miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

电针调控PI3K/Nrf2/HO-1通路对T2DM大鼠肾脏保护作用的研究

目的:观察电针对糖尿病大鼠肾脏磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)通路的影响,探讨其对肾脏的保护机制。方法:将18只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组6只。本研究采用2%链脲佐菌素溶液(35 mg/kg)注射于腹腔并饲以高糖高脂饲料构建2型糖尿病大鼠模型。电针组取双侧“胃脘下俞”“脾俞”“足三里”“三阴交”干预,于同侧“足三里”“胃脘下俞”给予电针刺激,1次/d,连续6周。于造模前、电针前后测量空腹血糖(FBG);酶比色法检测血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)及尿素(UREA)含量;荧光免疫法检测血清活性氧(ROS)含量;HE染色观察肾脏形态学变化;蛋白免疫印迹法检测肾脏PI3K、蛋白激酶B(Akt)、Nrf2和HO-1蛋白表达情况。结果:干预前,与空白组比较,模型组、电针组大鼠FBG均升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。干预6周后,与空白组比较,模型组大鼠血清FBG、MDA、ROS及UREA水平均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01),血清SOD含量、肾脏PI3K、Akt、Nrf2及HO-1蛋白表达均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠血清FBG、MDA、ROS及UREA水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01);血清SOD含量、肾脏PI3K、Akt、Nrf2及HO-1蛋白表达均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。HE染色显示模型组较空白组病理改变明显,电针组整体情况优于模型组。结论:电针可明显降低2型糖尿病大鼠氧化应激水平并缓解大鼠肾脏内部形态的病理性改变,对肾脏的保护机制或与激活PI3K/Nrf2/HO-1通路相关。

子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK、SULT1A3表达及与子宫肌瘤发生的相关性

目的:分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和硫酸基转移酶1A3(SULT1A3)在子宫肌瘤组织中的表达及与子宫肌瘤发生发展的可能关系。方法:收集2019年1月-2021年6月在本院行手术切除治疗的子宫肌瘤患者60例子宫肌瘤组织和正常子宫组织,分别采用RT-PCR技术和免疫组化法测定MMP-2、MLCK、SULT1A3的mRNA及蛋白表达,分析各指标表达与子宫肌瘤发生的相关性。结果:子宫肌瘤组织MMP-2(1.61±0.23)、MLCK(11.87±1.60)的mRNA相对表达量均高于正常子宫组织(1.05±0.09、6.14±1.02),SULT1A3的mRNA相对表达量(0.69±0.11)低于正常子宫组织(1.65±0.44);子宫肌瘤组织中MMP-2蛋白阳性率(68.3%)、MLCK蛋白阳性率(76.7%)均高于正常子宫组织(25.0%、26.7%),子宫肌瘤组织SULT1A3蛋白阳性率(61.7%)低于正常子宫组织(100.0%)(均P<0.05)。mRNA表达,MMP-2与MLCK呈正相关,MMP-2、MLCK与SULT1A3均呈负相关性;蛋白表达,MMP-2与MLCK蛋白表达呈正相关,MMP-2、MLCK与SULT1A3蛋白表达均呈负相关性(均P<0.05)。结论:子宫肌瘤组织中MMP-2、MLCK呈高表达,SULT1A3呈低表达,且各指标具有相关性,这种异常表达可能与子宫肌瘤的发生有关。

根尖周炎渗出液中IL-1β、PGE_2的检测及临床相关性

目的 :比较急、慢性根尖周炎根管渗出液中白细胞介素 1β(interleukin 1β ,IL 1β)和前列腺素E2(prostaglandinE2 ,PGE2 )的浓度 ;确定IL 1β、PGE2 浓度与临床、X线结果的相关性。方法 :标准纸尖法用于测量根管渗出液体积 ;ELISA法和RIA法分别用于检测根管渗出液中的IL 1β、PGE2 浓度。结果 :急性根尖周炎组IL 1β、PGE2 浓度、渗出液体积明显高于慢性根尖周炎组 (P <0 .0 0 0 1) ;IL 1β浓度与临床自发痛、根尖区肿胀、脓性渗出、渗出液臭味和阴影面积密切相关。结论 :IL 1β、PGE2 主要参与根尖周炎急性期炎症反应 ,并在其病变过程中发挥重要作用。

