人IL-18结合蛋白A在CHO细胞中表达的研究

目的 克隆人IL 18结合蛋白A (hIL 18BPa)的cDNA ,构建真核表达载体及其在CHO细胞中的表达。方法采用RT PCR ,自人白血病血细胞株Jurkat中获得hIL 18BPa的cDNA。将其克隆至T vector中 ,经测序确证后 ,将该基因定向插入真核表达载体pcDNA3 1中。以脂质体介导法 ,将其转染CHO细胞 ,用G4 18筛选抗性克隆 ,ELISA法测定其生物学活性。结果 获得的IL 18BPa的cDNA序列与GeneBank登录的cDNA序列一致。将hIL 18BPa插入载体pcDNA3.1后 ,成功地构建稳定表达的载体。转染CHO细胞后 ,获得可稳定表达hIL 18BPa的基因工程细胞株。经纯化后 ,证明具有良好的生物学活性。结论 成功地克隆hIL 18BPa基因 ,并实现了在CHO细胞中的稳定表达 。

人IL-18结合蛋白AcDNA的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的 克隆人IL-18结合蛋白A（hIL-18 BPa）的 cDNA,观察其在COS-7中的表达。方法 采用RT-PCR自人白血病细胞株jurkat中获得hIL-18BPa的cDNA,将其克隆至T-vector中,经测序确证后,将该基因定向插入真核表达载体pcDNA3.1（+）中。脂质体介导法将其转染COS-7细胞,72h后收集上清纯化,用BCA法测定hIL-18 BPa的含量,用ELISA法测定其活性。结果获得的IL-18BPa的cDNA序列与gene bank登录的cDNA序列一致。上清液中hIL-18 BPa含量为1.4mg/L,并具有良好的生物学活性。结论 成功克隆hIL-18 BPa基因,并实现了在COS-7细胞中的瞬时表达,为研究其活性奠定了基础。

乙型肝炎肝硬化患者血清IL-18、IL-18结合蛋白a亚群水平的检测及临床意义

目的探讨乙型肝炎肝硬化患者血清白细胞介素18(IL-18)和白细胞介素18结合蛋白(IL-18BP)的水平变化及其与病情的关系。方法用ELISA法检测75例乙型肝炎肝硬化患者(Child-Pugh A级、Child-Pugh B级、Child-Pugh C级各25例)和25例正常对照血清IL-18、IL-18BP a亚群(IL-18BPa)水平。结果乙型肝炎肝硬化患者血清IL-18、IL-18BPa水平均明显高于正常对照(P<0.01),并且Child-Pugh A、B、C三级IL-18、IL-18BPa的水平依次递增,各级间差异有统计学意义(P<0.01或0.05)。结论检测血清IL-18、IL-18BP水平有助于判断乙型肝炎肝硬化病情的严重程度,IL-18BP可能不足以中和IL-18。

ITP患者脾细胞分泌IL-18及IL-18结合蛋白的研究

本研究旨在探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)脾脏单个核细胞培养后IL-18,IL-18结合蛋白(b ind ingprotein,BP),IFN-γ,IL-4等细胞因子的表达及其临床意义。常规无菌制备脾单个核细胞,置含PHA(phytohem agg lutinin)10μg/m l,10%胎牛血清的RPM I1640完全培养基中,于37℃、5%CO2条件下培养;分析ITP患者及正常对照者脾单个核细胞分泌细胞因子的差异。结果表明:脾单个核细胞培养48小时后,ITP患者IL-18和IFN-γ的含量较正常对照者明显升高;IL-18BP含量两组间差异无统计学意义(p=0.646);IL-4低于检测限。结论:IL-18、IL-18BP等细胞因子表达失衡在ITP的免疫紊乱和发生发展中起着一定的作用。

