IL-18-PE38真核表达质粒的构建及表达

目的构建含有白细胞介素18(Interleukin18,IL-18)及毒素融合基因的真核表达质粒,并研究其在NIH3T3细胞中的表达情况。方法通过分子克隆技术,将IL-18-PE38(Pseudomonas exotoxin A)融合基因插入真核表达载体Psec Tag2B中,构建真核表达质粒Psec Tag2B-IL-18-PE38,重组质粒经限制性内切酶及PCR测定证实构建成功后,用脂质体介导法将其转染小鼠NIH3T3细胞中,然后用免疫荧光技术鉴定其表达。结果经酶切及PCR鉴定证实IL-18-PE38融合基因已被正确地插入真核表达载体Psec Tag2B中。荧光免疫细胞化学法荧光显微镜照片证实此重组基因可在其中表达。结论成功构建了重组的真核表达载体Psec Tag2B-IL-18-PE38并在体外细胞株获得表达,为下一步动物实验打下基础。

免疫毒素IL-18-PE38原核表达载体的构建及其鉴定(英文)

目的构建绿脓杆菌外毒素PE38融合鼠IL-18基因的原核表达载体,并鉴定其产物在大肠杆菌中的表达。方法首先经逆转录2聚合酶链反应(RT-PCR)获得小鼠IL-18基因,再通过酶切及连接反应,构建小鼠IL218与PE38融合基因的原核表达载体PRKL-IL18-PE38,重组载体经PCR、限制性内切酶及DNA序列测定证实连接片段正确后,转染感受态大肠杆菌BL-1,经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE和蛋白免疫印迹法分别测定其相对分子质量及特异性。结果成功构建了IL-18-PE38免疫毒素的原核表达载体,重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达,表达产物的相对分子质量与预期值一致,且所表达蛋白可被抗IL-18的特异性抗体所识别。结论获得了IL-18-PE38融合基因在原核系统的表达,为进一步研究其对Th1细胞的靶向细胞毒性及临床应用奠定了基础。

IL-18-PE38融合基因真核表达载体的构建及其在软骨细胞中的表达

目的构建含有白细胞介素-18(IL-18)及毒素融合基因的真核表达载体,并研究其在软骨细胞中的表达情况。方法通过分子克隆技术,将IL-18-PE38融合基因插入真核表达载体PsecTag2B中,构建真核表达载体PsecTag2B-IL-18-PE38,经EcoR单酶切及PCR鉴定。脂质体法将其转入原代软骨细胞,通过荧光免疫细胞化学法鉴定其瞬时表达。结果经EcoR单酶切及PCR鉴定证实IL-18-PE38融合基因成功克隆入真核表达载体PsecTag2B中。荧光免疫细胞化学法荧光显微镜照片证实此重组基因可在软骨细胞膜及细胞浆中表达。结论证实了IL-18-PE38融合基因可在软骨细胞中表达,为进一步研究其对类风湿关节炎的治疗奠定了基础。