缺氧后线粒体Drp1通过LRRK2-HK2诱导mPTP过度开放的机制研究

目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况;通过超速离心法分离线粒体和细胞质成分蛋白;使用Co-IP和Westernblot检测缺氧或者干预Drp1、干预己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)后Drp1的表达分布情况、HK2与电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage dependent anion channel,VDAC)结合情况、Drp1与富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)结合情况;使用蛋白分子对接和蛋白芯片方法筛选Drp1的潜在结合蛋白及结合位点;使用Drp1抑制剂和点突变法用于相应机制探究。结果:缺氧后Drp1发生线粒体转位促使mPTP过度开放(P<0.05)。使用Mdivi-1减少线粒体Drp1表达后可抑制mPTP开放,减少细胞色素C(cytochrome C,CytC)释放(P<0.05)。缺氧后HK2-Thr473磷酸化水平减低引起的HK2线粒体分离会导致mPTP结构破坏,通过HK2 T473D点突变恢复HK2活性后,HK2与线粒体结合情况及mPTP开放情况明显改善(P<0.05)。Drp1蛋白芯片结果发现缺氧后Drp1可以与LRRK2结合并封闭其活性位点,通过Drp1 T595A点突变破坏Drp1-LRRK2结合后,HK2活性及HK2线粒体分离情况明显改善(P<0.05),mPTP开放情况明显减少(P<0.05)。结论:缺氧后线粒体Drp1通过封闭激酶LRRK2活性位点导致HK2 Thr473磷酸化水平减低及其线粒体分离,最终诱导mPTP过度开放。

ERK1/2信号转导途径在低切应力上调人脐静脉内皮细胞IL-8基因表达中的作用

血管内皮细胞位于血流和血管壁之间,除受化学因素的调节外还受力学因素的影响。切应力可通过刺激相应的力学感受系统来调节内皮细胞某些基因的表达,其中包括诱导内皮细胞表达IL- 8。为了阐明MAPK信号途径中的ERK1/ 2信号通路是否参与调控低切应力上调人脐静脉内皮细胞IL- 8基因表达,采用Western blot分析了低切应力(4.2 0 dyne/ cm2 )处理不同时间内皮细胞ERK1/ 2的磷酸化水平及TPK抑制剂Genistein,MEK抑制剂PD980 5 9对其磷酸化的影响;采用定量RT- PCR检测内皮细胞经低切应力刺激或给予阻断剂后再行切应力刺激等处理后IL- 8基因的表达。结果显示:(1)低切应力处理可引起内皮细胞ERK1/ 2蛋白磷酸化水平上调,其磷酸化水平与切应力作用时间有关,具有快速、双向性的特点(在刺激10 min时达到高峰,2 h左右降至未刺激水平) ,阻断剂Genistein和PD980 5 9处理后,ERK1/ 2磷酸化水平与低切应力刺激10 min比较明显降低;(2 )阻断剂Genistein,PD980 5 9可显著抑制低切应力所致的内皮细胞IL- 8m RNA上调。结果表明低切应力可通过ERK1/ 2信号途径上调人脐静脉内皮细胞IL- 8基因的表达。