原发性肝癌患者血清IL-18结合蛋白水平检测及意义

目的探讨原发性肝癌患者血清IL-18结合蛋白水平检测的意义。方法采用ELISA法检测原发性肝癌46例、乙型肝炎肝硬化41例及正常人15例血清IL-18结合蛋白水平,比较各组血清IL-18结合蛋白水平的差异。结果原发性肝癌患者血清IL-18结合蛋白水平为(12.36±9.96)ng/ml,明显高于乙型肝炎肝硬化组(7.69±3.22)ng/ml,(P=0.01);肝癌Ⅲ期患者血清IL-18结合蛋白为(18.53±11.77)ng/ml,明显高于肝癌Ⅱ期(7.62±3.95)ng/ml,(P<0.01);原发性肝癌伴腹水者血清IL-18结合蛋白为(15.35±11.35)ng/ml,明显高于不伴腹水者(7.27±1.89)ng/ml,(P<0.01)。结论检测外周血IL-18结合蛋白水平对判断原发性肝癌患者的病情有一定的帮助。

HBsAg基因启动子Ⅰ DNA结合蛋白1下调IL-18基因启动子

目的:研究HBsAg基因启动子I DNA结合蛋白1(SBP1)与白介素-18(IL-18)基因表达的关系,研究SBP1在HBV致病的分子生物学机制中的作用. 方法:构建质粒pcDNA3.1(-)-SBP1,pCAT3-IL-18,转染HepG2细胞进行表达,应用酶联免疫黏附法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性. 结果:构建的表达载体pcDNA3.1(-)-SBP1经过序列分析和酶切鉴定正确.真核表达载体pcDNA3.1(-)-SBP1和pCAT3-IL-18P共转染的HepG2细胞的pCAT表达活性是pCAT3空载体的0.37倍,是转染pCAT3-IL-18P的0.17 倍,抑制率达到86.32%. 结论:SBP1可以下调IL-18启动子的活性,抑制IL-18基因的表达.

IL-18结合蛋白在慢性肝炎及肝癌中的表达意义

目的:检测原发性肝癌(肝癌)、慢性乙型肝炎(慢乙肝)、肝炎后肝硬化(肝硬化)和正常人血清白介素-18结合蛋白(IL-18BP)的浓度,并检测同期肝癌、癌周、慢乙肝、肝硬化和正常肝脏组织中IL-18BP的表达;探讨IL-18BP在慢乙肝、肝硬化及肝癌发病过程中的作用.方法:ELISA法检测肝癌25例、肝硬化20例、慢乙肝20例、正常人15例血清中IL-18BP的浓度.利用SP免疫组化染色法检测同期肝癌患者癌组织、癌周组织各41例;肝硬化组织11例;慢乙肝组织9例;正常5例(肝囊肿患者的正常肝组织)肝脏组织IL-18BP表达.结果:正常组、慢乙肝组、肝硬化组和肝癌组血清中IL-18BP的浓度分别为(3.3±0.5),(6.2±1.5),(14.9±1.4),(20.4±1.9)μg/L,4组间两两比较均有显著的统计学差异(P<0.01).肝癌的癌周组织、癌组织、肝硬化组织和慢乙肝组织阳性表达率分别为97.6%,34.2%,36.4%和22.2%;正常肝组织表达量极少;癌周组织评分值分别与癌组织、慢性肝炎组织、肝硬化组织比较有统计学差异(P<0.01).结论:随着炎症的进展,血清IL-18BP含量逐渐升高,但肝癌患者血清中IL-18BP含量最高.组织学检测结果提示肝癌癌周组织及癌组织中残存的肝细胞大量表达IL-18BP,肝癌组织有一定量的表达.IL-18BP高表达除受炎症因素的调控外,可能还参与调控肿瘤的生成和发展,血清或/和肝组织中IL-18BP水平检测,可能有助于疾病的早期诊断及预后评估.

