0.833),P=0.007]。【结论】IL-11、IL-17D和IL-36A高表达提示NSCLC患者疾病进展的风险较高,与患者不良的PFS和OS相关,可能为NSCLC的ICB辅助治疗提供新的策略。