核转录因子-κB、细胞外信号调节激酶1/2、转移相关蛋白-3在乳腺肿瘤组织中的表达研究

目的分析核转录因子-κB(NF-κB)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、转移相关蛋白-3(MTA-3)在乳腺肿瘤中的表达。方法选取我院2017年8月至2019年3月收治的60例乳腺肿瘤患者作为观察组,另取30例同期乳腺增生患者作为对照组。比较两组患者组织样本NF-κB、ERK1/2和MTA-3水平。结果观察组NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于对照组;MTA-3阳性检出率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);临床分期越高者、肿瘤直径越大者,NF-κB、ERK1/2阳性检出率越高,MTA-3阳性检出率低越低,差异有统计学意义(P<0.05)。Luminal A型、Luminal B型及HER2阳性分子分型患者NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于三阴型,MTA-3阳性检出率低于三阴型,差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移患者NF-κB、ERK1/2阳性检出率高于对照组,MTA-3阳性检出率低于无转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺肿瘤组织中存在NF-κB和ERK1/2的高阳性表达和MTA-3和低表达,并且与乳腺增生患者病理组织表达有明显差异,结合三者指标分析对鉴别诊断乳腺肿瘤、改善乳腺肿瘤干预时机有重要意义。

饲粮中添加不同比例黄芪副产物对绵羊脾脏中Toll样受体2和白细胞介素-1受体相关激酶4表达的影响

本试验旨在研究基础饲粮中添加不同比例黄芪副产物对绵羊脾脏中Toll样受体2(TLR2)和白细胞介素-1受体相关激酶4(IRAK4)表达的影响。选取健康、体重[(27.43±3.61)kg]接近的3月龄澳洲白与湖羊杂交F1公羔68只,随机分为4组,每组17只羊。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加2%(2%组)、4%(4%组)、6%(6%组)的黄芪副产物。预试期10 d,正试期60 d。结果表明:1)各组绵羊的终末体重、平均日增重和平均干物质采食量差异不显著(P>0.05)。2%组羔羊的脾脏指数显著高于对照组、4%组和6%组(P<0.05),而4%组、6%组与对照组之间差异不显著(P>0.05)。2)2%组绵羊脾脏中TLR2和IRAK4的mRNA和蛋白相对表达量显著高于对照组、4%组和6%组(P<0.05)。3)免疫组化染色发现TLR2蛋白主要定位在饲喂不同比例黄芪副产物绵羊脾脏红髓的脾窦中,IRAK4蛋白主要定位在饲喂不同比例黄芪副产物绵羊脾脏红髓的脾索中。由此可见,基础饲粮中添加2%的黄芪副产物不仅可以增加绵羊的脾脏指数,还可以上调脾脏中TLR2和IRAK4基因的表达,从而在机体的免疫调节中发挥作用。

尿激酶静脉溶栓治疗对急性轻型脑卒中患者血清脂蛋白相关磷脂酶A2、可溶性血管细胞黏附分子-1、基质金属蛋白酶-9水平及神经功能的影响

目的:探讨尿激酶静脉溶栓治疗对急性轻型脑卒中患者血清脂蛋白相关磷脂酶A 2(Lp-PLA 2)、可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平及神经功能的影响。方法:选取96例急性轻型脑卒中患者,根据是否接受溶栓治疗分为溶栓组(53例)、非溶栓组(43例)。溶栓组予以尿激酶静脉滴入+抗血小板治疗,非溶栓组予以抗血小板治疗,两组均治疗7 d。观察两组入院时、治疗24 h、7 d后的神经功能;入院时、治疗7 d后的血清细胞因子水平及研究期间不良反应发生情况。结果:治疗后24 h、7 d后,两组的卒中量表(NHISS)评分为0~2分患者所占比例均较入院时升高,且溶栓组高于非溶栓组(92.50%、88.70%与75.60%、69.00%,P<0.05)。治疗7 d后,两组血清Lp-PLA 2、sVCAM-1、MMP-9水平均较入院时降低,且溶栓组低于非溶栓组(P<0.05)。研究期间,两组不良反应发生率相比无统计学差异(P>0.05)。结论:尿激酶静脉溶栓治疗急性轻型脑卒中,可有效降低患者血清Lp-PLA 2、sVCAM-1、MMP-9水平,控制机体炎症反应,并改善其神经功能,且安全性良好。