阿霉素小鼠肾病模型的建立及IL-18结合蛋白干预的实验研究

目的建立阿霉素小鼠肾病模型并探讨IL-18结合蛋白(IL-18BP)通过结合内源性IL-18对该模型的干预机制。方法昆明种小鼠30只,随机分为正常对照组、阿霉素肾病造模组(ADR-MCN组)、IL-18结合蛋白治疗组(IL-18BP治疗组)3组,用阿霉素7.5 mg/kg尾静脉注射进行造模,治疗组于第5、7、12、21天腹腔注射0.5 mg/kg剂量mIL-18BP(鼠源性IL-18结合蛋白),隔周检测尿蛋白一次,观察并记录其生命体征;42 d后心脏采血处死小鼠,分离血清ELISA法检测相关细胞因子和生化指标。结果①ADR-MCN组24 h尿蛋白定量(UPE)明显升高,与正常对照组及IL-18BP治疗组相比均有显著性差异(P<0.01)。②ADR-MCN组血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)显著高于正常对照组、IL-18BP治疗组(P<0.01),总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)显著低于后两者(P<0.01),尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量各组间无显著性差异(P>0.05);③IL-18BP治疗组血清IL-18水平比ADR-MCN组明显降低(P<0.01),且与24hUPE呈显著正相关(r=0.708,P<0.01)。结论①昆明鼠微小病变性肾病模型建立。②IL-18BP可通过特异性结合内源性IL-18抑制其下游致炎因子的释放,对阿霉素肾病模型发挥干预作用,从而调节免疫平衡,改善肾脏功能。

IL-18及IL-18结合蛋白在人正常月经周期子宫内膜的表达

目的探讨白细胞介素(IL)18及IL18结合蛋白(IL18BP)在人正常月经周期子宫内膜上的表达。方法取因子宫肌瘤或子宫脱垂行全子宫切除术的患者子宫内膜,按月经周期和子宫内膜形态学检查结果分为增生期和分泌期2组,每组10例。免疫组织化学法检测子宫内膜的IL-18及IL-18BP表达;实时定量聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测子宫内膜IL-18及IL-18BP mRNA的表达。结果 IL-18、IL-18BP在人增生期和分泌期子宫内膜中均有表达,且随着月经周期其表达呈现时空性变化。IL18在增生期表达于腔上皮、腺上皮细胞膜及基质细胞,与增生期相比,分泌期基质细胞IL18的阳性表达显著降低(MOD值0.33±0.07 vs.0.52±0.12,P<0.05),而IL18BP的表达则显著增加(MOD值0.33±0.20 vs.0.10±0.07,P<0.05)。qRT-PCR结果显示,在增生期和分泌期子宫内膜标本均有IL18和IL18BP mRNA表达,与增生期相比,分泌期IL18表达显著下降(P<0.05),IL18BP表达显著增强(P<0.05),IL18BP/IL18比值显著增高(P<0.05)。结论 IL18和IL18BP在整个月经周期人子宫内膜上均有表达,且其表达呈现时空性的变化,可能与月经周期过程中子宫内膜的崩解修复有关。

2型糖尿病患者24 h尿钠排泄及IL-18水平与尿白蛋白的相关性研究

目的以24 h尿钠排泄水平(24 h UNa)作为钠摄入量评估指标,评估不同钠盐的摄入水平与血清炎症因子对2型糖尿病(T2DM)患者尿白蛋白(UA)发生风险的影响。方法纳入T2DM患者130例,依据尿白蛋白/肌酐比值(UACR)水平分为UA阳性组60例和UA阴性组70例。收集患者的临床资料,检测炎性因子及24 h尿液相关指标。采用Spearman相关分析T2DM患者临床指标与UACR的相关性;二元Logistic回归分析T2DM患者临床指标对UA的影响;二分类回归法分析24 h UNa和IL-18关联对UA的影响。结果24 h UNa水平(OR=1.019,95%CI 1.003~1.035,P=0.017)与IL-18(OR=1.204,95%CI 1.060~1.368,P=0.004)是T2DM患者UA阳性的独立危险因素。联合分析提示,与低钠低IL-18组比较,高钠高IL-18组UA阳性风险显著增加(OR=10.774,95%CI 2.105~55.155,P=0.004)。结论24 h UNa、IL-18水平升高是T2DM患者UA发生的危险因素。