葡萄籽原花青素通过细胞外信号调节激酶1/2途径对放射性脑损伤大鼠海马区生长相关蛋白-43活性的影响

目的观察葡萄籽原花青素(GSPE)对放射性脑损伤大鼠的防治作用,并分析可能的保护机制。方法 72只3月龄雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组(n=18)、模型组(n=18)、低剂量GSPE组(n=18)和高剂量GSPE组(n=18)。用直线加速器进行脑部照射22 Gy制作放射性脑损伤模型。采用穿梭箱实验检测大鼠学习能力;HE染色观察海马区神经细胞组织形态变化;RT-PCR法检测生长相关蛋白-43(GAP-43)m RNA表达,Western blotting检测磷酸化的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达。结果与模型组比较,各GSPE组动物穿梭箱主动回避反应率显著升高(P<0.001),被动回避潜伏期显著缩短(P<0.001);海马区神经细胞结构损伤减轻;GAP-43 m RNA和磷酸化ERK1/2表达水平增高(P<0.001)。且高剂量GSPE组显著优于低剂量GSPE组(P<0.001)。模型组中GAP-43 m RNA表达水平与磷酸化ERK1/2水平呈正相关(r=0.764,P<0.001);低剂量GSPE组和高剂量GSPE组中GAP-43 m RNA表达水平与磷酸化ERK1/2水平呈正相关(r=0.814,0.822,P<0.001)。结论 GSPE通过ERK1/2途径提高大鼠海马区GAP-43表达,发挥防治放射性脑损伤作用。

转录因子Nrf2／Bach1及MAPK激酶调控γ-GCS在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用

目的:研究转录因子红系衍生核因子相关因子-2(Nrf2)及BTB-CNC异体同源体1(Bach1)在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中的表达,探索其感受氧化应激调控谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的可能机制。方法:复制慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,通过免疫组化、Westernblotting、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术研究肺组织Nrf2、Bach1、γ-GCSmRNA及其蛋白和p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白的表达。结果:免疫组化结果显示COPD组p-ERK、p-p38、γ-GCS、Nrf2蛋白水平较对照组升高(P<0.01),而Bach1、p-JNK蛋白水平无差异(P>0.05);Westernblotting结果显示COPD组p-ERK、p-JNK、Nrf2核蛋白质水平较对照组升高(P<0.01),Bach1、p-p38浆蛋白水平较对照组升高(P<0.01)而Bach1核蛋白水平较对照组降低(P<0.01);RT-PCR结果显示,COPD组Nrf2、Bach1mRNA水平较对照组无差异(P>0.05),而γ-GCSmRNA水平升高(P<0.01);直线相关分析结果表明,γ-GCSmRNA表达水平与Nrf2、p-ERK、p-p38总蛋白质水平,Nrf2、p-ERK、p-JNK核蛋白水平和Bach1、p-p38浆蛋白质水平均呈正相关(P<0.01),而与Bach1核蛋白质水平呈负相关(P<0.01);Nrf2核蛋白质水平与p-ERK、p-JNK核蛋白水平呈正相关(P<0.01),而Bach1核蛋白质水平与p-ERK、p-JNK核蛋白水平呈负相关(P<0.01)。结论:在慢性阻塞性肺疾病的发病过程中转录因子Nrf2/Bach1可能在核内竞争反向调节抗氧化基因γ-GCS的表达;信号转导蛋白p-ERK、p-JNK在调控Nrf2/Bach1核内平衡中起重要作用,且调控主要发生在转录后水平;γ-GCS可能还存在其它转录调节机制。