人IL-18结合蛋白cDNA的克隆及其逆转录病毒载体的构建

目的 克隆人白细胞介素 - 18结合蛋白 (hIL - 18BP)的cDNA及构建hIL - 18BP逆转录病毒载体 ,以研究IL - 18BP与IL - 18相互作用的机制及自身免疫性疾病的基因治疗。方法 从中国汉族人胎盘组织中提取总RNA ,用RT -PCR方法扩增hIL - 18BPcDNA ,与载体pcDNA3连接 ,转化大肠杆菌DH5α。得到的重组质粒经鉴定正确后 ,再作为模板进行PCR。PCR产物插入逆转录病毒载体pLNCX中。结果 RT -PCR扩增出全长 5 85bp的hIL - 18BPcDNA ,2次酶切鉴定证明hIL - 18BP已分别与pcDNA3、pLNCX重组。 2次测序结果均与国外文献报道的hIL - 18BP的序列一致。结论 成功地克隆了中国人IL - 18BPcDNA ,并构建了重组hIL -

外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/白细胞介素-1β、白细胞介素-18通路与重症肺炎支原体肺炎患儿预后关系及应用价值

目的:探讨外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)通路与儿童重症肺炎支原体肺炎(SMPP)预后的关系及应用价值。方法:前瞻性选取SMPP患儿113例,根据30 d预后分为预后良好组(81例)与预后不良组(32例),比较两组一般资料及外周血NLRP3、IL-1β、IL-18水平。Pearson法分析外周血NLRP3、IL-1β、IL-18与急性生理与慢性健康评价系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分的关系;Logistic回归分析SMMP患儿预后不良的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评价外周血NLRP3、IL-1β、IL-18对SMMP患儿预后的预测价值。结果:预后不良组患儿发病至入院时间>3 d比例、胸腔积液比例、APACHEⅡ评分以及外周血NLRP3、IL-1β、IL-18水平高于预后良好组(均P<0.05)。外周血NLRP3、IL-1β、IL-18水平与APACHEⅡ评分呈正相关(均P<0.05)。外周血NLRP3、IL-1β、IL-18预测SMPP患儿预后的最佳截断值分别为738.62、68.44、269.27 pg/ml,此时三者的曲线下面积(AUC)分别为0.815、0.806、0.817,敏感度分别为87.50%、84.37%、71.87%,特异度分别为64.20%、71.60%、77.78%。在校正其他因素前后,外周血NLRP3、IL-1β、IL-18高表达是SMPP患儿预后不良的独立危险因素(均P<0.05)。外周血NLRP3、IL-1β、IL-18联合预测SMPP患儿预后不良的AUC为0.923,敏感度为84.37%,特异度为90.12%,三项联合预测价值较单项指标更高(均P<0.05)。结论:外周血NLRP3/IL-1β、IL-18通路与SMPP患儿预后关系密切,NLRP3、IL-1β、IL-18高表达是患儿预后的独立危险因素,三项联合预测SMMP患儿预后不良的效能较高,可为临床降低预后不良风险提供帮助。

IL-18结合蛋白在创伤性颅脑损伤大鼠认知功能障碍中的作用及其机制

目的探究IL-18结合蛋白(IL-18BP)在创伤性脑损伤(TBI)大鼠认知功能障碍中的作用及其机制。方法120只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、TBI组、TBI+IL-18BP组(经尾静脉注射IL-18BP 1.5 mg/kg)与TBI+IL-18BP+ADU-S100组(经尾静脉注射IL-18BP1.5 mg/kg,经腹腔注射ADU-S10020 mg/kg),每组30只。应用自由落体法建立TBI模型,造模后30 d行水迷宫实验检测大鼠认知功能,ELISA法检测大鼠血清IL-18、IL-18BP浓度,免疫荧光染色检测海马区星形胶质细胞GFAP、IL-18和cleaved-caspase-3荧光强度,Western blotting检测大鼠海马区干扰素基因刺激蛋白(STING)、磷酸化TANK结合激酶1(p-TBK1)、TBK1、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)、IRF3蛋白相对表达量。结果与假手术组比较,TBI组、TBI+IL-18BP组和TBI+IL-18BP+ADU-S100组大鼠逃逸潜伏期明显延长,穿越平台次数减少,目标象限活动时间百分比降低(P<0.0001),血清IL-18、IL-18BP浓度升高,海马区IL-18和cleaved-caspase-3荧光强度明显增强,STING、p-TBK1、p-IRF3表达明显上调(P<0.05);与TBI组比较,TBI+IL-18BP组大鼠逃逸潜伏期缩短,穿越平台次数增多,目标象限活动时间百分比增高(P<0.0001),血清IL-18浓度降低,IL-18BP浓度升高,海马区IL-18和cleaved-caspase-3荧光强度明显减弱,STING、p-TBK1、p-IRF3表达明显下调(P<0.05);与TBI+IL-18BP组比较,TBI+IL-18BP+ADU-S100组大鼠逃逸潜伏期延长,穿越平台次数减少,目标象限活动时间百分比降低(P<0.0001),血清IL-18浓度升高,IL-18BP浓度降低,海马区IL-18和cleaved-caspase-3荧光强度增强,STING、p-TBK1、p-IRF3表达明显上调(P<0.05)。结论IL-18BP可改善TBI大鼠的认知功能,其机制可能与抑制星形胶质细胞凋亡及抑制STING/TBK1/IRF3信号通路激活有关。

IL-18及IL-18结合蛋白、IFN-γ等血清炎性介质在囊型包虫病致Th1/Th2细胞偏移中的意义

目的探讨联合检测血清中白介素18(IL-18)和白介素18结合蛋白(IL-18BP)在囊型包虫病致Th1/Th2细胞偏移发生和发展中的作用。方法以25例健康者为HC组,28例囊性包虫病患者为CE组,28例囊性包虫病术后患者为PCE组。采用酶联免疫吸附法检测3组患者血清IL-18、干扰素γ(IFN-γ)、白介素2(IL-2)和IL-18BP、白介素4(IL-4)水平;采用免疫比浊法检测3组患者血清C反应蛋白(CRP)、补体3(C3)、补体4(C4)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白E(IgE)水平。结果 CE组血清IL-18、IFN-γ、IL-2、C3及C4水平明显低于HC组和PCE组,差异有统计学意义(P<0.05);CE组血清IL-18BP、IL-4、CRP、IgM、IgG及IgE水平明显高于HC组和PCE组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清IFN-γ、IL-18及IL-18BP在肝囊型包虫病所致的Th1/Th2偏移发生和发展过程中具有协同及相互制约的作用。

哮喘患者嗜酸性粒细胞富集群中IL-18及其结合蛋白和受体水平增加

目的探讨哮喘患者血液嗜酸性粒细胞富集群中白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素18结合蛋白(IL-18BP)和白细胞介素18受体(IL-18R)的表达变化及其相关性。方法收集哮喘患者和门诊正常人群的外周静脉血,用蒿草花粉、尘螨和梧桐花粉粗提液刺激血液,流式细胞术检测嗜酸性粒细胞富集群中IL-18、IL-18BP及IL-18R的表达并分析其相关性。结果哮喘患者嗜酸性粒细胞富集群中IL-18+细胞比例较正常人升高达15倍。尘螨、梧桐花粉粗提液刺激哮喘患者血液后,嗜酸性粒细胞富集群中IL-18+细胞比例分别升高约1.3倍和1.5倍;梧桐花粉粗提液刺激哮喘患者血液后,嗜酸性粒细胞富集群IL-18BP^+细胞的平均荧光强度(MFI)升高约1.5倍,IL-18R+细胞比例升高约2倍。此外,哮喘患者血液经过敏原激发后嗜酸性粒细胞群中IL-18BP+细胞和IL-18R^+细胞的表达呈正相关(r=0.639)。然而,正常人血液嗜酸性粒细胞富集群中IL-18、IL-18BP和IL-18R的变化不明显。结论嗜酸性粒细胞表达的IL-18、IL-18BP和IL-18R可能与哮喘炎症反应有关。