黄芪甲苷和三七的三种有效成分配伍对小鼠脑缺血/再灌注后氧化应激和Nrf2/HO-1途径的影响

目的研究黄芪的主要有效成分黄芪甲苷分别与三七的有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1配伍对小鼠脑缺血/再灌注后氧化应激和核转录因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1途径的影响。方法C57BL/6小鼠随机分组,连续给药3 d,末次给药1 h后,结扎双侧颈总动脉造成脑缺血20 min,再灌注24 h。测定脑组织丙二醛(malonyldialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH),HO-1mRNA表达,脑组织胞核、胞质Nrf2和全细胞HO-1蛋白表达。结果①脑缺血/再灌注后,脑组织MDA、NO含量明显升高,SOD活性和GSH含量明显降低。黄芪甲苷可降低脑组织MDA、NO含量,人参皂苷Rg1能降低脑组织NO含量。黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1和黄芪甲苷+三七皂苷R1均能明显降低脑组织MDA和NO含量,且黄芪甲苷与人参皂苷Rb1、三七皂苷R1配伍的效应大于人参皂苷Rb1单用和三七皂苷R1单用。②脑缺血/再灌注后,脑组织胞核和胞质中Nrf2蛋白含量及核转位率升高,同时HO-1mRNA和蛋白表达增强。各给药组能不同程度地降低胞质Nrf2蛋白含量,升高胞核Nrf2含量,使Nrf2核转位率升高,且黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1、黄芪甲苷+三七皂苷R1的作用强于各有效成分单用。黄芪甲苷、人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1、黄芪甲苷+三七皂苷R1可使脑组织HO-1mRNA和蛋白表达明显增加,黄芪甲苷+人参皂苷Rg1、黄芪甲苷+人参皂苷Rb1、黄芪甲苷+三七皂苷R1脑组织HO-1mRNA和蛋白的增加明显高于各有效成分单用。且黄芪甲苷+人参皂苷Rg1升高胞核Nrf2蛋白、提高Nrf2核转位率的作用强于黄芪甲苷+人参皂苷Rb1,增加HO-1基因和蛋白表达的作用强于黄芪甲苷+人参皂苷Rb1和黄芪甲苷+三七皂苷R1。结论黄芪甲苷分别与三七的3种有效成分配伍可增强其抗脑缺血/再灌注后氧化应激损伤的作用,其作用机制可能与激活Nrf2/HO-1信号途径,促进Nrf2合成和核转位,从而促进下游抗氧化基因HO-1等的表达有关,黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍的效应更为明显。

MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡

目的:研究肌原纤维形成调节因子1(MR-1)是否通过抑制蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)途径减轻缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡。方法:在原代培养的乳大鼠心肌细胞H/R模型上,采用Annexin V/PI双标法检测心肌细胞的凋亡率;以Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化PERK、Nrf2、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Bcl-2和Bax的蛋白水平,研究过表达或敲低对于H/R致心肌细胞凋亡的影响及其与PERK/Nrf2途径活化的关系。结果:H/R引起心肌细胞凋亡;过表达MR-1减轻H/R引起的细胞凋亡(P<0.01),下调CHOP表达(P<0.05),引起Bcl-2/Bax值升高(P<0.01),并抑制H/R诱导的PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4表达(P<0.01)。敲低MR-1加重H/R引起的细胞凋亡(P<0.01)、CHOP表达上调(P<0.05)和Bcl-2/Bax值下降(P<0.01),并加重H/R诱导的PERK磷酸化(P<0.05)、Nrf2核转位和ATF4表达(P<0.01)。结论:MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径而减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡。

ERK1/2-Runx2信号通路在TNF-α对牙周膜干细胞成骨分化影响中的作用

目的:探讨ERK1/2-Runx2信号通路在TNF-α对牙周膜干细胞成骨分化影响中的作用。方法:分离和培养牙周膜干细胞,将其分为对照组(成骨诱导液培养)、TNF-α组(成骨诱导液培养+TNF-α培养)和激动剂组(成骨诱导液培养+TNF-α+ERK培养)。ALP和茜素红染色测定成骨分化功能,采用Western blot测定牙周膜干细胞Osterix、OPN、ERK1/2、p-ERK1/2、Runx2蛋白水平。结果:与对照组比较,TNF-α组ALP染色和茜素红染色程度低,ALP活性和矿化结节降低(P<0.05),Osterix和OPN蛋白水平降低(P<0.05),p-ERK1/2、Runx2蛋白水平降低(P<0.05);与TNF-α组比较,激动剂组ALP染色和茜素红染色程度介于对照组和TNF-α组之间,ALP活性和矿化结节升高(P<0.05),Osterix和OPN蛋白水平升高(P<0.05),p-ERK1/2、Runx2蛋白水平升高(P<0.05)。三组牙周膜干细胞ERK1/2蛋白水平比较无明显差异(P>0.05)。结论:TNF-α可能通过影响ERK1/2-Runx2信号通路从而抑制牙周膜干细胞的成骨分化。

电针水沟穴对大脑中动脉闭塞大鼠脑缺血后微小RNA-126及靶基因的影响

目的观察电针水沟穴对大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠脑缺血后微小RNA-126（miR-126）及其靶基因磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚单位（PIK3R2）mRNA、出芽相关蛋白-1（SPRED1）mRNA表达的影响，从血管新生角度探讨电针治疗脑缺血的可能机制。方法将20只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、治疗组，每组5只。参照改良Longa线栓法复制MCAO大鼠模型，假手术组不插入线拴。制模后治疗组于水沟穴（大鼠唇裂鼻尖下1mm中处，向上斜剌1mm）与右耳根部皮肤接G6805—1A型治疗仪进行电针治疗，1mA电流、2Hz，持续留针30min，连续治疗3d；正常组、假手术组、模型组制模后不进行处理。采用Berderson评分评价大鼠神经功能缺损程度；用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测miR-126及PIK3R2、SPRED1的mRNA表达。结果与正常组比较，模型组大鼠有不同程度的神经功能缺损，Berderson评分明显增高（分：11．20±1．64比0，P〈0．01），治疗后Berderson评分较模型组明屁降低（分：7．20±1．48比11．20±1．64，P〈0．01）。模型组miR-126、PIK3R2及SPRED1的mRNA表达均较正常组明显升高[miR-126（2^-△△Cr）：1．13±0．48比0．16±0．12．PIK3R2mRNA（2^-△△Cr）：12．03±6．09比0．42±0．33，SPRED1mRNA（2^-△△Cr）：8．77±3．85比0．21±0．40，均P〈0．01]；治疗组miR-126表达较模型组明显升高（2^-△△Cr：1．93±0．81比1．13±0．48），PIK3R2、SPRED1的mRNA表达较模型组明照明显降低[PIK3R2mRNA（2^-△△Cr）：5．78±3．61比12．03±6．09，SPRED1mRNA（2^-△△Cr）：3．90±3．24比8．77±3．85，P〈0．05或JP〈0．01]。结论电针水沟穴能促大鼠脑缺血后神经功能体征的恢复，其机制可能与其调控miR-126及其靶基因从而促进了脑血管新生有关.

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

复发性生殖器疱疹患者血清IL-2及其受体、IL-6、sICAM-1和sVCAM-1水平的研究

目的 了解复发性生殖器疱疹患者的细胞免疫功能及血清可溶性粘附分子水平。方法 采用 EL ISA法检测了 34例复发性生殖器疱疹患者血清中白介素 - 2 (IL- 2 )及其可溶性受体 (s IL- 2 R)、白介素 - 6 (IL- 6 )、细胞间粘附分子 - 1(s ICAM- 1)和血管细胞粘附分子 - 1(s VCAM- 1)水平。结果 患者血清 IL- 2及 IL- 6明显低于正常对照(P<0 .0 1) ,s IL- 2 R、s ICAM- 1和 s VCAM- 1明显高于对照 (P<0 .0 5 ) ;发作期与缓解期的患者各项指标比较无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 复发性生殖器疱疹患者存在细胞免疫缺陷和血清高粘附分子水平 。

IRAK-4在白介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLRs)介导的炎症信号通路中的关键作用