类风湿性关节炎患者血清和滑液IL-18及IL-18结合蛋白的水平及意义

目的 研究类风湿性关节炎 (RA)患者血清、滑液中白细胞介素 18(IL 18)及IL 18结合蛋白 (IL 18BP)的水平 ,探讨他们在RA致病中的作用。方法 应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA)和生物学方法分别测定RA患者血清、滑液中IL 18及IL 18BP水平和生物活性 ,同时采用硝酸酶还原法及竞争ELISA分别检测一氧化氮 (NO)和前列腺素E2 (PGE2 )的含量。以因外伤截肢者作对照。结果 RA患者血清、滑液中IL 18水平和生物活性均显著高于对照组 ,且滑液中量及活性比血清中高 ;而IL 18BP水平RA患者明显低于对照组。结论 IL 18的过度表达以及IL 18BP表达的相对不足 ,可能是RA发病的机制之一 ;选择抑制过度表达的IL 18生物活性 ,及增加IL 18BP的表达 ,将是RA治疗的新途径。

银屑病患者血液嗜酸性粒细胞中IL-18、IL-18结合蛋白和IL-18受体的表达变化及其相关性研究

目的:检测银屑病(psoriasis)患者血液嗜酸性粒细胞群中白介素-18(interleukin-18,IL-18)、IL-18结合蛋白(binding protein,BP)和IL-18受体(receptor,R)的表达变化,并分析其相关性。方法:收集17例银屑病患者和18例健康人血液,用蒿草花粉、尘螨和梧桐花粉粗提液刺激,流式细胞术检测嗜酸性粒细胞富集群中IL-18、IL-18BP及IL-18R的表达,SPSS分析其相关性。结果:静息状态下,银屑病患者血液嗜酸性粒细胞富集群中IL-18+、IL-18R+细胞比例较正常人分别升高了3.7倍和4.1倍(Z=-3.070,P=0.002;Z=-4.753,P=0.000),而IL-18BP+细胞降低了87%(Z=-4.556,P=0.000);尘螨过敏原刺激银屑病患者血液后,嗜酸性粒细胞富集群中IL-18+细胞比例升高约1.5倍(Z=-3.548,P=0.000);梧桐花粉刺激银屑病患者血液后,嗜酸性粒细胞富集群IL-18BP+细胞升高约1.1倍(Z=-3.445,P=0.000)。此外,静息状态下银屑病患者血液嗜酸性粒细胞群中IL-18BP+细胞比例和IL-18+细胞比例均呈高度相关,Spearman相关系数分别为r=0.587,P=0.013。结论:上述结果提示嗜酸性粒细胞表达的IL-18、IL-18BP和IL-18R极可能参与银屑病。抗IL-18制剂和IL-18R阻断剂可能是治疗银屑病的潜在靶点。

稳定性与不稳定性心绞痛患者血浆IL-18、IL-18结合蛋白水平变化比较

目的探讨稳定性与不稳定性心绞痛患者血浆白细胞介素18(IL-18)、IL-18结合蛋白水平的变化,分析其临床意义。方法选取确诊为稳定性心绞痛(SAP组)与不稳定性心绞痛(UAP组)患者各50例,以双抗体夹心酶联免疫吸附法检测血浆白细胞介素18(IL-18)和IL-18结合蛋白水平。结果 UAP组血浆IL-18与IL-18结合蛋白水平均明显高于SAP组,比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论不稳定性心绞痛患者血浆IL-18、IL-18结合蛋白水平明显高于稳定性心绞痛患者,血浆IL-18、IL-18结合蛋白水平变化与冠心病患者病情进展关系密切。

来源于羊痘病毒的白介素-18结合蛋白基因的表达和活性研究

Some poxvirus genome of vaccinia subgenus encoded IL-18 binding prolein gene,which could block IL-18 activity but no sequence similarity to membrane IL-18 receptors.The sheep poxvirus genome subgenus also had this gene.A pair of primers spanning the ORF of goat IL-18 binding protein gene in sheep poxvirus genome were designed.This gene was cloned and expressed in E.coliwith pGEX-5X-3 plasmid.After being purified,the recombinant fusion protein could inhibit goat PBMC IFN- production induced by IL-18 in goat PBMC.