白介素-1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4;IRAK-4)是近年来发现的参与机体先天性免疫反应过程中的关键分子。它与另外3个成员IRAK-1、IRAK-2、IRAK-M同属于IRAK家族,目前经过对IRAK-4分子的激酶活性以及其对炎症反应的正向和负向的调控作用的研究表明,IRAK-4分子联系着上下游的信号转导,在TLRs/IL-1R介导的炎症信号通路中的作用更为关键。本文就IRAK-4分子的活性、以及IRAK-4分子在TLRs/IL-1R介导的炎症信号转导通路中的作用作一综述。以期设计出针对IRAK-4特异性的药物,或者通过基因治疗手段干预IRAK-4表达,为感染控制提供新的思路,开发出新的抗炎药物。

乳腺癌患者手术前后血清IL-2、MMP-9、TK1和sFas测定的临床价值

目的:讨论乳腺癌患者血清IL-2、MMP-9、TK1和sFas四项指标在手术治疗前后测定的临床价值。方法:血清IL-2采用放射免疫分析;MMP-9和sFas采用酶联免疫吸附分析法检测;TK1测定采用CIS-型免疫印迹-增强发光检测系统检测。结果:本文结果显示,血清IL-2水平对照组与正常组无显著差异(P>0.05),术前组分别低于对照组和正常组(P<0.05,P<0.01),术后组较术前组升高显著(P<0.05)。MMP-9水平则术前组和对照组均显著高于正常组(P<0.05,P<0.01),术后组较术前组下降显著(P<0.05),但仍显著高于正常组(P<0.05)。TK1水平术前组和对照组均显著高于正常组(P<0.05,P<0.01),同时术前组又显著高于对照组(P<0.01),术后组较术前组下降显著(P<0.05),但仍显著高于正常组(P<0.05)。sFas水平的变化同MMP-9。结论:患者血清4项指标手术前后发生了显著变化有可能与乳腺癌的发生和病理过程有关,其测定对于了解其病理机制和评估预后有一定帮助。

死亡相关蛋白激酶1及结节性硬化复合物蛋白2基因在胰腺癌组织中的表达及与预后的关系

目的通过生物信息学方法研究死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)和结节性硬化复合物蛋白2(TSC2)基因在胰腺癌中的表达情况,并探讨分析其与预后的关系。方法利用来自癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库的胰腺癌患者数据进行Kaplan-Meier分析,进而深层次探讨DAPK1和TSC2基因表达水平与患者总生存期或无进展生存期(PFS)的关系,同时,对影响预后的因素进行Cox多因素分析,以及分析胰腺癌中DAPK1和TSC2基因启动子的甲基化水平。此外,通过双荧光素酶报告基因检测系统,验证靶向DAPK1的微小RNA(miR),并应用定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法验证在胰腺癌细胞中miR-324-5p负调控DAPK1的表达。结果多因素分析显示,肿瘤分级(P=0.005)、R0切除(P<0.001)及TSC2表达情况(P=0.005)是影响胰腺癌患者PFS的独立危险因素;肿瘤部位(P=0.006)、病理类型(P=0.002)及分子靶向治疗(P<0.001)是影响胰腺癌患者总生存期的独立危险因素。DAPK1基因低表达且TSC2基因高表达的胰腺癌患者具有更好的总生存期(P=0.024)。DAPK1和TSC2甲基化水平与相应的mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.69、-0.37,均P<0.05)。体外实验结果证实,过表达的miR-324-5p显著抑制了胰腺癌Pa Ca-2和PANC-1细胞DAPK1 mRNA和蛋白的表达[mRNA:(0.37±0.02)比(1.00±0.02)、(0.53±0.01)比(1.00±0.06);蛋白:(0.54±0.06)比(1.04±0.12)、(0.63±0.11)比(1.01±0.11)](均P<0.05)。结论DAPK1基因联合TSC2基因的表达情况可以预测胰腺癌患者的预后;在胰腺癌组织中,DAPK1和TSC2启动子的低甲基化水平是DAPK1和TSC2高表达的重要因素;miR-324-5p负调控DAPK1的表达,有望成为胰腺癌靶向治疗的新靶点。